瘧原蟲常識與鏡檢

關(guān)于瘧原蟲常識與鏡檢

主要內(nèi)容：

一.瘧原蟲的種類與分布

二.瘧原蟲生活史與病癥概述

三.瘧原蟲的形態(tài)與鏡檢技術(shù)

四.培訓(xùn)實(shí)時測驗(yàn)

第2頁,共40頁，2024年2月25日，星期天

“瘧”字釋疑：

根據(jù)《新華字典》“瘧”屬多音字

1.瘧（讀Yào）指瘧疾，俗稱。

2.瘧（讀Nüè）指瘧疾，一種急性傳染病，病原體是瘧原蟲，傳染源是蚊子，為周期性發(fā)冷發(fā)熱的癥狀。第3頁,共40頁，2024年2月25日，星期天

歷史回顧3千多年前，“瘧”的象形文字出現(xiàn)在隋代《諸病源候論》，及以后國內(nèi)外某些醫(yī)學(xué)家均認(rèn)為瘧疾是“瘴氣”所引起的。

1880年法國人AlphonseLaveran在瘧疾病人紅細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)瘧原蟲。1897年英國人RonaldRoss發(fā)現(xiàn)蚊蟲與傳播瘧疾的關(guān)系。1948-1960年Shortt及Garnham證實(shí)了人類瘧原蟲的肝細(xì)胞外期。1977-1980年Lysenko和Krotoski等提出“休眠子”學(xué)說。

經(jīng)過一個世紀(jì)的研究，瘧原蟲生活史得以基本闡明。第4頁,共40頁，2024年2月25日，星期天

瘧原蟲的分布與種類

分布

瘧原蟲主要分布在地球熱帶、亞熱帶各國，即非洲、東南亞、南美等地區(qū)，約有20億人口在疫區(qū)。每年死于瘧疾的兒童約100萬。我國在華南、華中的某些地區(qū)，特別是云南和海南省，因此，瘧疾仍是我國重點(diǎn)防治的寄生蟲病之一。種類

至今全球發(fā)現(xiàn)瘧原蟲有130多種，宿主：人類、哺乳動物、鳥類及爬行類。

寄生于人體的瘧原蟲共有如下四種：

第5頁,共40頁，2024年2月25日，星期天間日瘧原蟲

（PlasmodiumvivaxP.v）間日瘧48h溫帶普遍感染流行最廣惡性瘧原蟲

(PlasmodiumfalciparumP.f)惡性瘧36—48h熱帶亞熱帶海南、云南、貴州三日瘧原蟲

(PlasmodiummalariaeP.m)三日瘧72h熱帶少見卵形瘧原蟲

(PlasmodiumovaleP.o)卵形瘧48h熱帶罕見目前，我省只有間日瘧和惡性瘧。衛(wèi)生部要求：我省應(yīng)在2012年消除瘧疾！寄生于人體的四種瘧原蟲第6頁,共40頁，2024年2月25日，星期天通過按蚊叮咬進(jìn)入人體第7頁,共40頁，2024年2月25日，星期天二.瘧原蟲生活史概述子孢子雌蚊吸血，經(jīng)皮膚侵入人體移入肝細(xì)胞速發(fā)型子孢子遲發(fā)型子孢子（約6-12個月休眠）無性裂體生殖裂殖體脹破肝C釋放裂殖子某些因素刺激侵入血流進(jìn)入RBC環(huán)狀體裂體增殖大滋養(yǎng)體早期裂殖體成熟裂殖體裂殖子

脹破RBC釋放經(jīng)過幾次裂體增殖雌配子體雄配子體雌蚊吸血進(jìn)入蚊胃雌配子雄配子合子配子結(jié)合動合子穿過胃壁在胃壁下卵囊孢子增殖侵入新的RBC遺傳基因多態(tài)性分型自然氣溫16℃-30℃蚊體內(nèi)P.V8-9天P.f10天RBC外期P.V8天P.f5天RBC內(nèi)期P.V48hP.f36-48h

內(nèi)潛伏期外潛伏期第8頁,共40頁，2024年2月25日，星期天

人瘧原蟲完成其生活史需要人和按蚊兩個宿主。

1.在按蚊體內(nèi)進(jìn)行有性繁殖，按蚊是瘧原蟲的終末宿主。

2.在人體內(nèi)進(jìn)行無性增殖，人是瘧原蟲的中間宿主。電鏡下MP感染的RBC和裂殖子的釋出（人衛(wèi)版本科教材）第9頁,共40頁，2024年2月25日，星期天瘧疾病癥典型癥狀：

周期性寒戰(zhàn)、高熱（T：39-40℃）、出汗,

每次發(fā)作時間6~10h。熱型：

即周期性與紅內(nèi)期裂體增殖周期一致。

P.v、P.o—48h

P.f—36~48h，漸不規(guī)則

P.m—72h貧血：

A.與RBC大量直接破壞有關(guān)。

B.脾亢，脾腫大、單核巨噬細(xì)胞增生所致，2~6

倍大，巨噬細(xì)胞增多，吞噬增強(qiáng)。

C.骨髓中RBC生成障礙。

D.自身免疫破壞RBC。第10頁,共40頁，2024年2月25日，星期天37C

0

發(fā)燒發(fā)燒

裂體增殖48h隔日PV熱型與原蟲發(fā)育的關(guān)系第11頁,共40頁，2024年2月25日，星期天海南省瓊中縣兒童因瘧疾引起的脾臟腫大（人衛(wèi)版本科教材）第12頁,共40頁，2024年2月25日，星期天

瘧原蟲營養(yǎng)代謝胞飲、吞噬攝取營養(yǎng)蛋白質(zhì)：氨基酸來自血紅蛋白、血漿

RBC珠蛋白+血紅素—瘧色素（R除外各期消化分解Hb后的最終產(chǎn)物

）能量：葡萄糖來自血漿，但要利用RBC

中的G6PD

缺乏G6PD的病人對瘧原蟲有選擇抗性第13頁,共40頁，2024年2月25日，星期天

瘧原蟲的壽命

瘧原蟲在人體內(nèi)有一定的壽命，惡性瘧原蟲約1年，其中大部分只活到6~8個月；間日瘧原蟲為1年半至3年，不超過4年。人體免疫力對瘧原蟲的生存是有影響的，所以，這里說的瘧原蟲的壽命與指瘧原蟲在一定條件下的壽命；或者說是感染后的瘧疾病程。第14頁,共40頁，2024年2月25日，星期天瘧原蟲的形態(tài)與鏡檢技術(shù)

1.形態(tài)

人體瘧原蟲的基本構(gòu)造：胞核、胞質(zhì)和包膜瘧原蟲形態(tài)檢查三要素：胞核、胞質(zhì)和虐色素胞核即細(xì)胞核或染色質(zhì)粒。在正常情況下核呈鮮紅色，呈圓形或不規(guī)則的顆粒狀。核的結(jié)構(gòu)致密，只有在個別發(fā)育階段較為疏松。例如間日瘧原蟲雄配子體的核，有時因胞漿厚密或染色深藍(lán)，使核呈暗紅或紫紅色。胞質(zhì)被染成蔚藍(lán)色或深藍(lán)色，隨著蟲體發(fā)育長大，細(xì)胞漿逐漸增多。間日瘧原蟲發(fā)育到大滋養(yǎng)體階段，胞漿呈阿米巴樣活動，胞漿內(nèi)有空泡。

瘧色素不著色，顏色和顆粒的形狀，因瘧原蟲種類而異。間日瘧原蟲的色素顆粒呈細(xì)小桿狀，黃褐色；惡性瘧原蟲色素呈塊狀，黑褐色；三日瘧原蟲的色素呈砂粒狀，深褐色；卵形瘧原蟲的色素與間日瘧原蟲相似。瘧色素在蟲體內(nèi)散在分布或聚集成團(tuán)塊。第15頁,共40頁，2024年2月25日，星期天

各期瘧原蟲形態(tài)比較英文縮寫代號：

MP——瘧原蟲

P.v——間日瘧原蟲

P.f——惡性瘧原蟲

P.m——三日瘧原蟲

P.o——卵形瘧原蟲

R——環(huán)狀體（小滋養(yǎng)體）

T——大滋養(yǎng)體

S——裂殖體

G——配子體

P.f的T、S主要在皮下、脂肪和內(nèi)臟微血管中發(fā)育，G成熟后，約在無性體出現(xiàn)后7~10天才見于外周血液中。因此，通常外周血檢查只見到R和G這兩期的P.f，這是鑒別P.v、P.f的要點(diǎn)之一。第16頁,共40頁，2024年2月25日，星期天被瘧原蟲寄生的RBC變化

蟲種RBC大小RBC顏色間日瘧脹大變淡惡性瘧正?；蚩s小正常第17頁,共40頁，2024年2月25日，星期天

薄血膜中P.v的形態(tài)環(huán)狀體(P.v.R)P.v.R

約占寄生紅細(xì)胞的1/3，很少見到一個紅細(xì)胞寄生2個環(huán)狀體和一個環(huán)狀體有2個核。P.v.R第18頁,共40頁，2024年2月25日，星期天大滋養(yǎng)體(P.v.T)經(jīng)8～10小時，蟲體增大，胞質(zhì)增多，伸出偽足。出現(xiàn)黃褐色的瘧色素。紅細(xì)胞脹大，變形，顏色變淡，并出現(xiàn)數(shù)量較多，淡紅色的小點(diǎn)，稱薛氏小點(diǎn)第19頁,共40頁，2024年2月25日，星期天成熟裂殖體（P.v.S）紅細(xì)胞：脹大，褪色，可見薛氏小點(diǎn)。大?。簜€體較大。胞漿和核：裂殖子12~24個平均16個，排列不規(guī)則，核紅色，胞漿淺蘭色。色素：黃褐色常集于瘧原蟲的一邊。第20頁,共40頁，2024年2月25日，星期天P.v.S實(shí)體標(biāo)本鏡檢形態(tài)（吉氏染色）第21頁,共40頁，2024年2月25日，星期天間日瘧原蟲雄配子體(P.v.G)

間日瘧原蟲雌配子體(P.v.G)蟲體較小，占滿脹大的紅細(xì)胞胞質(zhì)淺藍(lán)核大疏松，淡紅色，多位于蟲體的中央。瘧色素分散蟲體較大，占滿脹大的紅細(xì)胞胞質(zhì)致密，色深藍(lán)核小致密，深紅色，多位于蟲體一側(cè)瘧色素分散

第22頁,共40頁，2024年2月25日，星期天P.V雄配子體P.V雌配子體實(shí)體標(biāo)本鏡檢形態(tài)（吉氏染色）P.V.G的雌雄實(shí)體第23頁,共40頁，2024年2月25日，星期天間日瘧大滋養(yǎng)體(T)與配子體(G)的區(qū)別

TG蟲體：較小較大胞漿：邊緣不規(guī)則可見空泡邊緣規(guī)則無空泡

核：

較小、不規(guī)則較大有不染色帶色素：

較少、分布不勻，色素分布均勻TG第24頁,共40頁，2024年2月25日，星期天薄血膜中P.f的形態(tài)蟲體：約占RBC的1/5-1/6,環(huán)狀。常見幾個蟲同時寄生在同一細(xì)胞核：小致密規(guī)則、常見2個核胞漿：纖細(xì)完整P.f.R第25頁,共40頁，2024年2月25日，星期天P.f.GP.f.G第26頁,共40頁，2024年2月25日，星期天瘧原蟲厚、薄血膜鏡檢的主要形態(tài)變異

薄血膜：原蟲寄生在紅細(xì)胞里,形態(tài)典型,易鑒別,但一般只用于教學(xué)和蟲種鑒別.

厚血膜：經(jīng)染色血紅蛋白溶解，輪廓消失，但有時尚留下殘骸的“影子”或點(diǎn)彩。厚血膜由于細(xì)胞重迭，干燥緩慢，蟲體形態(tài)發(fā)生較大變化,特別是小滋養(yǎng)體和大滋養(yǎng)體變化就更大，常呈分號“；”和感嘆號“！”狀；飛鳥“⌒.⌒”、“V”狀。而大滋養(yǎng)體空泡消失，胞漿斷裂成塊是它的特點(diǎn)。裂殖體和配子體的形態(tài)則無明顯變化。雖然大、小滋養(yǎng)體形態(tài)千變?nèi)f化，但只要掌握瘧原蟲的核、胞漿、色素三個要點(diǎn)是不難鑒別的。第27頁,共40頁，2024年2月25日，星期天

厚血膜

一般門診須檢查200~1000個油鏡視野（相當(dāng)于0.5~2.5μl血量），才能確保鏡檢的敏感性和可重復(fù)性。通常的敏感性可達(dá)約10~20個原蟲/μl血。由于厚血膜比薄血膜用血量大，涂布面積小，陽性檢出率較高。查出瘧原蟲數(shù)是薄血膜的15～25倍。因此，瘧疾診斷性鏡檢應(yīng)以檢查厚血膜為主。均應(yīng)查完整個厚血膜，未查見瘧原蟲則判為陰性。第28頁,共40頁，2024年2月25日，星期天間日瘧原蟲惡性瘧原蟲厚血膜集中視野第29頁,共40頁，2024年2月25日，星期天各種不同時期瘧原蟲形態(tài)的比較第30頁,共40頁，2024年2月25日，星期天薄血膜

P.v.R

P.f.R大小：約占RBC的1/3約占RBC的1/5部位：RBC里少見多個蟲同時寄生RBC的邊緣、常見多個蟲同時寄生核：大、較松、兩核少見小、致密、兩核多見胞漿：較粗、不規(guī)則纖細(xì)、規(guī)則第31頁,共40頁，2024年2月25日，星期天P.v.R對比P.f.R厚血膜第32頁,共40頁，2024年2月25日，星期天厚血膜P.v.G對比P.f.G第33頁,共40頁，2024年2月25日，星期天血片中的PC、雜質(zhì)注意雜質(zhì)與瘧原蟲的區(qū)分PC雜質(zhì)第34頁,共40頁，2024年2月25日，星期天鏡檢技術(shù)

1.采血時間：

P.v——發(fā)作后10小時內(nèi)采血，各期（R、T、S、G）瘧原蟲均可查見。

P.f——發(fā)作時采血可查到R；發(fā)作后10天左右采血可查見G。

2.厚薄片的制作：

厚血膜—取約4ul血液置于玻片合適位置上，用推片一角由里向外旋轉(zhuǎn)2-4圈，涂成直徑0.8-1厘米大小的圓形均勻血膜。薄血膜—取約1ul血液置于玻片合適位置上，推成寬2厘米、長2.5厘米的血膜。

同片可制作兩個厚血膜，一個薄血膜（見下圖）。玻片頭可粘貼患者信息，亦可在薄片頭以鉛筆寫上患者姓名、編碼等。

第35頁,共40頁，2024年2月25日，星期天3.染色（1）首先晾干血片，以甲醇或無水酒精固定薄血膜。應(yīng)用

吉氏染色法，每張玻片約需染液1ml。（2）配制染色工作液：1ml清潔水（Ph7.0-7.2）+1-2滴吉氏原液/血片，混勻。須現(xiàn)配現(xiàn)用。（3）將配好的吉氏染液滴入血片，并均勻分布染色10-20分鐘。然后用清水輕輕將染液沖洗干凈，晾干待檢。4.鏡檢

（1）一般只查厚片，薄片僅作為瘧原蟲分類參考和編號用。（2）可先以油鏡頭配合5X低倍目鏡鏡檢，有疑問時可調(diào)換10X目鏡進(jìn)行觀察。（3）檢查時應(yīng)從厚血膜的上緣開始，按下圖示意的順序方向，視野稍疊視野地查完整個血膜。第36頁,共40頁，2024年2月25日，星期天厚血膜鏡檢示意圖第37頁,共40頁，2024年2月25日，星期天5.結(jié)果報告

陰性：報告“未查到MP”陽性：報告“查到XXXMP”厚血膜瘧原蟲鏡檢“記號”報告法：