《生物化學(xué)轉(zhuǎn)錄》課件

RNA的生物合成（轉(zhuǎn)錄）RNABiosynthesis,Transcription1編輯pptRNA的生物合成1編輯ppt本章內(nèi)容第一節(jié)轉(zhuǎn)錄的酶和模板第二節(jié)轉(zhuǎn)錄過(guò)程第三節(jié)真核生物的轉(zhuǎn)錄后修飾2編輯ppt本章內(nèi)容第一節(jié)轉(zhuǎn)錄的酶和模板2編輯ppt轉(zhuǎn)錄(transcription)生物體以DNA為模板合成RNA的過(guò)程。轉(zhuǎn)錄RNADNA

3編輯ppt轉(zhuǎn)錄(transcription)轉(zhuǎn)錄RNADNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的區(qū)別4編輯ppt復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的區(qū)別4編輯ppt參與轉(zhuǎn)錄的物質(zhì)原料:

NTP(ATP,UTP,GTP,CTP)模板:單鏈DNA酶:

RNA聚合酶(RNApolymerase,RNA-pol)其他蛋白質(zhì)因子5編輯ppt參與轉(zhuǎn)錄的物質(zhì)原料:NTP(ATP,UTP,GTP模板和酶TemplatesandEnzymes第一節(jié)6編輯ppt模板和酶第一節(jié)6編輯ppt一、轉(zhuǎn)錄模板

(一)不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄(asymmetrictranscription)

1.結(jié)構(gòu)基因(structuralgene):DNA分子上轉(zhuǎn)錄出RNA的區(qū)段。2.模板鏈(templatestrand):DNA雙鏈中按堿基配對(duì)規(guī)律能指引轉(zhuǎn)錄生成RNA的一股單鏈，也稱作有意義鏈或Watson鏈。

編碼鏈(codingstrand):

DNA雙鏈中與模板鏈相對(duì)的單鏈，不進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，也稱為反義鏈或Crick鏈。

7編輯ppt一、轉(zhuǎn)錄模板(一)不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄(asymmetric5′···GCAGTACATGTC···3′3′···cgtgatgtacag···5′5′···GCAGUACAUGUC···3′N······Ala·Val·His·Val······C編碼鏈模板鏈mRNA蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄翻譯8編輯ppt5′···GCAGTACATGTC···3′3′···c5

3

3

5

模板鏈編碼鏈編碼鏈模板鏈結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄方向轉(zhuǎn)錄方向9編輯ppt53模板鏈編碼鏈編碼鏈模板鏈結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄方向轉(zhuǎn)錄方向9編不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄含義

在DNA分子雙鏈上某一區(qū)段，一股鏈用作模板指引轉(zhuǎn)錄，另一股鏈不轉(zhuǎn)錄模板鏈并非永遠(yuǎn)在同一條單鏈上。10編輯ppt不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄含義在DNA分子雙鏈

二、RNA聚合酶（一）原核生物的RNA聚合酶11編輯ppt二、RNA聚合酶（一）原核生物的RNA聚合酶11原核生物的RNA聚合酶12編輯ppt原核生物的RNA聚合酶12編輯ppt核心酶(coreenzyme)全酶(holoenzyme)

13編輯ppt核心酶(coreenzyme)全酶(holoenzymRNA聚合酶全酶在轉(zhuǎn)錄起始區(qū)的結(jié)合14編輯pptRNA聚合酶全酶在轉(zhuǎn)錄起始區(qū)的結(jié)合14編輯ppt（二）真核生物的RNA聚合酶15編輯ppt（二）真核生物的RNA聚合酶15編輯ppt三、模板與酶的辨認(rèn)、結(jié)合原核生物一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位可視為一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位，稱為操縱子(operon)，包括若干個(gè)結(jié)構(gòu)基因及其上游(upstream)的調(diào)控序列。

5

3

3

5

結(jié)構(gòu)基因調(diào)控序列RNA-pol與RNA聚合酶結(jié)合啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄的DNA序列，稱為啟動(dòng)子(promoter)。16編輯ppt三、模板與酶的辨認(rèn)、結(jié)合原核生物一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位可視為一個(gè)轉(zhuǎn)錄單目錄17編輯ppt目錄17編輯ppt開始轉(zhuǎn)錄TTGACAAACTGT-35區(qū)(Pribnowbox)TATAATPuATATTAPy-10區(qū)1-30-5010-10-40-205

3

3

5

原核生物啟動(dòng)子保守序列RNA-pol辨認(rèn)位點(diǎn)(recognitionsite)5

5

RNA聚合酶保護(hù)區(qū)結(jié)構(gòu)基因3

3

18編輯ppt開始轉(zhuǎn)錄TTGACA-35區(qū)(PribnowbTATA盒CAAT盒GC盒增強(qiáng)子順式作用元件結(jié)構(gòu)基因-GCGC---CAAT---TATA轉(zhuǎn)錄起始真核生物啟動(dòng)子保守序列19編輯pptTATA盒CAAT盒GC盒增強(qiáng)子順式作用元件結(jié)轉(zhuǎn)錄過(guò)程TheProcessofTranscription第二節(jié)20編輯ppt轉(zhuǎn)錄過(guò)程第二節(jié)20編輯ppt（一）轉(zhuǎn)錄起始1.RNA聚合酶必須準(zhǔn)確地結(jié)合在轉(zhuǎn)錄模板的起始區(qū)域。2.DNA雙鏈解開，使其中的一條鏈作為轉(zhuǎn)錄的模板。一、原核生物的轉(zhuǎn)錄過(guò)程轉(zhuǎn)錄起始需解決的問(wèn)題：21編輯ppt（一）轉(zhuǎn)錄起始1.RNA聚合酶必須準(zhǔn)確地結(jié)合在轉(zhuǎn)錄模板的2.DNA雙鏈解開1.RNA聚合酶全酶(

2)與模板結(jié)合3.在RNA聚合酶作用下發(fā)生第一次聚合反應(yīng)，形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物RNApol(

2

)-DNA-pppGpN-OH3

轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物:5

-pppG-OH+

NTP

5

-pppGpN

-OH3

+ppi轉(zhuǎn)錄起始過(guò)程22編輯ppt2.DNA雙鏈解開1.RNA聚合酶全酶(2)與（二）轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)1.

亞基脫落，RNA–pol聚合酶核心酶變構(gòu)，沿著DNA模板前移；

2.在核心酶作用下，NTP不斷聚合，RNA鏈不斷延長(zhǎng)。(NMP)n+NTP

(NMP)n+1

+PPi23編輯ppt（二）轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)1.亞基脫落，RNA–pol聚合酶核心酶變目錄24編輯ppt目錄24編輯ppt5

3

DNA原核生物轉(zhuǎn)錄過(guò)程中的羽毛狀現(xiàn)象核糖體RNARNA聚合酶25編輯ppt53DNA原核生物轉(zhuǎn)錄過(guò)程中的羽毛狀現(xiàn)象核糖體RNARN依賴Rho(ρ)因子的轉(zhuǎn)錄終止非依賴Rho因子的轉(zhuǎn)錄終止（三）轉(zhuǎn)錄終止指RNA聚合酶在DNA模板上停頓下來(lái)不再前進(jìn)，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RNA鏈從轉(zhuǎn)錄復(fù)合物上脫落下來(lái)。分類26編輯ppt依賴Rho(ρ)因子的轉(zhuǎn)錄終止（三）轉(zhuǎn)錄終止指RNA聚合酶ATP1.依賴Rho因子的轉(zhuǎn)錄終止27編輯pptATP1.依賴Rho因子的轉(zhuǎn)錄終止27編輯ppt2.非依賴Rho因子的轉(zhuǎn)錄終止DNA模板上靠近終止區(qū)，有些特殊的堿基序列，轉(zhuǎn)錄出RNA后，RNA產(chǎn)物形成特殊的結(jié)構(gòu)來(lái)終止轉(zhuǎn)錄。28編輯ppt2.非依賴Rho因子的轉(zhuǎn)錄終止DNA模板上靠近終止區(qū)，有5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU...3`5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU...3`

RNA5

TTGCAGCCTGACAAATCAGGCTGATGGCTGGTGACTTTTTAGTCACCAGCCTTTTT...3

DNAUUUU...…UUUU...…5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU...3`莖環(huán)(stem-loop)/發(fā)夾(hairpin)結(jié)構(gòu)29編輯ppt5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGC莖環(huán)結(jié)構(gòu)使轉(zhuǎn)錄終止的機(jī)理使RNA聚合酶變構(gòu)，轉(zhuǎn)錄停頓；使轉(zhuǎn)錄復(fù)合物趨于解離，RNA產(chǎn)物釋放。5′pppG53

35RNA-pol30編輯ppt莖環(huán)結(jié)構(gòu)使轉(zhuǎn)錄終止的機(jī)理使RNA聚合酶變構(gòu)，轉(zhuǎn)錄停頓；5′二、真核生物的轉(zhuǎn)錄（一）轉(zhuǎn)錄起始轉(zhuǎn)錄起始時(shí)，RNA-pol不直接結(jié)合模板。31編輯ppt二、真核生物的轉(zhuǎn)錄（一）轉(zhuǎn)錄起始轉(zhuǎn)錄起始時(shí)，RNA-pol不轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)TATA盒CAAT盒GC盒增強(qiáng)子順式作用元件(cis-actingelement)1.轉(zhuǎn)錄起始前的上游區(qū)段AATAAA切離加尾轉(zhuǎn)錄終止點(diǎn)修飾點(diǎn)外顯子翻譯起始點(diǎn)內(nèi)含子OCT-1OCT-1：ATTTGCAT八聚體32編輯ppt轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)TATA盒CAAT盒GC盒增強(qiáng)子順式作用元件(順式作用元件(cis-actingelement)

：可影響自身基因表達(dá)活性的DNA序列。反式作用因子(trans-actingfactors)：能直接或間接辨認(rèn)、結(jié)合順式作用元件并反式激活另一基因轉(zhuǎn)錄的蛋白質(zhì)，統(tǒng)稱為反式作用因子。

33編輯ppt順式作用元件(cis-actingelement)：可影2.轉(zhuǎn)錄因子反式作用因子中，直接或間接結(jié)合RNA聚合酶的，則稱為轉(zhuǎn)錄因子(transcriptionalfactors,TF)。34編輯ppt2.轉(zhuǎn)錄因子反式作用因子中，直接或間接結(jié)合RNA聚合酶的

鋅指(zincfinger)C——CysH——His常結(jié)合GC盒35編輯ppt鋅指(zincfinger)C——Cys常結(jié)合GC盒ZnCysHis36編輯pptZnCysHis36編輯ppt參與RNA-polⅡ轉(zhuǎn)錄的TFⅡ

37編輯ppt參與RNA-polⅡ轉(zhuǎn)錄的TFⅡ37編輯ppt3.轉(zhuǎn)錄起始前復(fù)合物(pre-initiationcomplex,PIC)

真核生物RNA-pol不與DNA分子直接結(jié)合，而需依靠眾多的轉(zhuǎn)錄因子。38編輯ppt3.轉(zhuǎn)錄起始前復(fù)合物真核生物RNA-pol不與DNA分子直POL-ⅡTFⅡFⅡAⅡB由RNA-PolⅡ催化轉(zhuǎn)錄的PICPol-ⅡTFⅡFⅡHⅡETBPTAFTFⅡD-ⅡA-ⅡB-DNA復(fù)合物TATAⅡAⅡBTBPTAFTATAⅡHⅡECTD-PPIC組裝完成，TFⅡH使CTD磷酸化39編輯pptPOL-ⅡTFⅡFⅡAⅡB由RNA-PolⅡ催化轉(zhuǎn)錄的PI4.拼板理論(piecingtheory)一個(gè)真核生物基因的轉(zhuǎn)錄需要3至5個(gè)轉(zhuǎn)錄因子。轉(zhuǎn)錄因子之間互相結(jié)合，生成有活性，有專一性的復(fù)合物，再與RNA聚合酶搭配而有針對(duì)性地結(jié)合、轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的基因。40編輯ppt4.拼板理論(piecingtheory)一個(gè)真核生物（二）轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)真核生物轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)過(guò)程與原核生物大致相似，但因有核膜相隔，沒(méi)有轉(zhuǎn)錄與翻譯同步的現(xiàn)象。RNA-pol前移處處都遇上核小體。轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)過(guò)程中可以觀察到核小體移位和解聚現(xiàn)象。41編輯ppt（二）轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)真核生物轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)過(guò)程與原核生物大致相似，但因有RNA-PolRNA-PolRNA-Pol核小體轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)中的核小體移位轉(zhuǎn)錄方向42編輯pptRNA-PolRNA-PolRNA-Pol核小體轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)中的5

------AAUAAA-5

------AAUAAA--核酸酶-GUGUGUGRNA-polAATAAAGTGTGTG轉(zhuǎn)錄終止的修飾點(diǎn)5

5

3

3

3加尾AAAAAAA······3mRNA（三）轉(zhuǎn)錄終止——和轉(zhuǎn)錄后修飾密切相關(guān)43編輯ppt5------AAUAAA-5------AAUAAA真核生物的轉(zhuǎn)錄后修飾Post-transcriptionalModification第三節(jié)44編輯ppt真核生物的轉(zhuǎn)錄后修飾第三節(jié)44編輯ppt一、真核生物mRNA的轉(zhuǎn)錄后加工（一）首、尾的修飾5

端形成帽子結(jié)構(gòu)(m7GpppGp—)3

端加上多聚腺苷酸尾巴(polyAtail)45編輯ppt一、真核生物mRNA的轉(zhuǎn)錄后加工（一）首、尾的修飾5端46編輯ppt46編輯ppt5pppG…5GpppG…pppGpi鳥苷酸轉(zhuǎn)移酶5

m7GpppG…甲基轉(zhuǎn)移酶SAM帽子結(jié)構(gòu)的生成5pG…磷酸酶PPi47編輯ppt5pppG…5GpppG…pppGpi鳥苷酸轉(zhuǎn)移酶帽子結(jié)構(gòu)48編輯ppt帽子結(jié)構(gòu)48編輯ppt（二）mRNA的剪接1.

hnRNA和snRNA核內(nèi)的初級(jí)mRNA稱為雜化核RNA(hetero-nuclearRNA,hnRNA)snRNA(smallnuclearRNA)核內(nèi)的蛋白質(zhì)小分子核糖核蛋白體（snRNP）snRNA49編輯ppt（二）mRNA的剪接1.hnRNA和snRNA核內(nèi)的真核生物結(jié)構(gòu)基因，由若干個(gè)編碼區(qū)和非編碼區(qū)互相間隔開但又連續(xù)鑲嵌而成，去除非編碼區(qū)再連接后，可翻譯出由連續(xù)氨基酸組成的完整蛋白質(zhì)，這些基因稱為斷裂基因。斷裂基因(splitegene)CABD編碼區(qū)A、B、C、D非編碼區(qū)50編輯ppt真核生物結(jié)構(gòu)基因，由若干個(gè)編碼區(qū)和非編碼區(qū)互相間隔開但又連續(xù)2.外顯子(exon)和內(nèi)含子(intron)外顯子在斷裂基因及其初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物上出現(xiàn)，并表達(dá)為成熟RNA的核酸序列。內(nèi)含子隔斷基因的線性表達(dá)而在剪接過(guò)程中被除去的核酸序列。51編輯ppt2.外顯子(exon)和內(nèi)含子(intron)外顯子51雞卵清蛋白基因hnRNA首、尾修飾hnRNA剪接成熟的mRNA雞卵清蛋白基因及其轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后修飾52編輯ppt雞卵清蛋白基因hnRNA首、尾修飾hnRNA剪接成熟的mRN雞卵清蛋白成熟mRNA與DNA雜交電鏡圖DNAmRNA目錄53編輯ppt雞卵清蛋白成熟mRNA與DNA雜交電鏡圖DNAmRNA目錄3.內(nèi)含子的分類根據(jù)基因類型和剪接方式，內(nèi)含子分4類：I：線粒體、葉綠體及低等真核生物rRNA基因；II：線粒體、葉綠體mRNA基因；III：是常見的形成套索結(jié)構(gòu)后剪接，大多數(shù)mRNA基因有此類內(nèi)含子；IV：tRNA基因，剪接過(guò)程需酶及ATP。54編輯ppt3.內(nèi)含子的分類根據(jù)基因類型和剪接方式，內(nèi)含子分4類：4.mRNA的剪接——除去hnRNA中的內(nèi)含子，將外顯子連接。

snRNP與hnRNA結(jié)合成為剪接體①55編輯ppt4.mRNA的剪接——除去hnRNA中的內(nèi)含子，將外顯子②③UACUACA-AGUGU4U5U6E1E2U1U2UACUACA-AGUGU6E1E2U1、U4、U556編輯ppt②③UACUACA-AGUGU4U5U6E1E2U1U2pG-OH(ppG-OH,pppG-OH)U-OHGpUpGpA第一次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)第二次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)UpAGpU外顯子1內(nèi)含子外顯子2G-OHUpUpGpA剪接過(guò)程的二次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)(twicetransesterification)

57編輯pptpG-OHU-OHGpUpGpA第一次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)第二次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)?RNA編輯作用說(shuō)明，基因的編碼序列經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄后加工，是可有多用途分化的，因此也稱為分化加工(differentialRNAprocessing)。5.mRNA的編輯(mRNAediting)人類apoB基因mRNA（14500個(gè)核苷酸）肝臟apoB100（分子量為500000）腸道細(xì)胞apoB48（分子量為240000）mRNA編輯58編輯ppt?RNA編輯作用說(shuō)明，基因的編碼序列經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄后加工，是可有二、tRNA的轉(zhuǎn)錄后加工tRNA前體RNApolⅢTGGCNNAGTGCGGTTCGANNCCDNA59編輯ppt二、tRNA的轉(zhuǎn)錄后加工tRNA前體RNApolⅢTGGRNAaseP、內(nèi)切酶60編輯pptRNAaseP、內(nèi)切酶60編輯ppttRNA核苷酸轉(zhuǎn)移酶、連接酶ATPADP61編輯ppttRNA核苷酸轉(zhuǎn)移酶、連接酶ATPA