薄層色譜法分離菠菜色素及胡蘿卜素含量測(cè)定

薄層色譜法分離菠菜色素及胡蘿卜素含量測(cè)定一、本文概述本文旨在探討薄層色譜法在菠菜色素分離以及胡蘿卜素含量測(cè)定中的應(yīng)用。我們將首先介紹薄層色譜法的基本原理和操作步驟，然后詳細(xì)闡述如何運(yùn)用這一技術(shù)從菠菜中提取并分離出色素，包括葉綠素、類(lèi)胡蘿卜素等。在此基礎(chǔ)上，我們將進(jìn)一步探討如何利用薄層色譜法對(duì)菠菜中的胡蘿卜素進(jìn)行含量測(cè)定，以及這一方法在實(shí)際應(yīng)用中的優(yōu)勢(shì)和局限性。菠菜作為一種營(yíng)養(yǎng)豐富的蔬菜，含有大量的葉綠素和類(lèi)胡蘿卜素等天然色素，這些色素對(duì)人體健康具有重要的保健作用。對(duì)菠菜中色素的提取和測(cè)定具有重要的實(shí)際意義。薄層色譜法作為一種常用的色譜分離技術(shù)，具有操作簡(jiǎn)便、分離效果好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，在色素分離和含量測(cè)定方面有著廣泛的應(yīng)用。通過(guò)本文的研究，我們希望能夠?yàn)椴げ松氐奶崛『蜏y(cè)定提供一種有效、可靠的方法，并為相關(guān)領(lǐng)域的研究提供參考和借鑒。我們也期待通過(guò)不斷優(yōu)化和完善這一技術(shù)，推動(dòng)其在實(shí)際生產(chǎn)中的應(yīng)用，為人們的健康和生活帶來(lái)更多的福祉。二、薄層色譜法的基本原理薄層色譜法（Thin-LayerChromatography，TLC）是一種基于物質(zhì)在固定相和移動(dòng)相之間的分配平衡原理的色譜分析方法。該方法利用不同物質(zhì)在薄層板上吸附和解吸附能力的差異，使混合物中的各組分在薄層板上分離。在薄層色譜法中，通常將待測(cè)樣品溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲校缓髮⑵潼c(diǎn)樣在涂有吸附劑的薄層板上。當(dāng)含有樣品的薄層板放入含有移動(dòng)相的密閉容器中時(shí)，移動(dòng)相將沿薄層板向上移動(dòng)，同時(shí)攜帶樣品中的各組分進(jìn)行分離。在分離過(guò)程中，各組分在固定相（吸附劑）和移動(dòng)相之間發(fā)生分配作用。由于不同物質(zhì)與吸附劑的親和力不同，它們?cè)谝苿?dòng)相中的溶解度也有差異，因此各組分在薄層板上的移動(dòng)速度不同，從而實(shí)現(xiàn)分離。當(dāng)移動(dòng)相前沿達(dá)到薄層板頂部時(shí)，取出薄層板并晾干，然后用適當(dāng)?shù)娘@色劑對(duì)各組分進(jìn)行顯色，以便觀察和記錄各組分的分離情況。在菠菜色素及胡蘿卜素含量測(cè)定的應(yīng)用中，薄層色譜法能夠有效地將菠菜中的葉綠素、類(lèi)胡蘿卜素等色素組分分離出來(lái)。通過(guò)比較標(biāo)準(zhǔn)品與樣品中各組分的Rf值（比移值），可以確定樣品中各色素組分的種類(lèi)。結(jié)合適當(dāng)?shù)亩糠治龇椒?，如比色法或密度掃描法，還可以對(duì)菠菜中胡蘿卜素的含量進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定。薄層色譜法具有操作簡(jiǎn)便、分離效果好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，在菠菜色素及胡蘿卜素含量測(cè)定等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。三、實(shí)驗(yàn)材料與方法菠菜：選擇新鮮、無(wú)病蟲(chóng)害的菠菜作為實(shí)驗(yàn)材料，確保色素含量豐富，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。試劑：包括有機(jī)溶劑（如石油醚、丙酮等）用于提取色素，以及薄層色譜法所需的吸附劑（如硅膠G）和顯色劑等。儀器：薄層色譜板、點(diǎn)樣毛細(xì)管、展開(kāi)缸、熱風(fēng)干燥箱、紫外光燈、分光光度計(jì)等。使用分光光度計(jì)在胡蘿卜素特征吸收波長(zhǎng)（如450nm）處測(cè)定吸光度。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)方法和步驟，可以成功分離菠菜中的色素，并準(zhǔn)確測(cè)定其中胡蘿卜素的含量。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析通過(guò)薄層色譜法，我們成功分離出了菠菜中的色素成分，并通過(guò)對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)品，初步鑒定了其中的葉綠素和類(lèi)胡蘿卜素。進(jìn)一步采用比色法測(cè)定了胡蘿卜素的含量，獲得了較為準(zhǔn)確的結(jié)果。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，我們觀察到薄層色譜法能夠有效地分離色素，且分離效果良好。比色法測(cè)定的胡蘿卜素含量與預(yù)期值相符，證明了實(shí)驗(yàn)方法的可行性。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，菠菜中含有豐富的葉綠素和類(lèi)胡蘿卜素。這些色素對(duì)于菠菜的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和色澤具有重要影響。葉綠素是植物光合作用的關(guān)鍵色素，對(duì)于植物的生長(zhǎng)和發(fā)育具有重要作用。而類(lèi)胡蘿卜素則具有抗氧化、抗炎等多種生物活性，對(duì)人體健康有益。通過(guò)比色法測(cè)定的胡蘿卜素含量表明，菠菜中胡蘿卜素的含量較為豐富。胡蘿卜素是一種重要的營(yíng)養(yǎng)素，具有維持視力、增強(qiáng)免疫力等多種生理功能。菠菜作為一種富含胡蘿卜素的蔬菜，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，我們也注意到了一些可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素。例如，樣品的處理過(guò)程中，需要嚴(yán)格控制時(shí)間和溫度，以避免色素的分解和損失。在測(cè)定胡蘿卜素含量時(shí)，應(yīng)注意選擇合適的波長(zhǎng)和比色方法，以提高測(cè)定的準(zhǔn)確性。通過(guò)薄層色譜法分離菠菜色素及胡蘿卜素含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)，我們成功分離出了菠菜中的色素成分，并測(cè)定了胡蘿卜素的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明了實(shí)驗(yàn)方法的可行性，并為進(jìn)一步研究和應(yīng)用提供了有價(jià)值的參考信息。五、討論與結(jié)論在討論與結(jié)論部分，我們將對(duì)薄層色譜法在菠菜色素及胡蘿卜素含量測(cè)定中的應(yīng)用進(jìn)行深入探討，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行總結(jié)。在討論部分，我們注意到薄層色譜法在分離菠菜色素過(guò)程中展現(xiàn)出了良好的分離效果。該方法基于色素在薄層板上的吸附和溶解性質(zhì)差異，實(shí)現(xiàn)了對(duì)菠菜中多種色素的有效分離。相較于其他分離方法，薄層色譜法具有操作簡(jiǎn)便、分離效果好、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，因此在菠菜色素分離領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。在胡蘿卜素含量測(cè)定方面，我們采用了薄層色譜法結(jié)合比色法進(jìn)行了測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法具有較高的準(zhǔn)確性和靈敏度，能夠準(zhǔn)確反映菠菜中胡蘿卜素的含量。我們還發(fā)現(xiàn)菠菜中胡蘿卜素的含量受到種植環(huán)境、品種、采摘時(shí)間等多種因素的影響，這為菠菜種植和品質(zhì)控制提供了有益的參考信息。在結(jié)論部分，我們總結(jié)了薄層色譜法在菠菜色素及胡蘿卜素含量測(cè)定中的優(yōu)勢(shì)和應(yīng)用價(jià)值。該方法不僅能夠?qū)崿F(xiàn)菠菜中多種色素的有效分離，還能準(zhǔn)確測(cè)定胡蘿卜素的含量，為菠菜品質(zhì)評(píng)價(jià)和營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究提供了有力支持。我們還指出了實(shí)驗(yàn)中可能存在的不足之處，如操作過(guò)程中的誤差控制、比色法的精度提升等問(wèn)題，為今后的研究提供了改進(jìn)方向。薄層色譜法在菠菜色素及胡蘿卜素含量測(cè)定中具有良好的應(yīng)用效果，具有廣闊的推廣和應(yīng)用前景。我們相信隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，該方法將在菠菜品質(zhì)評(píng)價(jià)和營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究中發(fā)揮更加重要的作用。參考資料：甘油三酯是油脂中的一種重要成分，其含量的測(cè)定對(duì)于評(píng)價(jià)油脂的質(zhì)量和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值具有重要意義。薄層色譜法是一種常用的分離和檢測(cè)方法，可以用于測(cè)定油脂中甘油三酯的含量。樣品處理：將油樣溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，如氯仿、甲醇等，然后通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)等方法去除溶劑，得到甘油三酯的純品。薄層板的制備：將硅膠G或聚酰胺粉均勻涂布在玻璃板上，經(jīng)過(guò)干燥后形成薄層板。點(diǎn)樣：將甘油三酯樣品點(diǎn)在薄層板上，用定量毛細(xì)管或微量進(jìn)樣器進(jìn)行點(diǎn)樣。展開(kāi)：將薄層板放入展開(kāi)劑中，使甘油三酯隨著展開(kāi)劑在薄層板上移動(dòng)。展開(kāi)劑的選擇需要根據(jù)不同的甘油三酯種類(lèi)進(jìn)行選擇，常用的展開(kāi)劑有石油醚、乙酸乙酯等。顯色：將展開(kāi)后的薄層板取出，晾干后進(jìn)行顯色處理。常用的顯色劑有硫酸、硝酸等，可以與甘油三酯發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生顏色。定量：通過(guò)測(cè)量顯色后甘油三酯斑點(diǎn)的面積和顏色強(qiáng)度，計(jì)算出甘油三酯的含量。常用的定量方法有斑點(diǎn)面積法和比色法等。通過(guò)薄層色譜法測(cè)定油脂中甘油三酯含量，可以得到不同油脂樣品中甘油三酯的含量。根據(jù)甘油三酯的含量可以評(píng)價(jià)油脂的質(zhì)量和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，為食品工業(yè)和油脂工業(yè)提供重要的參考依據(jù)。薄層色譜法還可以用于研究甘油三酯的組成和結(jié)構(gòu)，對(duì)于油脂科學(xué)的發(fā)展也具有重要的意義。薄層色譜法（TLC），系將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點(diǎn)樣、展開(kāi)后，根據(jù)比移值（Rf）與適宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖的比移值（Rf）作對(duì)比，用以進(jìn)行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定的方法。薄層色譜法是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，也用于跟蹤反應(yīng)進(jìn)程。薄層色譜，或稱(chēng)薄層層析(thin—layerchromatography)，是以涂布于支持板上的支持物作為固定相，以合適的溶劑為流動(dòng)相，對(duì)混合樣品進(jìn)行分離、鑒定和定量的一種層析分離技術(shù)。這是一種快速分離諸如脂肪酸、類(lèi)固醇、氨基酸、核苷酸、生物堿及其他多種物質(zhì)的特別有效的層析方法，從50年代發(fā)展起來(lái)至今，仍被廣泛采用。薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法，它利用各成分對(duì)同一吸附劑吸附能力不同，使在流動(dòng)相(溶劑)流過(guò)固定相(吸附劑)的過(guò)程中，連續(xù)的產(chǎn)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達(dá)到各成分的互相分離的目的。薄層層析可根據(jù)作為固定相的支持物不同，分為薄層吸附層析(吸附劑)、薄層分配層析(纖維素)、薄層離子交換層析(離子交換劑)、薄層凝膠層析(分子篩凝膠)等。一般實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。吸附是表面的一個(gè)重要性質(zhì)。任何兩個(gè)相都可以形成表面，吸附就是其中一個(gè)相的物質(zhì)或溶解于其中的溶質(zhì)在此表面上的密集現(xiàn)象。在固體與氣體之間、固體與液體之間、吸附液體與氣體之間的表面上，都可能發(fā)生吸附現(xiàn)象。物質(zhì)分子之所以能在固體表面停留，這是因?yàn)楣腆w表面的分子(離子或原子)和固體內(nèi)部分子所受的吸引力不相等。在固體內(nèi)部，分子之間相互作用的力是對(duì)稱(chēng)的，其力場(chǎng)互相抵消。而處于固體表面的分子所受的力是不對(duì)稱(chēng)的，向內(nèi)的一面受到固體內(nèi)部分子的作用力大，而表面層所受的作用力小，因而氣體或溶質(zhì)分子在運(yùn)動(dòng)中遇到固體表面時(shí)受到這種剩余力的影響，就會(huì)被吸引而停留下來(lái)。吸附過(guò)程是可逆的，被吸附物在一定條件下可以解吸出來(lái)。在單位時(shí)間內(nèi)被吸附于吸附劑的某一表面積上的分子和同一單位時(shí)間內(nèi)離開(kāi)此表面的分子之間可以建立動(dòng)態(tài)平衡，稱(chēng)為吸附平衡。吸附層析過(guò)程就是不斷地產(chǎn)生平衡與不平衡、吸附與解吸的動(dòng)態(tài)平衡過(guò)程。例如用硅膠和氧化鋁作支持劑，其主要原理是吸附力與分配系數(shù)的不同，使混合物得以分離。當(dāng)溶劑沿著吸附劑移動(dòng)時(shí)，帶著樣品中的各組分一起移動(dòng)，同時(shí)發(fā)生連續(xù)吸附與解吸作用以及反復(fù)分配作用。由于各組分在溶劑中的溶解度不同，以及吸附劑對(duì)它們的吸附能力的差異，最終將混合物分離成一系列斑點(diǎn)。如作為標(biāo)準(zhǔn)的化合物在層析薄板上一起展開(kāi)，則可以根據(jù)這些已知化合物的Rf值(后面介紹Rf值)對(duì)各斑點(diǎn)的組分進(jìn)行鑒定，同時(shí)也可以進(jìn)一步采用某些方法加以定量。各種物質(zhì)的Rf隨要分離化合物的結(jié)構(gòu)，濾紙或薄層板的種類(lèi)、溶劑、溫度等不同而不同，但在條件固定的情況下，Rf對(duì)每一種化合物來(lái)說(shuō)是一個(gè)特定數(shù)值。用以涂布薄層用的載板有玻璃板、鋁箔及塑料板，對(duì)薄層板的要求是：需要有一定的機(jī)械強(qiáng)度及化學(xué)惰性，且厚度均勻、表面平整，因此玻璃板是最常用的。載板可以有不同規(guī)格，但最大不得超過(guò)20×20，玻璃板在使用前必須洗凈、干燥備用。玻板除另有規(guī)定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。薄層層析硅膠薄層層析硅膠最常用的有硅膠G、硅膠GF〈〉、硅膠H、硅膠HF〈〉，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F〈〉等。其顆粒大小，一般要求直徑為10～40μm。薄層涂布，一般可分無(wú)粘合劑和含粘合劑兩種；前者系將固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合劑，一般常用10～15%煅石膏(CaSO2H2O在140℃烘4小時(shí))，混勻后加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉水溶液(5～7%)適量調(diào)成糊狀，均勻涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或緩沖液的薄層。應(yīng)使用適合載板大小的玻璃制薄層色譜展開(kāi)缸，并有嚴(yán)密的蓋子，除另有規(guī)定外，底部應(yīng)平整光滑，應(yīng)便于觀察。除另有規(guī)定外，將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布(厚度為2～3mm)，取下涂好薄層的玻板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干，后在110℃烘30分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過(guò)透射光和反射光檢視)。常用吸附劑的基本情況：顆粒的大小，太大洗脫劑流速快分離效果不好，太細(xì)溶液流速太慢。一般說(shuō)來(lái)吸附性強(qiáng)的顆粒稍大，吸附性弱的顆粒稍小。氧化鋁一般在100-150目。氧化鋁分為堿性氧化鋁，適用于碳?xì)浠衔?、生物堿及堿性化合物的分離，一般適用于PH為9-10的環(huán)境。中性氧化鋁適用于醛、酮、醌、酯等PH約為5的中性物質(zhì)的分離。酸性氧化鋁適用于PH4~5的酸性有機(jī)酸類(lèi)的分離。氧化鋁、硅膠根據(jù)活性分為五個(gè)級(jí)，一級(jí)活性最高，五級(jí)最低。黏合劑及添加劑：為了使固定相(吸附劑)牢固地附著在載板上以增加薄層的機(jī)械強(qiáng)度，有利于操作，需要時(shí)在吸附劑中加入合適的黏合劑：有時(shí)為了特殊的分離或檢出需要，要在固定相中加入某些添加劑。薄層板的活化：硅膠板于105-110℃烘30分鐘，氧化鋁板于150-160℃烘4小時(shí)，可得活性的薄層板。點(diǎn)樣方式：分為手動(dòng)點(diǎn)樣和自動(dòng)點(diǎn)樣。手動(dòng)點(diǎn)樣主要器具為微量毛細(xì)管、微量注射器等。自動(dòng)點(diǎn)樣采用半自動(dòng)點(diǎn)樣儀或全自動(dòng)點(diǎn)樣儀，按預(yù)設(shè)程序自動(dòng)點(diǎn)樣。手動(dòng)點(diǎn)樣靈活方便，常用于各種TLC鑒別中，器具以微量毛細(xì)管最常用。儀器的自動(dòng)點(diǎn)樣準(zhǔn)確性好，常用于薄層掃描法的含量測(cè)定。點(diǎn)樣方法：分為接觸式點(diǎn)樣和噴霧點(diǎn)樣。噴霧點(diǎn)樣為儀器控制，在此不展開(kāi)描述。接觸式手工點(diǎn)樣時(shí)，應(yīng)注意小心用點(diǎn)樣器垂直接觸薄層板表面以防止損傷板面。若薄層吸附劑表面被損壞或點(diǎn)成洼孔，則展開(kāi)后斑點(diǎn)成不規(guī)則形狀；靠近溶劑前沿的化合物形成三角形，靠近原點(diǎn)的化合物形成新月形，影響測(cè)定結(jié)果。原點(diǎn)損失帶來(lái)誤差，也將使展開(kāi)后的定量和判斷不準(zhǔn)確。(1)點(diǎn)樣量：原點(diǎn)位置對(duì)樣品容積的負(fù)荷量有限，體積不宜太大，一般為5~10μl，樣品的濃度通常為5~2mg，太濃時(shí)展開(kāi)劑從原點(diǎn)外圍繞行而不是通過(guò)整個(gè)原點(diǎn)把它帶動(dòng)向前，使斑點(diǎn)拖尾或重疊，降低分離效率。點(diǎn)樣量太小，不能檢出清晰的斑點(diǎn)影響判斷。點(diǎn)樣量太多，展開(kāi)劑不能全部負(fù)載，容易產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象。當(dāng)點(diǎn)樣量適合時(shí)，可采用點(diǎn)狀點(diǎn)樣；當(dāng)點(diǎn)樣量過(guò)大，原點(diǎn)無(wú)法負(fù)荷時(shí)，可采用條帶狀點(diǎn)樣，得到更好的分離效果，提高分辨率。(2)樣品的溶劑：樣品在溶劑中溶解度很大，原點(diǎn)將變成空心圓，影響隨后的線性展開(kāi)，所以原則上應(yīng)選擇對(duì)被測(cè)成分可以溶解但溶解度不是很大的溶劑。供試液的溶劑在原點(diǎn)殘留會(huì)改變展開(kāi)的選擇性，親水性溶劑殘留在原點(diǎn)吸收大氣中的水分(特別在高濕度環(huán)境)對(duì)色譜質(zhì)量也會(huì)產(chǎn)生影響，因此除去原點(diǎn)殘存溶劑是必要的，但對(duì)遇熱不穩(wěn)定和易揮發(fā)的成分，應(yīng)避免高溫加熱，以免成分被破壞或損失。展開(kāi)劑也稱(chēng)溶劑系統(tǒng)，流動(dòng)性或洗脫劑，是在平面色譜中用作流動(dòng)相的液體。展開(kāi)劑的主要任務(wù)是溶解被分離的物質(zhì)，在吸附劑薄層上轉(zhuǎn)移被分離物質(zhì)，使各組分的Rf值在2~8之間并對(duì)被分離物質(zhì)要有適當(dāng)?shù)倪x擇性。作為展開(kāi)劑的溶劑應(yīng)滿足以下要求：適當(dāng)?shù)募兌?、適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定性、低黏度、線性分配等溫線、很低或很高的蒸氣壓以及盡可能低的毒性。展開(kāi)劑的配制：配制展開(kāi)劑時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格控制其比例準(zhǔn)確度，如遇到比例很小的溶劑時(shí)，應(yīng)盡量滿足其精確度要求，而不是為圖方便省事直接用滴管加入。展開(kāi)劑配好后如果渾濁不清，不能立即使用。應(yīng)轉(zhuǎn)移入分液漏斗中，待其靜置分層澄清后再取其上層(或下層)液進(jìn)行展開(kāi)。展開(kāi)劑的用量：展開(kāi)劑的用量以薄層板放入的深度為距原點(diǎn)5mm為宜，切勿倒入過(guò)多，將原點(diǎn)浸入展開(kāi)劑，成分將被展開(kāi)劑溶解而不隨展開(kāi)劑在板上分離。溶劑蒸氣的作用：溶劑蒸氣在薄層色譜中起著重要作用，它和液相(展開(kāi)劑)、固定相(吸附劑)一起構(gòu)成了一個(gè)作用機(jī)制復(fù)雜的三維層析過(guò)程。溶劑的質(zhì)量：展開(kāi)劑中溶劑的質(zhì)量直接影響薄層色譜分離能力。如果含有雜質(zhì)超標(biāo)、水分超標(biāo)以及吸收空氣中干擾氣體等，均可影響分離結(jié)果。如甲酸乙酯遇水容易水解，如用多次開(kāi)瓶的殘存溶劑，因逐漸吸收大氣中的水分而不同程度地分解，所得的色譜與用新鮮溶劑所得色譜有明顯差別。展開(kāi)劑展開(kāi)后，溶劑比例發(fā)生變化，勿重復(fù)使用。A單次展開(kāi)用同一種展開(kāi)劑一個(gè)方向展開(kāi)一次，這種方式在平面色譜中應(yīng)用最為廣泛。(垂直上行展開(kāi)，垂直下行展開(kāi)，一向水平展開(kāi)，對(duì)向水平展開(kāi))B多次展開(kāi)單向?qū)Υ苏归_(kāi)，用相同的展開(kāi)劑沿同一方向進(jìn)行相同距離的重復(fù)展開(kāi)，直至分離滿意，廣泛應(yīng)用于薄層色譜法薄層展開(kāi)室需預(yù)先用展開(kāi)劑飽和，可在室中加入足夠量的展開(kāi)劑，并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開(kāi)劑中，密封室頂?shù)纳w，使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作。將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)室的展開(kāi)劑中，浸入展開(kāi)劑的深度為距薄層板底邊5～0cm(切勿將樣點(diǎn)浸入展開(kāi)劑中)，密封室蓋，待展開(kāi)至規(guī)定距離(一般為10～15cm)，取出薄層板，晾干，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定檢測(cè)。c熒光一些化合物吸收了較短波長(zhǎng)的光，在瞬間發(fā)射出比照射光波長(zhǎng)更長(zhǎng)的光，而在紙或薄層上顯出不同顏色的熒光斑點(diǎn)(靈敏度高、專(zhuān)屬性高)多數(shù)有機(jī)化合物吸附碘蒸氣后顯示不同程度的黃褐色斑點(diǎn)，這種反應(yīng)有可逆及不可逆兩種情況，前者在離開(kāi)碘蒸氣后，黃褐色斑點(diǎn)逐漸消退，并且不會(huì)改變化合物的性質(zhì)，且靈敏度也很高，故是定位時(shí)常用的方法；后者是由于化合物被碘蒸氣氧化、脫氫增強(qiáng)了共軛體系，因此在紫外光下可以發(fā)出強(qiáng)烈而穩(wěn)定的熒光，對(duì)定性及定量都非常有利，但是制備薄層時(shí)要注意被分離的化合物是否改變了原來(lái)的性質(zhì)。用紫外照射分離后的紙或薄層后，使化合物產(chǎn)生光加成，光分解、光氧化還原及光異構(gòu)等光化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致物質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生某些變化，如形成熒光發(fā)射功能團(tuán)。發(fā)生熒光增強(qiáng)或淬滅及熒光物質(zhì)的激發(fā)或發(fā)射波長(zhǎng)發(fā)生移動(dòng)等現(xiàn)象，從而提高了分析的靈敏度和選擇性。廣泛應(yīng)用的定位方法。用于紙色譜的顯色劑一般都適用于薄層色譜，還有防腐劑的顯色劑不適合用于紙色譜及含有有機(jī)黏合劑薄層的顯色，又時(shí)噴顯色劑后續(xù)加熱，這也不是用于紙色譜。顯色方法a噴霧顯色：顯色劑溶液以氣溶膠的形式均勻的噴灑在紙和薄層。b浸漬顯色：揮去展開(kāi)劑的薄層板，垂直的插入盛有展開(kāi)劑的浸漬槽中，設(shè)定浸板及抽出速度和規(guī)定在顯色劑中浸漬的時(shí)間。a通用顯色劑硫酸溶液(硫酸：水1：1，硫酸：乙醇1：1)、5%碘的氯仿溶液、中性05%高錳酸鉀溶液、堿性高錳酸鉀溶液(還原性化合物在淡紅色背景上顯黃色斑點(diǎn))在一定的色譜條件下，特定化合物的Rf值是一個(gè)常數(shù)，因此有可能根據(jù)化合物的Rf值鑒定化合物。薄層掃描法指用一定波長(zhǎng)的光照射在經(jīng)薄層層析后的層析板上，對(duì)具有吸收或能產(chǎn)生熒光的層析斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，用反射法或透射法測(cè)定吸收的強(qiáng)度，以檢測(cè)層析譜。對(duì)于中成藥復(fù)方制劑，亦可用相應(yīng)的原藥材按需要組合作陰、陽(yáng)對(duì)照，然后比較其薄層掃描圖譜加以鑒別。使用儀器為薄層掃描儀。如需用薄層掃描儀對(duì)色譜斑點(diǎn)作掃描檢出，或直接在薄層上對(duì)色譜斑點(diǎn)作掃描定量，則可用薄層掃描法。薄層掃描的方法，除另有規(guī)定外，可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及使用說(shuō)明，結(jié)合具體情況，選擇吸收法或熒光法，用雙波長(zhǎng)或單波長(zhǎng)掃描。由于影響薄層掃描結(jié)果的因素很多，故應(yīng)在保證供試品的斑點(diǎn)在一定濃度范圍內(nèi)呈線性的情況下，將供試品與對(duì)照品在同一塊薄層上展開(kāi)后掃描，進(jìn)行比較并計(jì)算定量，以減少誤差。各種供試品，只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜，才能獲得滿意的結(jié)果。食品中的營(yíng)養(yǎng)成分是蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類(lèi)、油和脂肪、維生素、食用色素等。與食品和營(yíng)養(yǎng)有害的物質(zhì)則有殘留農(nóng)藥、致癌的黃曲霉素等。這些成分都可用薄層色譜法定性和定量。蛋白質(zhì)和多肽水解為氨基酸，對(duì)不同來(lái)源的動(dòng)物性和植物性蛋白水解后產(chǎn)生不同的氨基酸進(jìn)行定性和定量，有助于解決蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和食品營(yíng)養(yǎng)問(wèn)題。二十多種氨基酸用硅膠G薄層板雙向展開(kāi)，一次即能分開(kāi)，然后定性和定量，方法快速而簡(jiǎn)便。多糖和寡糖可水解為單糖，可用薄層色譜法進(jìn)行單糖和雙糖的定性和定量。文獻(xiàn)上有每一個(gè)糖的Rf值和相應(yīng)的展開(kāi)劑。油和脂肪解為脂肪酸，脂肪酸的種類(lèi)和結(jié)構(gòu)中的不飽和鍵數(shù)，與營(yíng)養(yǎng)和衛(wèi)生有關(guān)，關(guān)于油和脂肪的薄層(硅膠、硅藻土、纖維素)分析，文獻(xiàn)和綜述很多。脂溶性和水溶性維生素在薄層上可方便地定性和定量，例如脂溶性維生素A，D，E，K及B2，B6，B12，酶酸，泛酸，葉酸，C，促生素在硅膠G薄層上可用苯：甲醇：丙酮：冰醋酸(7:2:5:5)分開(kāi)。用硅膠G薄層和丙酮：氯仿(1:1)以及激發(fā)波長(zhǎng)365nm和波長(zhǎng)450nm，可用熒光法測(cè)定ng量的曲黃素B1,B2,G1,G2，法靈敏快速。薄層色譜法在合成藥物和天然藥物中的應(yīng)用很廣。有些文獻(xiàn)和內(nèi)容偏重于合成藥物、化合物及其代謝產(chǎn)物，有文獻(xiàn)為在中草藥分析中的應(yīng)用。每一類(lèi)藥物，例如磺胺、巴比妥、苯駢噻嗪、甾體激素、抗菌素、生物堿、強(qiáng)心甙、黃酮、揮發(fā)油和萜等，都包括幾種或十幾種化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)非常相似的化合物，可以在上述文獻(xiàn)中找出二種全盤(pán)的展開(kāi)劑，一次即能把每一類(lèi)的多種化合物很好地分開(kāi)。藥物代謝產(chǎn)物的樣品一般先經(jīng)預(yù)處理后用薄層分析，應(yīng)用也很廣，但有時(shí)因含量甚微，不用采用氣相和高效液相色譜法靈敏。化工和化學(xué)方面的有機(jī)原料和產(chǎn)品都可用薄層色譜法分析。例如含各種功能基的有機(jī)物，石油產(chǎn)品，塑料單體，橡膠裂解產(chǎn)物，油漆原料，合成洗滌劑等，內(nèi)容非常廣泛。薄層色譜法的應(yīng)用還滲透到醫(yī)學(xué)和臨床中去，例如它是一種快速的診斷方法可用于妊娠的早期診斷。方法是基于在孕婦的尿中能檢出比未媳婦婦女的尿中含更多的孕二醇，把兩者的尿提取后點(diǎn)在薄層上比較，即可作出判斷。這一方法可不用動(dòng)物而在2~3小時(shí)內(nèi)化驗(yàn)出結(jié)果。如前所述，經(jīng)典的毒物分析有許多缺點(diǎn)，毒物分析和法醫(yī)化學(xué)采用薄層色譜法等新的手段，對(duì)麻醉藥、巴比妥、印度大麻、鴉片生物堿等均可分析。十多種有機(jī)磷農(nóng)藥和六種有機(jī)氯農(nóng)藥都可在硅膠G薄層上分開(kāi)并測(cè)定含量，可用于農(nóng)藥分析及其殘留量分析。薄層層析有許多優(yōu)點(diǎn)：它保持了操作方便、設(shè)備簡(jiǎn)單、顯色容易等特點(diǎn)，同時(shí)展開(kāi)速率快，一般僅需15～20分鐘；混合物易分離，分辨力一般比以往的紙層析高10～100倍，它既適用于只有0．01μg的樣品分離，又能分離大于500mg的樣品作制備用，而且還可以使用如濃硫酸、濃鹽酸之類(lèi)的腐蝕性顯色劑。薄層層析的缺點(diǎn)是對(duì)生物高分子的分離效果不甚理想。菠菜是一種富含色素的蔬菜，其葉片中含有葉綠素、類(lèi)胡蘿卜素等多種色素。這些色素對(duì)于植物的生長(zhǎng)和發(fā)育具有重要的作用，同時(shí)也對(duì)人體健康產(chǎn)生影響。為了更好地研究菠菜葉片中的色素，需要對(duì)其進(jìn)行有效的分離和純化。薄層色譜法（ThinLayerChromatography,TLC）是一種廣泛應(yīng)用于分離和純化天然產(chǎn)物的技術(shù)，具有操作簡(jiǎn)便、分離效果好等優(yōu)點(diǎn)。本研究采用薄層色譜法分離菠菜葉片中的色素，以期為進(jìn)一步研究提供基礎(chǔ)。（1）樣品制備：將新鮮的菠菜葉片洗凈，晾干后用研缽搗碎，加入適量的甲醇，置于冰箱中浸泡24小時(shí)。然后過(guò)濾，將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，得到色素提取物。（2）薄層色譜分離：在干凈的玻璃板上均勻涂布一層硅膠G，待干后將提取物點(diǎn)樣于板上，用乙醚-丙酮（1:1）為展開(kāi)劑進(jìn)行展開(kāi)。待展開(kāi)完成后，將板置于紫外燈下觀察，記錄各色素斑點(diǎn)的位置和顏色。（3）色素的定性和定量分析：根據(jù)色素斑點(diǎn)的位置和顏色，初步確定各色素的種類(lèi)。通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較，對(duì)各色素進(jìn)行定性分析。采用色譜軟件計(jì)算各色素斑點(diǎn)的面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和峰面積，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而計(jì)算出各色素的含量。通過(guò)薄層色譜分離，我們得到了多個(gè)明顯的色