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小麥苗期鹽脅迫相關(guān)轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜及蛋白質(zhì)乙酰化和琥珀?;揎椦芯啃←?zhǔn)俏覈诙罂诩Z作物,其產(chǎn)量和品質(zhì)與國家糧食安全和人民生活水平息息相關(guān)。鹽脅迫是小麥生產(chǎn)的主要限制因素之一,在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上嚴(yán)重影響了小麥的光合作用、呼吸代謝、水分狀況和各種酶的變化等生理生化過程。因此在分子水平上闡明小麥對鹽脅迫的響應(yīng)機(jī)理,鑒定耐鹽關(guān)鍵基因,分析相關(guān)蛋白的修飾水平,對小麥抗逆育種具有重要的意義。試驗以耐鹽小麥品種青麥6號和鹽敏感材料中國春為材料,對人工生長箱培養(yǎng)1周的小麥幼苗進(jìn)行鹽脅迫處理,利用Illumina測序平臺對鹽脅迫前后6、12、24和48h的小麥根系進(jìn)行高通量測序,利用生物信息學(xué)方法對測序結(jié)果進(jìn)行系統(tǒng)對比研究,并對部分同源基因響應(yīng)鹽脅迫時的差異表達(dá)進(jìn)行了分析。同時,我們利用LC-MS/MS聯(lián)用分析技術(shù)和生物信息學(xué)方法分析小麥乙酰化和琥珀?;鞍踪|(zhì)參與調(diào)控的生理進(jìn)程進(jìn)行了研究。主要結(jié)果如下:1.從全基因組水平上研究了小麥根系響應(yīng)鹽脅迫的基因表達(dá)模式,鑒定到36804個差異表達(dá)基因,青麥6號和中國春鹽脅迫前后基因表達(dá)存在顯著差異。處理前青麥6號和中國春大約55.4%和50.1%的部分同源基因之間差異表達(dá),而鹽脅迫后其比例上升到62.6%和59.9%,其差異表達(dá)模式通過實時定量PCR得到了驗證。通過分析鹽脅迫后的上調(diào)表達(dá)的基因發(fā)現(xiàn)6h和12h鹽脅迫處理后青麥6號上調(diào)基因數(shù)目少于中國春,但48h后顯著高于中國春,下調(diào)表達(dá)基因的表達(dá)規(guī)律正好相反?;騁O富集分析顯示,青麥6號在"cellgrowth"、"responsetoABAstimulus"、"potassiumiontransport"、"establishmentoflocalization"和"responsetosaltstress"等代謝途徑顯著富集,而中國春在“celldeath”、"jasmonicacidbiosyntheticprocess"等代謝途徑富集顯著。2.利用結(jié)構(gòu)域搜索的方法,在小麥基因組中注釋到3718個轉(zhuǎn)錄因子基因,分布在51個基因家族,其中1583個在鹽脅迫下表現(xiàn)出顯著差異表達(dá)。脅迫響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子在不同家族中分布不均衡,差異表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子最多的7個家族(Myb、bZIP、bHLH、NAC、C2H2、AP2/ERF和WRKY)占所有差異表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子總數(shù)的47%。表達(dá)模式聚類分析顯示,差異表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子可以聚類到兩個群,分為20種不同的表達(dá)模式。其中第8群和第9群(160個轉(zhuǎn)錄因子)中,青麥6號鹽響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)豐度高于中國春。3.利用生物信息學(xué)方法,將小麥根系鹽脅迫響應(yīng)基因定位到IWGSC發(fā)布小麥參考基因組上,發(fā)現(xiàn)其在染色體上的分布并不是隨機(jī)排列的,而是很多鹽脅迫相關(guān)基因成簇分布。通過預(yù)測,我們一共鑒定到142個鹽脅迫基因基因簇,并且發(fā)現(xiàn)它們在A、B、D部分同源群上部分不均勻,其中D基因組(57)中比A(36)和B(49)具有更高的鹽響應(yīng)熱點。另外通過基因注釋發(fā)現(xiàn),同一基因簇中的串聯(lián)基因編碼相類似的蛋白,但是其響應(yīng)模式具有明顯差異,表明復(fù)制是導(dǎo)致鹽響應(yīng)的熱點區(qū)形成的原因之一,但其功能可能發(fā)生了分化。4.對小麥賴氨酸乙?;顽牾;g的重疊進(jìn)行第一個全面分析,發(fā)現(xiàn)在277個蛋白質(zhì)中有416個特異的乙?;揎椢稽c,在173個蛋白中有330個特異的琥珀酰化修飾位點。根據(jù)GO注釋、KEGG途徑和結(jié)構(gòu)域富集結(jié)果進(jìn)行綜合分析,表明小麥的乙?;顽牾;揎椬饔每梢詫?xì)胞內(nèi)的各種代謝途徑與過程進(jìn)行調(diào)節(jié)與控制。試驗結(jié)果還表明有26個參與光合作用和卡爾文循環(huán)的蛋白質(zhì)發(fā)生了這2種賴氨酸?;揎?21個琥珀酰賴氨酸位點有相同的乙?;稽c,33個蛋白的乙酰化和琥珀?;l(fā)生變性,占琥珀?;牡鞍踪|(zhì)的7.9%,表明小麥琥珀酰化和乙?;g存在重疊。這33種蛋白中的7種酶參與
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