YY-T 0471.5-2017 接觸性創(chuàng)面敷料試驗(yàn)方法 第5部分：阻菌性

I中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)代替YY/T0471.5—2004接觸性創(chuàng)面敷料試驗(yàn)方法第5部分：阻菌性T—p2017-02-28發(fā)布2018-01-01實(shí)施國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布ⅠYY/T0471《接觸性創(chuàng)面敷料試驗(yàn)方法》分為六個(gè)部分：—第1部分：液體吸收性；—第2部分：透氣膜敷料的水蒸氣透過率；—第3部分：阻水性；—第4部分：舒適性；—第5部分：阻菌性；—第6部分：氣味控制。本部分為YY/T0471的第5部分。本部分按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本部分代替YY/T0471.5—2004《接觸性創(chuàng)面敷料試驗(yàn)方法第5部分：阻菌性》，與YY/T0471.5—2004相比，主要技術(shù)變化如下：—增加了“外干內(nèi)濕”阻菌性試驗(yàn)方法；—修改了每種試驗(yàn)方法；—增加了資料性附錄；—其他編輯性修改。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。本部分由國家食品藥品監(jiān)督管理總局提出。本部分由國家食品藥品監(jiān)督管理局濟(jì)南醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心歸口。本部分起草單位：山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心、山東賽克賽斯藥業(yè)科技有限公司、明尼蘇達(dá)礦業(yè)制造醫(yī)用器材（上海）有限公司、康樂保（中國）醫(yī)療用品有限公司。YY/T0471的本部分歷次版本發(fā)布情況為：YY/T0471.5—2004于2004年3月23日首次發(fā)布。1接觸性創(chuàng)面敷料試驗(yàn)方法第5部分：阻菌性YY/T0471的本部分規(guī)定了對聲稱具有阻菌性能的接觸性創(chuàng)面敷料的阻菌性能進(jìn)行評價(jià)的試驗(yàn)方法1)。本試驗(yàn)方法涉及微生物檢測操作，宜由經(jīng)過培訓(xùn)的人員在生物安全實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行試驗(yàn)。2術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。2.1干態(tài)敷料的兩面都不濕的狀態(tài)。該狀態(tài)下的敷料，創(chuàng)面無滲出液或極少量滲出液，而敷料的外表面處于干燥狀態(tài)。注：敷料未聲稱阻水的，視為外表面處于干燥狀態(tài)。2.2半濕態(tài)敷料的一面是濕的狀態(tài)。該狀態(tài)下的敷料，創(chuàng)面有滲出液滲出，而敷料外表面處于干燥狀態(tài)，即“外干內(nèi)濕”；或者，創(chuàng)面無滲出液或極少量滲出液，而敷料外表面預(yù)期可處于潮濕狀態(tài)，即“外濕內(nèi)干”。注：敷料未聲稱阻水的，視為外表面處于干燥狀態(tài)；敷料聲稱阻水的，視為外表面處于潮濕狀態(tài)。2.3濕態(tài)敷料的兩面都是濕的狀態(tài)。該狀態(tài)下的敷料，創(chuàng)面有滲出液滲出，而敷料外表面預(yù)期可處于潮濕狀態(tài)。注：敷料聲稱阻水的，視為外表面處于潮濕狀態(tài)。3試劑及材料3.1粘質(zhì)沙雷菌(Serratiamarcescens)2);3.2營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基；3.3營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基；3.4無菌生理鹽水；3.5無菌拭子。1)敷料中的抗菌成分可能會(huì)對本部分的試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。附錄A給出本部分的應(yīng)用說明。2)國內(nèi)外經(jīng)認(rèn)可的菌種保藏機(jī)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，如ATCC8100、CICC10187等。某些粘質(zhì)沙雷菌可在瓊脂表面呈現(xiàn)出紅色菌落，如CICC10187等，這一特征可以用于檢查是否有粘質(zhì)沙雷菌生長。給出本信息是為了方便本部分的使用者。24挑戰(zhàn)微生物制備4.1挑戰(zhàn)接種物制備從粘質(zhì)沙雷菌工作菌株斜面上挑取粘質(zhì)沙雷菌菌落，在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上劃線接種，26℃條件下過夜培養(yǎng)制得挑戰(zhàn)接種物，用于干態(tài)阻菌性試驗(yàn)和半濕態(tài)（外干內(nèi)濕）阻菌性試驗(yàn)。制備好的平板宜當(dāng)日使用。4.2挑戰(zhàn)菌液制備從4.1制得的挑戰(zhàn)接種物平板上挑取粘質(zhì)沙雷菌單菌落接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，26℃條件下過夜培養(yǎng)，獲得濃度約為109CFU/mL的挑戰(zhàn)菌液，用于半濕態(tài)（外濕干內(nèi)）和濕態(tài)阻菌性試驗(yàn)。制備好的挑戰(zhàn)菌液宜當(dāng)日使用。5干態(tài)阻菌性圖1為干態(tài)阻菌性試驗(yàn)裝置示意圖。挑戰(zhàn)室用于盛放挑戰(zhàn)接種物，采樣室用于擦拭采樣。試驗(yàn)前，采用經(jīng)確認(rèn)過的滅菌程序?qū)υ囼?yàn)裝置進(jìn)行滅菌備用。說明：A—挑戰(zhàn)室；B—采樣室；1—玻璃塞；2—玻璃試驗(yàn)裝置；3—挑戰(zhàn)接種物；4—固定螺釘；5—供試樣品；6—無菌拭子；7—支架。圖1干態(tài)阻菌性試驗(yàn)裝置示意圖5.2試驗(yàn)步驟分別取3個(gè)樣品，使樣品內(nèi)表面朝向采樣室，將樣品夾持到挑戰(zhàn)室和采樣室之間。夾持方式宜經(jīng)過3確認(rèn)，確保不發(fā)生挑戰(zhàn)微生物的泄漏。對于面積較大的樣品，可剪下剩余部分或?qū)⑵浒趯?shí)驗(yàn)裝置周圍；對于面積較小的樣品，可采用面積較大的樣品原材料進(jìn)行測試，或者可以采用適宜的方式填充缺失部分用于測試。5.2.2加入挑戰(zhàn)微生物用無菌拭子抹取挑戰(zhàn)接種物，并通過挑戰(zhàn)室口接種到樣品外表面上，盡量涂抹均勻。以適宜的方式封閉試驗(yàn)裝置的挑戰(zhàn)室口和采樣室口，確保不會(huì)產(chǎn)生外來污染，將試驗(yàn)裝置放入26℃培養(yǎng)箱中至24h。5.2.4穿透微生物檢查到規(guī)定時(shí)間后，在無菌生理鹽水中預(yù)先濕潤無菌拭子并擠掉多余的水分，通過采樣室口盡量擦拭樣品所有內(nèi)表面，然后以擦拭營養(yǎng)瓊脂平板表面的方式進(jìn)行接種。每個(gè)樣品使用三個(gè)無菌拭子擦拭樣品，分別在三個(gè)營養(yǎng)瓊脂平板上進(jìn)行接種，期間應(yīng)多次轉(zhuǎn)動(dòng)拭子。將營養(yǎng)瓊脂平板置于26℃培養(yǎng)24h。5.2.5挑戰(zhàn)微生物活力檢查到規(guī)定時(shí)間后，參照5.2.4進(jìn)行操作，通過挑戰(zhàn)室口擦拭樣品外表面，以檢查挑戰(zhàn)微生物活力。用于活力檢查的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上應(yīng)有粘質(zhì)沙雷菌生長，否則試驗(yàn)無效。如果用于樣品內(nèi)表面采樣分析的營養(yǎng)瓊脂平板上均無微生物生長，判為符合干態(tài)阻菌性要求。如果用于樣品內(nèi)表面采樣分析的營養(yǎng)瓊脂平板上有微生物生長，應(yīng)采用適宜的微生物學(xué)方法檢查其是否為粘質(zhì)沙雷菌。若是粘質(zhì)沙雷菌，則判為不符合干態(tài)阻菌性要求；若不是粘質(zhì)沙雷菌，則說明有外來污染，試驗(yàn)無效。圖2為半濕態(tài)（外干內(nèi)濕）阻菌性試驗(yàn)裝置示意圖。挑戰(zhàn)室用于盛放挑戰(zhàn)接種物，采樣室用于盛放營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基。試驗(yàn)前，采用經(jīng)確認(rèn)過的滅菌程序?qū)υ囼?yàn)裝置進(jìn)行滅菌備用。6.2試驗(yàn)方法按照5.2.1進(jìn)行操作。6.2.2加入挑戰(zhàn)微生物按照5.2.2進(jìn)行操作。6.2.3加入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基以無菌操作的方式向采樣室內(nèi)加滿營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基。按照5.2.3進(jìn)行操作。46.2.5穿透微生物檢查到規(guī)定時(shí)間后，肉眼觀察營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中微生物生長情況。6.2.6挑戰(zhàn)微生物活力檢查按照5.2.5進(jìn)行操作。說明：A—挑戰(zhàn)室；B—采樣室；1—玻璃塞；2—玻璃試驗(yàn)裝置；3—粘質(zhì)沙雷菌接種物；4—固定螺釘；5—供試樣品；6—營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基；7—玻璃彎管；8—支架。圖2試驗(yàn)裝置示意圖—半濕態(tài)（外干內(nèi)濕）用于活力檢查的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上應(yīng)有粘質(zhì)沙雷菌生長，否則試驗(yàn)無效。如果營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基顯示澄清，判為符合半濕態(tài)（外干內(nèi)濕）阻菌性要求。如果營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基顯示混濁，應(yīng)采用適宜的微生物學(xué)方法檢查其是否為粘質(zhì)沙雷菌。若是粘質(zhì)沙雷菌，則判為不符合半濕態(tài)（外干內(nèi)濕）阻菌性要求；若不是粘質(zhì)沙雷菌，則說明有外來污染，試驗(yàn)無效。注：如有必要，可設(shè)置無菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基作為陰性對照（顯示澄清）以及接種粘質(zhì)沙雷菌的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基作為陽性對照（顯示混濁以避免肉眼觀察澄清或混濁可能的主觀性錯(cuò)誤。圖3為半濕態(tài)（外濕內(nèi)干）阻菌性試驗(yàn)裝置示意圖。挑戰(zhàn)室用于盛放挑戰(zhàn)菌液，采樣室用于擦拭采樣。試驗(yàn)前，采用經(jīng)確認(rèn)過的滅菌程序?qū)υ囼?yàn)裝置進(jìn)行滅菌備用。5說明：A—挑戰(zhàn)室；B—采樣室；1—玻璃塞；2—玻璃彎管；3—挑戰(zhàn)菌液；4—供試樣品；5—玻璃試驗(yàn)裝置；6—無菌拭子；7—固定螺釘；8—支架。圖3試驗(yàn)裝置示意圖—半濕態(tài)（外濕內(nèi)干）7.2試驗(yàn)方法按照5.2.1進(jìn)行操作。7.2.2加入挑戰(zhàn)微生物向挑戰(zhàn)室內(nèi)加滿挑戰(zhàn)菌液。按照5.2.3進(jìn)行操作。7.2.4穿透微生物檢查按照5.2.4進(jìn)行操作。7.2.5挑戰(zhàn)微生物活力檢查到規(guī)定時(shí)間后，用無菌拭子蘸取挑戰(zhàn)菌液擦拭接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板，以檢查挑戰(zhàn)微生物活力。每個(gè)樣品使用三個(gè)無菌拭子蘸取菌液，分別涂在三個(gè)營養(yǎng)瓊脂平板上進(jìn)行接種，并將平板置于26℃培養(yǎng)24h。用于活力檢查的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上應(yīng)有粘質(zhì)沙雷菌生長，否則試驗(yàn)無效。如果用于樣品內(nèi)表6面采樣分析的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上均無微生物生長，判為符合半濕態(tài)（外濕內(nèi)干）阻菌性要求。如果用于樣品內(nèi)表面采樣分析的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上有微生物生長，應(yīng)采用適宜的微生物學(xué)方法檢查其是否為粘質(zhì)沙雷菌。若是粘質(zhì)沙雷菌，則判為不符合半濕態(tài)（外濕內(nèi)干）阻菌性要求；若不是粘質(zhì)沙雷菌，則說明有外來污染，試驗(yàn)無效。8濕態(tài)阻菌性圖4為濕態(tài)阻菌性試驗(yàn)裝置示意圖。挑戰(zhàn)室用于盛放挑戰(zhàn)菌液，采樣室用于盛放營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基。試驗(yàn)前，采用經(jīng)確認(rèn)過的滅菌程序?qū)υ囼?yàn)裝置進(jìn)行滅菌備用。說明：A—挑戰(zhàn)室；B—采樣室；1—玻璃塞；2—玻璃彎管；3—挑戰(zhàn)菌液；4—供試樣品；5—玻璃試驗(yàn)裝置；6—TSB培養(yǎng)基；7—固定螺釘；8—支架。圖4試驗(yàn)裝置示意圖—濕態(tài)按照5.2.1進(jìn)行操作。8.2.2加入挑戰(zhàn)微生物按照7.2.2進(jìn)行操作。8.2.3加入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基按照6.2.3進(jìn)行操作。按照5.2.3進(jìn)行操作。8.2.5穿透微生物檢查按照6.2.5進(jìn)行操作。8.2.6挑戰(zhàn)微生物活力檢查按照7.2.5進(jìn)行操作。用于活力檢查的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上應(yīng)有粘質(zhì)沙雷菌生長，否則試驗(yàn)無效。如果營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基顯示澄清，判為符合濕態(tài)阻菌性要求。如果營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基顯示混濁，應(yīng)采用適宜的微生物學(xué)方法檢查其是否為粘質(zhì)沙雷菌。若是粘質(zhì)沙雷菌，則判為不符合濕態(tài)阻菌性要求；若不是粘質(zhì)沙雷菌，則說明有外來污染，試驗(yàn)無效。附錄A（資料性附錄）標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用說明A.1適用對象在臨床上，感染是創(chuàng)傷的重要并發(fā)癥，接觸性創(chuàng)面敷料作為創(chuàng)面的機(jī)械屏障，其阻菌性能的好壞對于控制創(chuàng)面感染顯得尤為重要。然而，這并不意味著要求所有的接觸性創(chuàng)面敷料都具有阻菌性，某些感染風(fēng)險(xiǎn)非常低的創(chuàng)面類型可能并不必須使用具有阻菌性能的接觸性創(chuàng)面敷料。另外，某些需要二次敷料(secondarydressing)配合使用的接觸性創(chuàng)面敷料，其阻菌性是由雙方共同提供的，僅僅對接觸性創(chuàng)面敷料開展阻菌性評價(jià)所得到的信息也可能是片面的。評價(jià)特定接觸性創(chuàng)面敷料是否應(yīng)該具有阻菌性能，需要對不同創(chuàng)面類型的感染風(fēng)險(xiǎn)開展深入研究。A.2方法選擇敷料的內(nèi)表面所處的狀態(tài)取決于創(chuàng)面滲出液的多少，相應(yīng)地處于濕態(tài)或干態(tài)。一般正常環(huán)境中，敷料的外表面會(huì)處于干態(tài)，外表面濕態(tài)并不是敷料的常態(tài)。但某些敷料，如聲稱具有阻水性的敷料，其外表面還可能會(huì)處于濕態(tài)。在對敷料的阻菌性進(jìn)行評價(jià)時(shí)，應(yīng)根據(jù)敷料預(yù)期所處的不同狀態(tài)選擇相應(yīng)的試驗(yàn)方法。如果敷料預(yù)期用于滲出液非常少的創(chuàng)面，此時(shí)應(yīng)至少首先選擇干態(tài)試驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)。在此基礎(chǔ)上，