幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1在膽囊癌中的作用機制

幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1在膽囊癌中的作用機制第一部分：CHI3L1蛋白在膽囊癌組織中的表達及其臨床意義[目的]研究檢測CHI3L1蛋白在膽囊癌組織中的表達,研究其與臨床病理因素間的關(guān)系及其對膽囊癌預后的影響。[方法]應用免疫組織化學法檢測65例膽囊癌組織標本及20例慢性膽囊炎膽囊粘膜組織標本中CHI3L1蛋白表達情況,結(jié)合臨床資料進行分析,CHI3L1蛋白表達陽性組與陰性組生存分析用Kaplan-Meier法,組間分析用log-rank檢驗,CHI3L1蛋白在膽囊癌組織中的表達與臨床病理因素的相關(guān)性采用卡方檢驗。[結(jié)果]CHI3L1在膽囊癌組織中高表達,胞漿內(nèi)染色,陽性率為87.7%,CHI3L1蛋白在慢性膽囊炎膽囊粘膜上皮弱表達,胞漿染色,胞核未見染色,陽性率為11.1%。膽囊癌臨床病理因素的關(guān)系分析顯示,CHI3L1蛋白表達與腫瘤生長方式、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān),差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。生存分析表明膽囊癌中晚期患者中CHI3L1蛋白表達陽性者生存時間明顯短于CHI3L1蛋白表達陰性者,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。[結(jié)論]CHI3L1在膽囊癌組織中存在較高的表達。CHI3L1的表達與膽囊癌分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。CHI3L1表達陽性的膽囊癌患者術(shù)后生存時間短于CHI3L1|陰性患者。第二部分：RNAi抑制CHI3L1表達對體外培養(yǎng)的膽囊癌細胞的影響第一節(jié)CHI3L1基因RNAi慢病毒載體的構(gòu)建[目的]探討siRNA-CHI3L1對人膽囊癌細胞株CHI3L1基因轉(zhuǎn)錄及蛋白表達的影響。[方法]通過慢病毒感染膽囊癌細胞GBC-SD,siRNA-CHI3L1沉默CHI3L1基因后,應用RT-PCR,Western-blot檢測人膽囊癌細胞GBC-SD的CHI3L1mRNA及其蛋白的表達。[結(jié)果]siRNA-CHI3L1作用于人膽囊癌細胞株GBC-SD后,CHI3L1mRNA表達顯著下調(diào),明顯抑帶CHI3L1蛋白表達。[結(jié)論]靶向CHI3L1基因的RNAi’慢病毒載體構(gòu)建成功第二節(jié)CHI3L1基因沉默對膽囊癌GBC-SD細胞株生物學特性的影響[目的]研究siRNA干擾沉默CHI3L1基因?qū)θ四懩野┘毎鲋场⑦w移、侵襲的影響。[方法]膽囊癌細胞GBC-SD分為3組：GBC-SD、陰性對照組GBC-SD(siRNA-NC)及干擾組GBC-SD(siRNA-CHI3L1)。CCK-8法檢測3組細胞增殖能力；[ranswell小室運動侵襲試驗檢測細胞遷移和侵襲能力；Elisa法檢測轉(zhuǎn)染前后細胞上清液中的MMP-9變化。[結(jié)果]轉(zhuǎn)染前后3組細胞進行比較,GBC-SD(siRNA-CHI3L1)較GBC-SD增殖能力、細胞遷移能力、細胞侵襲能力下降(P<0.05)。Elisa檢測上清液示GBC-SD(siRNA-CHI3L1)較GBC-SD相比,MMP-9分泌減少(p<0.05)。[結(jié)論]CHIL31蛋白可以促進膽囊癌細胞的增殖、遷移、侵襲能力,并促進膽囊癌細胞分泌MMP-9。siRNA干擾沉默CHI3L1基因后可明顯抑制CHI3L1所致的這些作用。第三部分：CHI3L1基因在膽囊癌細胞GBC-SD信號轉(zhuǎn)導通路中的作用[目的]研究膽囊癌細胞GBC-SDCHI3L1蛋白細胞信號通路的情況;[方法]膽囊癌細胞株GBC-SD、GBC-SD(siRNA-CHI3L1)及GBC-SD(siRNA-NC),提取細胞蛋白,Western-Blot法檢測比較細胞中ERK1/ERK2及JNK的信號通路的激活情況；GBC-SD加入ERK信號通路阻斷劑(U0126)觀察對其遷移和侵襲能力的影響；RT-PCR檢測3組細胞分泌MCP-1和IL-8情況；[結(jié)果]GBC-SD與GBC-SD(siRNA-NC)之間ERK1/ERK2及JNK磷酸化含量無明顯差別,GBC-SD(siRNA-CHI3L1)ERK1/ERK2及JNK活化明顯減少(P<0.05)；GBC-SD加入ERK通路阻斷劑后,其遷移和侵襲能力受到明顯抑制(P<0.05);GBC-SD(siRNA-CHI3L1)較GBC-SD與GBC-SD(siRNA-NC)組分泌MCP-1和IL-8均減少；[結(jié)論]CHI3L1蛋白可能通過激活膽