細菌一般染色方法

關(guān)于細菌一般染色方法第2頁,共28頁，2024年2月25日，星期天細菌染色意義由于細菌個體微小，基本上無色透明，故將其用適當(dāng)染料染色觀察，方能顯示它的形態(tài)、大小、構(gòu)造及染色特性等，在細菌鑒別上有重要意義。革蘭染色是細菌學(xué)中使用最廣泛的一種染色方法，籍此染色法，可將所有細菌區(qū)分為兩大類。第3頁,共28頁，2024年2月25日，星期天細菌染色方法及原理

常采用美藍，結(jié)晶紫等堿性染料進行染色。多數(shù)染料都是中性有機鹽。據(jù)著色基的不同可分為以下類型：

堿性染料（basicdye）—帶正電染料。其陽離子部分為發(fā)色基團，可與細胞中帶負電的組分結(jié)合。酸性染料（Aciddye）—帶負電染料。其陰離子部分為發(fā)色基團，可與細胞中帶正電的組分結(jié)合。第4頁,共28頁，2024年2月25日，星期天革蘭染色原理細菌的等電點較低，約在pH2～5之間，故在中性、堿性或弱堿性溶液中，菌體蛋白質(zhì)電離后帶負電荷，易與帶正電荷的堿性染料如龍膽紫及堿性復(fù)紅等結(jié)合，使細菌被染成紫色或紅色。第5頁,共28頁，2024年2月25日，星期天一、細菌染色標本片的制備細菌染色檢查，首先要進行細菌標本制備。制備細菌標本一般包括涂片、干燥、固定三步。第6頁,共28頁，2024年2月25日，星期天固定的目的和方法使細菌的細胞凝固，使菌體與玻片粘得更牢固可改變菌體對染料的通透性加熱固定可殺死細菌，比較安全固定的方法將制成的標本勻速通過火焰三次第7頁,共28頁，2024年2月25日，星期天革蘭染色染色：初染（結(jié)晶紫）媒染

（碘液）脫色（酒精）

復(fù)染（復(fù)紅）濾紙吸干油鏡鏡檢safraninCrystalviolet第8頁,共28頁，2024年2月25日，星期天染色步驟結(jié)晶紫初染盧戈碘液媒染９５％乙醇脫色復(fù)紅復(fù)染（２）（３）（１）（４）１分鐘水洗１分鐘水洗３０秒水洗３０秒水洗吸干第9頁,共28頁，2024年2月25日，星期天Germisstainedvioletorred第10頁,共28頁，2024年2月25日，星期天結(jié)晶紫初染１分鐘水洗

第11頁,共28頁，2024年2月25日，星期天碘液媒染１分鐘

水洗第12頁,共28頁，2024年2月25日，星期天酒精脫色３０秒水洗第13頁,共28頁，2024年2月25日，星期天

復(fù)紅復(fù)染３０秒水洗第14頁,共28頁，2024年2月25日，星期天濾紙吸干油鏡鏡檢第15頁,共28頁，2024年2月25日，星期天抗酸染色法(acid-faststain)分枝桿菌屬的細菌（包括結(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌等）為抗酸性細菌，一般染色法不易著色，須用抗酸染色法。注意事項涂片要略厚加溫染色或延長染色時間，加溫時隨時補加染色液分枝桿菌呈紅色(+)其他細菌和背景為藍色(-)。第16頁,共28頁，2024年2月25日，星期天操作過程取痰液→涂片（略厚）→干燥→固定→石炭酸復(fù)紅加溫染色8~10分鐘后→用3%的鹽酸酒精脫色約1~2分鐘，脫色時輕搖玻片，直到涂片顏色脫去為止水洗后，用堿性美藍復(fù)染1分鐘→水洗，印干→鏡檢第17頁,共28頁，2024年2月25日，星期天形態(tài)：細長，略彎曲的桿菌，多聚集成團。無鞭毛,芽胞。染色性：不易著色，抗酸染色陽性。菌體呈紅色，背景中其他物質(zhì)藍色。結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)第18頁,共28頁，2024年2月25日，星期天細菌基本形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察基本形態(tài)球菌桿菌弧菌特殊結(jié)構(gòu)芽孢枯草桿菌，破傷風(fēng)梭菌莢膜肺炎球菌鞭毛變形桿菌葡萄球菌鏈球菌肺炎球菌腦膜炎球菌革蘭陽性革蘭陰性第19頁,共28頁，2024年2月25日，星期天第20頁,共28頁，2024年2月25日，星期天第21頁,共28頁，2024年2月25日，星期天肺炎（雙）球菌莢膜第22頁,共28頁，2024年2月25日，星期天第23頁,共28頁，2024年2月25日，星期天第24頁,共28頁，2024年2月25日，星期天第25頁,共28頁，2024年2月25日，星期天第26