1 植物源性食品中氰氟草酯及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法 - 征求意見稿-5.10

Q/LB.□XXXXX-XXXXICSFORMTEXT67.050CCSFORMTEXTX04FORMTEXT34FORMTEXT安徽省地方標準DBFORMTEXT34/TFORMTEXTXXXX—FORMTEXTXXXXFORMTEXTFORMTEXT植物源性食品中氰氟草酯及其代謝物殘留量的測定FORMTEXTDeterminationoftheresiduesofCyanofluorideanditsmetaboliteinplant-derivedfoodsFORMDROPDOWNFORMTEXTFORMDROPDOWNFORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX發(fā)布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實施FORMTEXT安徽省市場監(jiān)督管理局??發(fā)布STYLEREF標準文件_文件編號DB34/TXXXX—XXXX前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由安徽省食品質(zhì)量安全檢驗方法標準化技術(shù)委員會提出。本文件由安徽省市場監(jiān)督管理局歸口。本文件起草單位：安徽省食品藥品檢驗研究院（安徽國家農(nóng)副加工食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心）、安徽省農(nóng)業(yè)科學院植物保護與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究所、安徽省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院本文件主要起草人：暫略植物源性食品中氰氟草酯及其代謝物殘留量的測定一、植物源性食品中氰氟草酯的測定氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法范圍本文件規(guī)定了植物源性食品大米、小麥粉中氰氟草酯殘留量的測定方法。本文件適用于植物源性食品大米、小麥粉中氰氟草酯殘留量的測定。本文件中的氰氟草酯方法的最低檢出濃度（LOQ）為0.02mg/kg。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2763食品安全國家標準食品中農(nóng)藥最大殘留限量。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。原理試樣用乙酸乙酯提取，提取液經(jīng)凈化，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測，外標法定量。試劑與材料除非另有說明，在分析中僅使用分析純的試劑，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。試劑無水硫酸鎂。乙酸乙酯：色譜純。標準品氰氟草酯（C20H20FNO4，CAS號：122008-85-9），純度≥95.0%。標準溶液的配制5.3.1氰氟草酯標準儲備液（1000μg/mL）：準確稱取按其純度折算為100%質(zhì)量的氰氟草酯（5.2）標準品10.0mg（精確至0.1mg）于10mL容量瓶中，用乙酸乙酯（5.1.2）溶解并定容至刻度，搖勻，配制成濃度為1mg/mL的標準儲備液，溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，-20℃保存，有效期3個月。5.3.2氰氟草酯標準使用液（100μg/mL）：準確移取氰氟草酯儲備液（14.3.1）2.0mL（精確至0.1mL）于20mL容量瓶中，用乙酸乙酯（5.1.2）溶解并定容至刻度，搖勻，配制成濃度為100μg/mL的標準使用液，溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，-20℃保存，有效期1個月。5.4材料陶瓷均質(zhì)子：2cm（長）×1cm（外徑）。微孔濾膜(有機相)：0.22μm或性能相當者。乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（PSA）：粒徑40μm～60μm。主要儀器和設(shè)備氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀：配有電子轟擊源（EI）。恒溫振蕩器。渦旋裝置。電子天平：感量0.01g和0.1mg。離心機：轉(zhuǎn)速≥4200r/min。分析步驟試樣的制備與貯藏按照GB2763中附錄A的規(guī)定執(zhí)行。隨機取不少于500g樣品混勻，粉碎后充分混勻，放入聚乙烯瓶或袋中，置于-18℃及以下條件保存。試樣處理稱取5g試樣（精確至0.01g）于50mL塑料離心管中，加5mL水渦旋混勻，靜置30min，再加入10mL乙酸乙酯（5.1.2），3g無水硫酸鎂（5.1.1）及1顆陶瓷均質(zhì)子（5.4.1），蓋上離心管蓋，劇烈恒溫（40℃±5℃）振蕩1min后，4200r/min離心5分鐘，吸取上清液5mL加到內(nèi)含750mg硫酸鎂（5.1.1）和250mgPAS粉（5.4.3）的20mL塑料離心管中，渦旋混勻1分鐘，4200r/min離心5分鐘，吸取適量上清液過微孔濾膜（5.4.2），待測定。測定儀器參考條件色譜柱：DB-5MS,(5%-苯基)-甲基聚硅氧烷的苯基芳基聚合物毛細管柱，30m×0.25mm×0.25μm，或相當者；色譜柱溫度：40℃保持1min，然后以40℃每分鐘升到120℃，再以5℃每分鐘升到240℃，再以12℃每分鐘升到300℃，保持5min；載氣：氦氣，純度≥99.999%，流速1.0mL/min；進樣口溫度：280℃；進樣體積：1μL；進樣方式：分流進樣：分流比10∶1；離子轟擊源：70eV；離子源溫度：230℃；傳輸線溫度：280℃；溶劑延遲：3min；多反應(yīng)監(jiān)測：氰氟草酯的保留時間、定量離子對、定性離子對和碰撞電壓見表1：氰氟草酯的保留時間、定量離子對、定性離子對和碰撞電壓名稱保留時間min定量離子對碰撞電壓V定性離子對碰撞電壓V氰氟草酯30.25256.1-120.112357.1-256.110標準工作曲線選擇與被測樣品基質(zhì)性質(zhì)相同或相似的空白樣品按照7.1-7.2部分進行前處理，得到空白基質(zhì)溶液。精確吸取一定量的標準溶液，逐級用空白基質(zhì)溶液稀釋成質(zhì)量濃度為0.01mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.40mg/L的基質(zhì)匹配工作標準溶液，供氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定。以氰氟草酯定量離子的質(zhì)量色譜圖峰面積為縱坐標，相對應(yīng)的基質(zhì)匹配標準工作溶液質(zhì)量濃度為橫坐標，繪制基質(zhì)匹配標準工作曲線。定性及定量保留時間被測試樣中氰氟草酯色譜峰的保留時間與相應(yīng)氰氟草酯標準色譜峰的保留時間相比較，相對誤差應(yīng)在±2.5%之內(nèi)。定量離子、定性離子計子離子豐度比在相同試樣條件下進行樣品測定時，如果檢出的色譜峰的保留時間與標準樣品相比一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，目標化合物選擇的子離子均出現(xiàn)，而且同一檢測批次，對同一化合物，樣品中目標化合物的離子豐度比與質(zhì)量濃度相當?shù)幕|(zhì)標準溶液相比，其允許偏差不超過表2規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在目標農(nóng)藥。定性時相對離子豐度比的最大允許偏差相對離子豐度＞50＞20-50（含）＞10-20（含）≤10允許相對偏差±20±25±30±50定量外標法定量。試樣溶液的測定將基質(zhì)匹配標準工作溶液和試樣溶液依次注入各1μL氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中。保留時間和離子豐度比定性，測得定量離子的質(zhì)量色譜圖峰面積，待測樣液中農(nóng)藥的響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測的定量測定線性范圍之內(nèi)，超過線性范圍時應(yīng)根據(jù)測定濃度進行適當倍數(shù)稀釋后再進行分析。平行試驗按以上步驟對同一試樣進行平行試驗測定?？瞻自囼灣患釉嚇油猓捎猛耆嗤臏y定步驟進行平行操作。結(jié)果計算試樣中的氰氟草酯殘留量以質(zhì)量分數(shù)ω計，單位為毫克每千克（mg/kg），按公式(1)計算： (AUTONUM)式中：ω——樣品中氰氟草酯殘留量（mg/kg）；c——從基質(zhì)匹配標準工作曲線中得到的試樣溶液中氰氟草酯的質(zhì)量濃度的數(shù)值，單位為毫克每升（mg/L）；V——樣液中最終定容體積（mL）；f——試樣溶液稀釋倍數(shù)；m——稱取的試樣量（g）。計算結(jié)果需扣除空白值，測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留2位有效數(shù)字，含量超過0.1mg/kg時保留3位有效數(shù)字。方法的準確度和精密度準確度本方法在0.02～0.80mg/kg的添加濃度范圍內(nèi)，氰氟草酯的回收率在87.0%～112%。精密度在重復性條件下，獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。二、植物源性食品中氰氟草酯代謝物的測定液相色譜-質(zhì)譜法范圍本文件規(guī)定了植物源性食品大米、小麥粉中氰氟草酯代謝物殘留量的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定方法。本文件適用于植物源性食品大米、小麥粉中氰氟草酯代謝物殘留量的測定。本文件中的氰氟草酯代謝物氰氟草酸、氰氟草二酸方法的定量限濃度（LOQ）分別為0.02、0.05mg/kg。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2763食品安全國家標準食品中農(nóng)藥最大殘留限量。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。原理試樣用乙腈-水提取，經(jīng)濾膜過濾后經(jīng)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測，基質(zhì)匹配標準溶液外標法定量。試劑和材料除非另有說明，在分析中僅使用分析純的試劑，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。試劑乙腈（CH3CN）：色譜純。甲醇（CH3OH）：色譜純。乙腈-水溶液（1∶1，體積比）：量取50mL水加入50mL乙腈中，混勻。甲酸（HCOOH）：色譜純。0.01%（V/V）甲酸水：量取0.1mL甲酸用水定容到1000mL，混勻。標準品氰氟草酸（C16H12FNO4，CAS號：122008-78-0）；純度≥95.0%。氰氟草二酸（C16H13FO62，CAS號：52564-94-6）：純度≥98.0%。標準溶液的配制14.3.1氰氟草酸標準儲備液（100μg/mL）：準確稱取按其純度折算為100%質(zhì)量的氰氟草酸（14.2.1）標準品1.0mg（精確至0.1mg）于10mL容量瓶中，用乙腈（14.1.1）溶解并定容至刻度，搖勻，配制成濃度為100μg/mL的標準儲備液，溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，-20℃保存，有效期3個月。14.3.2氰氟草二酸標準儲備液（100μg/mL）：準確稱取按其純度折算為100%質(zhì)量的氰氟草二酸（14.2.2）標準品1.0mg（精確至0.1mg）于10mL容量瓶中，用乙腈（14.1.1）溶解并定容至刻度，搖勻，配制成濃度為100μg/mL的標準儲備液，溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，-20℃保存，有效期3個月。14.3.3氰氟草酸標準中間液（10μg/mL）：準確移取氰氟草酸標準儲備液（14.3.1）1.0mL，用50%乙腈水（14.1.3）稀釋至10mL，搖勻，制成10μg/mL的氰氟草酸標準中間液，-20℃保存，有效期1個月。14.3.4氰氟草二酸標準中間液（10μg/mL）：準確移取氰氟草二酸標準儲備液（14.3.2）1.0mL，用50%乙腈水（14.1.3）稀釋至10mL，搖勻，制成10μg/mL的氰氟草二酸標準中間液，-20℃保存，有效期1個月。材料微孔濾膜(有機相)：0.22μm或性能相當者。主要儀器和設(shè)備高效液相色譜-三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀，配ESI源。電子天平：感量0.1g和0.1mg。離心機：轉(zhuǎn)速≥8000r/min。恒溫振蕩器。渦旋混合器。分析步驟試樣的制備與貯藏按照GB2763中附錄A的規(guī)定執(zhí)行。隨機取不少于500g樣品混勻，粉碎后充分混勻，放入聚乙烯瓶或袋中，置于-18℃及以下條件保存。試樣處理稱取5.0g試樣（精確至0.01g）于50mL塑料離心管中，加入5mL水混勻，渦旋2min，靜置10min，加入10mL乙腈-水（14.1.3）及1顆陶瓷均質(zhì)子，蓋上離心管蓋，搖勻，恒溫（37℃±5℃）振蕩15min后，5000r/min離心5分鐘，上清液轉(zhuǎn)入20mL容量瓶中，于殘渣中加入5mL乙腈-水（14.1.3）渦旋，恒溫振蕩，離心5分鐘后，將上清液轉(zhuǎn)入同一20mL容量瓶中，用乙腈-水（14.1.3）定容，混勻。吸取適量上清液過微孔濾膜（14.2.1），待測定。測定液相色譜參考條件色譜柱：C18色譜柱（2.1×100mm，1.7μm）或性能相當者；柱溫：40℃；流動相：A為0.01%甲酸水，B為甲醇，梯度洗脫條件見表3；流速：0.30mL/min；進樣體積：1μL。流動相梯度洗脫條件時間min流動相A%流動相B%0.019551.009553.0050506.0030709.0059510.0059510.595511.5955質(zhì)譜參考條件離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：負離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；霧化氣流速：3.0L/min；加熱氣流速：10.0L/min;干燥氣流速：8.0L/min;離子源接口電壓：3.0kV；脫溶劑管溫度：250℃；接口溫度：350℃；加熱模塊溫度：400℃；其他質(zhì)譜參數(shù)見表4。定性離子對、定量離子對和質(zhì)譜分析參數(shù)化合物名稱定性離子對m/z定量離子對m/zQ1PreBiasV碰撞能量eVQ3PreBiasV氰氟草酸299.95＞228.00299.95＞228.00111313299.95＞208.00222130氰氟草二酸319.00＞247.00319.00＞247.00161415319.00＞203.00172219基質(zhì)匹配工作標準曲線選擇與被測樣品基質(zhì)性質(zhì)相同或相似的空白樣品按照16.1-16.2部分進行前處理，得到空白基質(zhì)溶液。分別精確吸取一定量的氰氟草酸標準中間液（14.3.3）和氰氟草二酸標準中間液（14.3.4），用空白基質(zhì)溶液稀釋作為系列混合標準工作液，氰氟草酸濃度依次為5.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL，氰氟草二酸濃度依次為12.5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、125ng/mL、200ng/mL的基質(zhì)匹配工作標準溶液，供液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定。以農(nóng)藥定量離子的質(zhì)量色譜圖峰面積為縱坐標，相對應(yīng)的基質(zhì)匹配標準工作溶液質(zhì)量濃度為橫坐標，繪制基質(zhì)匹配標準工作曲線。定性與定量保留時間被測試樣中目標農(nóng)藥色譜峰的保留時間與相應(yīng)標準色譜峰的保留時間相比較，相對誤差應(yīng)在+2.5%之內(nèi)。離子豐度比在相同試樣條件下進行樣品測定時，如果檢出的色譜峰的保留時間與標準樣品相比一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，目標化合物選擇的子離子均出現(xiàn)，而且同一檢測批次，對同一化合物，樣品中目標化合物的離子豐度比與質(zhì)量濃度相當?shù)幕|(zhì)標準溶液相比，其允許偏差不超過表5規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在目標農(nóng)藥。定性時離子豐度比的最大允許偏差相對離子豐度＞50＞20-50（含）＞10-20（含）≤10允許相對偏差±20±25±30±50定量外標法定量。試樣溶液的測定將基質(zhì)匹配標準工作溶液和試樣溶液依次注入各1μL液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中。保留時間和離子豐度比