小鼠口腔癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型頜下淋巴結(jié)播散細(xì)胞TP53基因純合性缺失的初步研究_第1頁
小鼠口腔癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型頜下淋巴結(jié)播散細(xì)胞TP53基因純合性缺失的初步研究_第2頁
小鼠口腔癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型頜下淋巴結(jié)播散細(xì)胞TP53基因純合性缺失的初步研究_第3頁
小鼠口腔癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型頜下淋巴結(jié)播散細(xì)胞TP53基因純合性缺失的初步研究_第4頁
小鼠口腔癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型頜下淋巴結(jié)播散細(xì)胞TP53基因純合性缺失的初步研究_第5頁
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小鼠口腔癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型頜下淋巴結(jié)播散細(xì)胞TP53基因純合性缺失的初步研究目的：(1)初步探討小鼠口腔癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型頜下淋巴結(jié)播散細(xì)胞(DTC)DNA的獲取方法。(2)初步觀察和比較小鼠口腔癌模型頜下淋巴結(jié)DTC與其原發(fā)灶在各病變時(shí)期TP53基因純合性缺失的情況及探討其意義。方法：(1)4NQO飲水法建立小鼠口腔癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型,收集其舌部組織和頜下淋巴結(jié),分為正常、輕至中度異常增生、重度異常增生,口腔鱗癌無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移5組。(2)舌部組織DNA直接提取；淋巴結(jié)組織行連續(xù)冰凍切片,pan-CK免疫組化染色檢測CK陽性細(xì)胞(CK+)有無并明確定位,取鄰近切片HE染色后使用激光捕獲顯微切割技術(shù)(LCM)獲取CK+細(xì)胞,全基因組擴(kuò)增技術(shù)(WGA)擴(kuò)增獲其DNA；(4)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測淋巴結(jié)CK+細(xì)胞TP53基因的第5至第8外顯子純合性缺失情況,并與小鼠正常淋巴結(jié)以及口腔原發(fā)灶組織比較。結(jié)果：(1)小鼠口腔癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型各病變期頜下淋巴結(jié)中獲得有CK+(DTC)細(xì)胞的標(biāo)本共8個(gè),每個(gè)標(biāo)本使用LCM獲取CK+細(xì)胞各3例,共獲得24例；WGA擴(kuò)增技術(shù)成功獲取頜下淋巴結(jié)CK+細(xì)胞DNA15例,總成功率62.5%。(2)TP53基因5-8外顯子(exon)在各病變階段轉(zhuǎn)移灶頜下淋巴結(jié)CK+細(xì)胞中均有出現(xiàn)：輕至中度異常增生組exon5,1例(1/2)；重度異常增生組exon51例(1/2),exon81例(1/2)；口腔癌無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組exon51例(1/3),口腔癌伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組exon52例(2/8),exon81例(1/8)。在原發(fā)灶中口腔癌無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(exon51例(1/3)和口腔癌伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(exon5、6、8各1例,均為1/4)也有出現(xiàn),而在癌前病變?cè)l(fā)灶中未出現(xiàn)。結(jié)論：(1)冰凍連續(xù)切片、LCM及單細(xì)胞WGA結(jié)合,是精確獲取DTC細(xì)胞并進(jìn)行DNA分析的可靠技術(shù)；(2)從小鼠口腔癌模型各病變階段獲取的淋巴結(jié)CK+細(xì)胞,可能就是DTC細(xì)胞；(3)小鼠口腔癌病變的過程中,TP5

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