GB-T33417-2016過氧化氫氣體滅菌生物指示物檢驗(yàn)方法

過氧化氫氣體滅菌生物指示物檢驗(yàn)方法Testmethodofbiologicalindicatorforhydrogenperoxidevapoursterilizationprocesses中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心環(huán)1過氧化氫氣體滅菌生物指示物檢驗(yàn)方法GB18281.1.醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌生物指示物第1部分：通則GB/T24628醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌生物與化學(xué)指示物測(cè)試設(shè)備消毒技術(shù)規(guī)范(2002年版)衛(wèi)生部殺滅微生物數(shù)量達(dá)到90%所需要的時(shí)間。2生物指示物抗力測(cè)試儀biologicalindicatorevaluatorresistometer產(chǎn)生限定條件下滅菌過程中物理變化規(guī)定組合，以測(cè)量抗力的專用設(shè)備。4檢驗(yàn)指標(biāo)與方法回收菌量大于或等于1×10?CFU/片，對(duì)于成品的指示物，載體回收的菌量與說明書上的菌量誤差在-50%～+300%之間。測(cè)定菌量時(shí)，應(yīng)最少測(cè)試4個(gè)樣本，具體檢測(cè)方法參見附錄A。測(cè)試時(shí)應(yīng)使用生物指示物抗力測(cè)試儀，生物指示物抗力測(cè)試儀要求見GB/T24628。在使用濃度為59%±2%過氧化氫，滅菌艙內(nèi)作用濃度為2.3mg/L±0.4mg/L,作用溫度50℃士0.5℃的條件下，D值的要求為0.75s～8s。對(duì)于成品的生物指示物，測(cè)試的D值應(yīng)在說明書上的D值士20%范圍內(nèi)。應(yīng)使用下列2種方法進(jìn)行測(cè)試：b)驗(yàn)證法測(cè)試D值，將a)測(cè)試出的D值和4.1.2的回收菌量的平均數(shù)帶人式(1)和式(2),計(jì)算出ST值和KT值。參見附錄C。 (1) (2)式中：N?——每批生物指示物的回收菌量的平均數(shù)。按GB18281.1的要求進(jìn)行滅菌過程兼容性的測(cè)試。a)有使10CFU～100CFU的微生物恢復(fù)生長(zhǎng)的能力；b)有使損傷的微生物恢復(fù)生長(zhǎng)的能力，并且有中和殘留的滅菌因子對(duì)微生物抑制生長(zhǎng)的能力；c)經(jīng)過過氧化氫氣體滅菌后不會(huì)產(chǎn)生抑制微生物生長(zhǎng)的物質(zhì)。每個(gè)樣本的恢復(fù)培養(yǎng)基中，接種10CFU～100CFU的嗜熱脂肪桿菌芽孢(ATCC7953),同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照和陽性對(duì)照，培養(yǎng)至規(guī)定時(shí)間后觀察有無嗜熱脂肪桿菌芽孢生長(zhǎng)(一般觀察培養(yǎng)基的顏色變3取包裝完好的同批次生物指示物放置于制造商建議的保存條件下，存放至標(biāo)簽和說明書規(guī)定的有4(資料性附錄)A.3將菌懸液樣本用電動(dòng)混勻器混合20s,或在手掌上用力振打80次，隨即吸取0.5mL加至10-1A.4將10~'管依前法用電動(dòng)混勻器混合20s,或在手掌上用力振打80次，混勻，再吸取出0.5mL加入10-2管內(nèi)。如此類推，直至最后一管。必要時(shí)，還可作某稀釋度的1:1或1:4稀釋。A.5選擇適宜稀釋度試管(以預(yù)計(jì)生長(zhǎng)菌落數(shù)每平板為15CFU～300CFU者為宜),吸取其中混合均勻的懸液1.0mL加于無菌平皿內(nèi)。每一稀釋度接種2個(gè)平皿。一般需接種2個(gè)～3個(gè)不同稀釋度。A.8培養(yǎng)至72h,計(jì)數(shù)菌落數(shù)。一般以肉眼觀A.9根據(jù)稀釋倍數(shù)和接種量計(jì)算每毫升菌液中或每一菌片(染菌載體)上的平均菌落數(shù)。5B.1隨機(jī)選取120個(gè)樣本。分成6組，每組20個(gè)樣本。c)暴露時(shí)間至少為6個(gè)時(shí)間點(diǎn)，至少1個(gè)時(shí)間點(diǎn)全部有菌生長(zhǎng)，至少2個(gè)時(shí)間點(diǎn)部分有菌生長(zhǎng)，至少2個(gè)時(shí)間點(diǎn)全部無菌生長(zhǎng)。B.3對(duì)6組樣本分別暴露。B.4暴露完成后將6組生物指示物在56℃士2℃溫度下，按照說明書要求培養(yǎng)到規(guī)定時(shí)間，記錄陰性6(資料性附錄)將50個(gè)試驗(yàn)樣本放入過氧化氫氣體生物指示物抗力測(cè)試儀中，作用濃度為2.3mg/L±0.4mg/L,56℃±2℃培養(yǎng)至說明書規(guī)定時(shí)間。若全部有將50個(gè)試驗(yàn)樣本放入過氧化氫氣體生物指示物