大黃的檢查及含量測(cè)定

大黃的檢查及含量測(cè)定【摘要】目的：對(duì)隨機(jī)抽取的10批大黃藥材進(jìn)行各項(xiàng)針對(duì)性檢查及其中土大黃苷含量的測(cè)定，為大黃藥材的質(zhì)量控制提供參考。方法：參照2020年版《中國(guó)藥典》中的方法及步驟對(duì)10批隨機(jī)抽取的大黃藥材進(jìn)行水分、總灰分、水溶性浸出物、二氧化硫殘留量檢查，含量測(cè)定等檢查。對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行RSD等分析處理，通過(guò)比較這10批大黃的總蒽醌及游離蒽醌等含量，評(píng)價(jià)大黃的質(zhì)量?jī)?yōu)劣。結(jié)果：10批大黃的薄層鑒別所顯示的斑點(diǎn)，跟其對(duì)照藥材、大黃酸對(duì)照品溶液的薄層色譜圖出現(xiàn)在一樣的位置上，其中大黃藥材的薄層色譜圖中沒(méi)有出現(xiàn)土大黃苷成分的斑點(diǎn)；水分測(cè)定結(jié)果為6.02%～8.71%，計(jì)算所得平均值結(jié)果為7.00%；總灰分檢查結(jié)果為3.37%～8.91%，平均值為5.39%水溶性浸出物結(jié)果為33.53%～49.31%，平均值42.11%；二氧化硫殘留量測(cè)定結(jié)果為0~7.35mg/kg，平均值為2.10mg/kg；總蒽醌含量測(cè)定結(jié)果為1.23%~2.13%平均值為1.76%；游離蒽醌含量測(cè)定結(jié)果為0.32%~1.58%平均值為0.94%。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)對(duì)大黃進(jìn)行的各種檢查，包括水分檢查、總灰分檢查、水溶性浸出物檢查、二氧化硫殘留量檢查及含量測(cè)定，除批號(hào)為YPA7D0002的大黃樣品總蒽醌含量不達(dá)標(biāo)，其余批次大黃樣品均符合2020年版《中國(guó)藥典》中規(guī)定，可初步推斷這10批隨機(jī)抽取的大黃藥材為質(zhì)量較優(yōu)的正品?！娟P(guān)鍵詞】大黃；土大黃苷；總蒽醌；檢查；含量測(cè)定

InspectionanddeterminationofRhubarb[Abstract]Objective:Thetargetedexaminationof10batchesofrhubarbmedicinalmaterialsrandomlyselectedandthedeterminationofthecontentofrhaponticinwerecarriedout,whichprovidedareferenceforthequalitycontrolofrhubarbmedicinalmaterials.Methods:Accordingtothemethodsandstepsinthe2020editionoftheChinesePharmacopoeia,themoisture,totalash,water-solubleextract,sulfurdioxideresidueandcontentdeterminationof10batchesofrhubarbwereexamined.TheexperimentalresultswereanalyzedbyRSD,andthequalityofrhubarbwasobtainedbycomparingthecontentsoftotalanthraquinoneandfreeanthraquinoneinthe10batchesofrhubarb.Results:TheTLCidentificationof10batchesofrhubarbshowedthesamecolorspotsinthesamepositionasthereferencemedicinalmaterialsandrheinreferencesolution,anddidnotshowthesamecolorspotsinthesamepositionasthereferencesolutionofrhaponticin.Theresultsofmoisturedeterminationwere6.02%~8.71%,withanaverageof7.00%.Thetotalashcontentwas3.37%~8.91%,withanaverageof5.39%.Theresultsofwater-solubleextractwere33.53%~49.31%,withanaverageof42.11%.Thedeterminationresultsofsulfurdioxideresiduewere0~7.35mg/kg,withanaverageof2.10mg/kg.Thetotalanthraquinonecontentwas1.23%~2.13%,withanaverageof1.76%.Thecontentoffreeanthraquinonewas0.32%~1.58%,withanaverageof0.94%.Conclusion:Inthisexperiment,variousinspectionsofrhubarbwerecarriedout,includingmoistureinspection,totalashinspection,water-solubleextractinspection,sulfurdioxideresidueinspectionandcontentdetermination.ExceptthatthetotalanthraquinonecontentoftherhubarbsamplewithbatchnumberYPA7D0002wasnotuptostandard,theotherbatchesofrhubarbsampleswereinlinewiththeprovisionsofthe2020editionofthe'ChinesePharmacopoeia'.Itcanbepreliminarilyinferredthatthese10batchesofrandomlyselectedrhubarbmedicinalmaterialsareauthenticwithbetterquality.[Keywords]RhubarbEarthrhubarbglycosidesTotalanthraquinoneInspectionDetermination目錄 TOC\o"1-3"\u1前言 前言大黃為蓼科植物掌葉大黃RheumpalmatumL.、唐古特大黃RheumtanguticumMaxim.exBalf.或藥用大黃RheumofficinaleBaill.的干燥根和根莖[1]。大黃始載于東漢時(shí)期的《神農(nóng)本草經(jīng)》[2]，《吳普本草》對(duì)其釋言道：“生蜀郡北部或隴西。二月卷生黃赤，其葉四四相當(dāng)，莖高三尺許。三月花黃，五月實(shí)黑，八月采根。根有黃汁，切片陰干。[3]”又陶弘景釋其名曰：“大黃，其色也。將軍之號(hào)。當(dāng)取其駿快也。[4]”故大黃又得將軍之號(hào)。大黃藥味苦、藥性寒，歸脾經(jīng)、胃經(jīng)、大腸經(jīng)、肝經(jīng)、心包經(jīng)，具有清熱瀉火、利濕退黃、瀉下等功效，內(nèi)服常用于治療實(shí)熱積滯便秘，濕熱痢疾、水腫等，而外用可治燒燙傷，具有悠久的入藥歷史。據(jù)史書(shū)記載，西漢初大黃已被大批量銷往歐洲，成為中國(guó)主要出口的中藥材之一[5]，由此足以顯示大黃其功效之優(yōu)。大黃的主要活性成分及主要藥用成分為蒽醌類成分，大量臨床試驗(yàn)表明其具有預(yù)防和治療急性肝損傷的作用[6]，同時(shí)，其顯著的抗炎特性使其在中國(guó)已被用作強(qiáng)收斂劑，在臨床上廣泛應(yīng)用于治療炎癥相關(guān)疾病[7]。除此，來(lái)自大黃的蒽醌類成分，還可作為阿爾茨海默?。ˋD）三甲胺（TMA）裂解酶的潛在抑制劑，用于預(yù)防和治療AD[8]，并可改善腸道屏障，調(diào)節(jié)腸道微生物紊亂[9]。隨著大黃的藥效在臨床應(yīng)用中愈加凸顯，其需求量隨之增大，導(dǎo)致在原藥材的選擇會(huì)因藥用資源的匱乏而選用其它的代用品，導(dǎo)致其中藥用成分的含量會(huì)因不同來(lái)源或不同栽培方式而有所不同[10]，這就在一定程度上制約了以大黃為主要原料的制劑或方劑的質(zhì)量。為此，現(xiàn)行的2020年版《中國(guó)藥典》也指定了包括水分、灰分、浸出物、總蒽醌含量、游離蒽醌含量等作為其定量質(zhì)量和控制指標(biāo)[11]，由此可見(jiàn)，為保證大黃臨床運(yùn)用的安全性和有效性，對(duì)其進(jìn)行各項(xiàng)檢查和質(zhì)量評(píng)價(jià)具有重要的研究意義。為了解市面上大黃藥材的質(zhì)量情況，本課題研究隨機(jī)選取了10批由廣州市藥材公司中藥飲片廠購(gòu)進(jìn)的大黃藥材進(jìn)行土大黃苷的薄層鑒別、水分檢查、總灰分檢查、浸出物檢查及總蒽醌、游離蒽醌含量測(cè)定。同時(shí)，考慮到中藥材及飲片的加工貯藏過(guò)程普遍存在以硫磺熏蒸達(dá)到干燥、防蟲(chóng)、防腐和防霉變等作用的現(xiàn)象[12]，本課題實(shí)驗(yàn)還開(kāi)展了大黃中二氧化硫的殘留量檢查。最終綜合各考察因素的結(jié)果，分析各批次藥材的質(zhì)量?jī)?yōu)劣，為大黃的質(zhì)量控制提供參考。

2材料與方法2.1材料.1.1儀器本實(shí)驗(yàn)所使用儀器如下表1。表1實(shí)驗(yàn)儀器名稱型號(hào)生產(chǎn)公司萬(wàn)分之一電子天平BSA224S-CW廣州授科儀器科技有限公司數(shù)控超聲波清洗器KQ-300DA昆山超聲儀器有限公司高速多功能粉碎機(jī)RHP-100浙江永康榮浩工貿(mào)有限公司調(diào)速多用振蕩器HY-2江蘇金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-6常州澳華儀器有限公司數(shù)顯鼓風(fēng)恒溫干燥箱GZX-9070MBE上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠百萬(wàn)分-微量分析天平BM-20廣州市錦泉儀器科技有限公司套式恒溫器TC-15海寧市新華醫(yī)療器械廠高效液相色譜儀UltiMate3000美國(guó)戴安公司電阻爐溫度控制器KSW余姚金電儀表有限公司磁力加熱攪拌器79-1常州澳華儀器有限公司原子吸收分光光度計(jì)AA-7000日本島津公司.1.2試劑本實(shí)驗(yàn)所使用儀器如下表2。表2實(shí)驗(yàn)試劑名稱生產(chǎn)公司甲醇（AR）廣州化學(xué)試劑廠甲酸（AR）廣州化學(xué)試劑廠石油醚（30~60℃）廣州化學(xué)試劑廠甲酸乙酯（AR）廣州化學(xué)試劑廠甲苯（AR）廣州化學(xué)試劑廠丙酮（AR）廣州化學(xué)試劑廠磷酸（AR）廣州化學(xué)試劑廠乙腈（色譜純）美國(guó)Fisher公司甲醇（色譜純）美國(guó)Fisher公司蒸餾水屈臣氏商標(biāo)有限公司.1.3試藥本實(shí)驗(yàn)所使用對(duì)照品試藥如下表3。表3實(shí)驗(yàn)藥材樣品信息名稱生產(chǎn)公司/機(jī)構(gòu)批號(hào)土大黃苷對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品檢定研究院110794-201607蘆薈大黃素對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品檢定研究院110785-201710大黃酸對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品檢定研究院110757-201607大黃素對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品檢定研究院110756-201512大黃酚對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品檢定研究院110796-201118大黃素甲醚對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品檢定研究院110758-2016162.1.4大黃藥材信息本實(shí)驗(yàn)所使用大黃藥材由廣州市藥材公司中藥飲片廠提供，樣品信息如下表4。表4大黃藥材信息編號(hào)批號(hào)1YPA7D00012YPA7D00023YPA7D00034YPA7D00045YPA7D00056YPA7D00067YPA7D00078YPA7D00089YPA7D000910YPA7D00010

2.2方法2.2.1薄層鑒別及土大黃苷的檢查用稱量舟精密地稱量1毫克大黃酸的對(duì)照品，用吸管少量多次吸取甲醇溶液沖洗稱量舟中的對(duì)照品，使其溶解到規(guī)格為1毫升的容量瓶中，再取一支2毫升注射器，針頭裝入帶有0.45微米微孔濾膜的進(jìn)樣頭，將配置好的對(duì)照品儲(chǔ)備液倒入少量至此注射器，將溶液打進(jìn)1.5毫升進(jìn)樣小瓶中，作為大黃酸的對(duì)照品溶液；同法，可得到濃度為每毫升十微克的土大黃苷對(duì)照品儲(chǔ)備液。其中土大黃苷對(duì)照品儲(chǔ)備液需現(xiàn)配現(xiàn)用。薄層鑒別操作方法：取本品粉末0.1克置規(guī)格為50毫升的錐形瓶中，加入甲醇20毫升，封上封口膜，錐形瓶中的溶液首先要在常溫下冷浸1小時(shí)，然后用干燥的漏斗過(guò)濾，用5毫升移液管吸取濾液到蒸發(fā)皿上，打開(kāi)水浴鍋調(diào)節(jié)溫度為100℃，把蒸發(fā)皿放到水浴鍋上，蒸干溶液后，可得到殘?jiān)?，再往其中?0毫升的水進(jìn)行復(fù)溶，殘?jiān)芙馔耆娜芤恨D(zhuǎn)移至錐形瓶中，加入1毫升鹽酸溶液后，水浴鍋中回流30分鐘，進(jìn)行酸性條件的水解，30分鐘后立即取出，待錐形瓶中的溶液冷卻后，把溶液完全轉(zhuǎn)移到分液漏斗，以每次20毫升乙醚的用量，振搖萃取溶液兩次，合并乙醚層的溶液至蒸發(fā)皿上，把蒸發(fā)皿放到水浴鍋上，利用水蒸氣熱量把溶液蒸干，可得到殘?jiān)?，再往其中加?毫升氯仿復(fù)溶，經(jīng)0.45微米微孔濾膜過(guò)濾即可得到供試品儲(chǔ)備液。同法可把0.1克大黃的對(duì)照藥材，制成大黃的對(duì)照藥材儲(chǔ)備液。用規(guī)格為4微升的毛細(xì)管分別吸取以上三種儲(chǔ)備液，對(duì)應(yīng)點(diǎn)于同一塊硅膠H薄層板上，此板以CMC-Na為黏合劑，將1毫升甲酸、5毫升甲酸乙酯、15毫升石油醚（30～60℃）混合均勻，靜置一段時(shí)間，取上層溶液作為展開(kāi)劑。先在展開(kāi)缸中一側(cè)加入一定量的展開(kāi)劑，密封保持20分鐘。待溶劑蒸氣飽和后，應(yīng)馬上把已完成點(diǎn)樣的硅膠H薄層板放入其中，注意展開(kāi)劑不與點(diǎn)樣位置接觸，立即密閉展開(kāi)缸，使其充分展開(kāi)，觀察到展開(kāi)劑前沿已超過(guò)標(biāo)記的前沿線時(shí)，取出硅膠H薄層板，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視，觀察硅膠H薄層板顯色情況。以濃氨水為顯色劑，均勻噴于薄層板上，觀察其熏氨后的顯色情況。土大黃苷檢查操作方法：取本品0.1克粉末置規(guī)格為50毫升的錐形瓶中，加入10毫升甲醇溶液，封上封口膜，然后在20分鐘的超聲提取后，把錐形瓶從超聲儀中取出，用干燥的漏斗過(guò)濾，用1毫升移液管吸取濾液至10毫升容量瓶中，以甲醇為溶劑定容，即可得到供試品溶液。用規(guī)格為5微升的毛細(xì)管吸取樣品溶液及土大黃苷儲(chǔ)備液，對(duì)應(yīng)點(diǎn)于同一塊無(wú)需活化的聚酰胺薄膜上，將3毫升甲苯、2毫升甲醇、0.5毫升甲酸乙酯、0.01毫升甲酸、0.5毫升丙酮混合均勻，作為展開(kāi)劑。載有供試品的聚酰胺薄膜的展開(kāi)同薄層鑒別操作方法中的展開(kāi)操作，氨熏操作除外。2.2.2水分檢查按照《中國(guó)藥典》2020年版四部中通則0832的水分測(cè)定法烘干法（第二法），測(cè)定樣品為10批大黃藥材樣品，每批樣品進(jìn)行3個(gè)平行樣測(cè)定。取已恒重的扁形稱量瓶，用減重稱量法在萬(wàn)分之一天平上稱取2克大黃藥材樣品，開(kāi)啟瓶蓋，把烘箱溫度調(diào)至105攝氏度，把扁形瓶放入其中進(jìn)行5小時(shí)的干燥操作后，蓋好瓶蓋，迅速把稱量瓶取出，移置放有預(yù)先干燥好的硅膠珠的干燥器中，放冷30分鐘后，將稱物瓶取出，迅速稱定，稱定后在以上溫度下繼續(xù)進(jìn)行1小時(shí)干燥，然后轉(zhuǎn)移至同一干燥器中冷卻約30分鐘，再次精確地稱定，直至前后兩次連續(xù)稱量樣品重量的差異≤5毫克即可判定為實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)。由式：含水量（%）=樣品失去的重量-樣品的稱樣量2.2.3總灰分檢查按照《中國(guó)藥典》2020年版四部中通則2302的總灰分測(cè)定法，測(cè)定樣品為10批大黃藥材樣品，每批樣品進(jìn)行3個(gè)平行樣的測(cè)定。取已恒重的坩堝，用減重稱量法在萬(wàn)分之一天平上稱取4克過(guò)二號(hào)篩的大黃藥材粉末，平鋪于恒重后的坩堝中，半合蓋子在電陶爐上慢慢熾熱，直至完全炭化沒(méi)有出現(xiàn)白色煙霧，迅速放入已提前600攝氏度恒溫的馬弗爐中，熾灼5小時(shí)后關(guān)閉馬弗爐，稍打開(kāi)馬弗爐門(mén)，待馬弗爐中溫度下降至200攝氏度，將坩堝蓋上蓋子，馬上轉(zhuǎn)移至預(yù)先干燥好的硅膠珠的干燥器中使之冷卻，迅速精密地稱量，再將坩堝蓋半開(kāi)放入馬弗爐600攝氏度熾灼1小時(shí)，重復(fù)降溫步驟，迅速精密稱定重量；注意若不恒重，則繼續(xù)操作上述步驟直至灰燼恒重。根據(jù)稱定坩堝中殘?jiān)闹亓?，以干燥品?jì)算10批大黃藥材中總灰分的含量（%）。2.2.4二氧化硫殘留量檢查按照《中國(guó)藥典》2020年版四部中通則2331項(xiàng)下的二氧化硫殘留量測(cè)定法的酸堿滴定法（第一法），測(cè)定樣品為10批大黃藥材樣品，每批樣品進(jìn)行3個(gè)平行樣的測(cè)定。在萬(wàn)分之一天平上稱定約10克大黃藥材，倒入容量為2升的兩頸圓底燒瓶，加入溶劑為350毫升水。在兩頸圓底燒瓶中間瓶口處連接一根豎式回流冷凝管，然后打開(kāi)冷凝水開(kāi)關(guān)。把冷凝管上端的二氧化硫?qū)С隹谶B接一條橡膠管，其末端需伸至裝有50毫升3%H2O2溶液的錐形瓶底部，其氧化性可使其用作二氧化硫的吸收液。在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，需往二氧化硫吸收液中加入3滴此實(shí)驗(yàn)酸堿滴定的指示劑，即濃度為2.5mg/ml的甲基紅乙醇溶液，并用0.01mol/L的氫氧化鈉溶液進(jìn)行空白的校正，滴定終點(diǎn)時(shí)溶液應(yīng)呈黃色。開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，可通過(guò)氣體流量計(jì)使氮?dú)庖悦糠昼娂s0.2升的流速流通。兩頸圓底燒瓶側(cè)瓶口連接裝有10毫升濃度為6mol/L的鹽酸溶液的分液漏斗，打開(kāi)活塞，使分液漏斗中的鹽酸溶液迅速加入兩頸燒瓶進(jìn)行反應(yīng)，立刻打開(kāi)電熱套開(kāi)關(guān)，對(duì)蒸餾瓶進(jìn)行加熱，直至溶液沸騰，并在保持1.5小時(shí)的微沸后，停止對(duì)蒸餾瓶的加熱。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，溶液始終微沸，大黃樣品中的亞硫酸鹽物質(zhì)在鹽酸的處理下轉(zhuǎn)化為二氧化硫，隨后被氮?dú)鈳С?，?dǎo)致吸收液變熱，為了避免滴定的準(zhǔn)確性，需徹底冷卻后，再把裝有吸收液的錐形瓶轉(zhuǎn)移到磁力攪拌器上，利用轉(zhuǎn)子的磁力使之不斷被攪拌，用濃度為0.01mol/L氫氧化鈉溶液進(jìn)行二氧化硫的滴定，直至指示劑呈黃色，此時(shí)若指示劑持續(xù)20秒不褪色，則達(dá)到滴定終點(diǎn)，隨后再將最終滴定的讀數(shù)以實(shí)驗(yàn)前的空白試驗(yàn)進(jìn)行校正。按以下公式計(jì)算:大黃樣品的二氧化硫殘留量（式中：A為大黃樣品溶液消耗NaOH（aq）體積，ml；B為空白消耗NaOH（aq）體積，ml；c為NaOH（aq）的摩爾濃度，mol/L；0.032為1ml濃度為1mol/L的NaOH（aq）相當(dāng)?shù)腟O2的質(zhì)量，g；W為大黃樣品的重量，g。將消耗的NaOH溶液體積代入上式計(jì)算，可分別計(jì)算得到10批大黃藥材中二氧化硫的殘留量（%）。2.2.5浸出物檢查按照《中國(guó)藥典》2020年版四部中通則2201的熱浸法進(jìn)行水溶性浸出物的檢查，測(cè)定樣品為10批大黃藥材樣品，每批樣品進(jìn)行3個(gè)平行樣測(cè)定。用減重稱量法在萬(wàn)分之一天平上稱取2克過(guò)二號(hào)篩的大黃藥材粉末，倒入規(guī)格為250毫升的錐形瓶中，加入溶劑為100毫升水，蓋上塞子并封上封口膜，稱定重量，錐形瓶中的溶液首先要在常溫下冷浸1小時(shí)，隨后連接蛇形冷凝管，打開(kāi)冷凝水開(kāi)關(guān)，調(diào)節(jié)水浴鍋溫度，使溶液沸騰，并保持錐形瓶中溶液1小時(shí)微沸。1小時(shí)后，把錐形瓶從水浴鍋中取出，蓋上塞子，待錐形瓶中液體徹底放冷后，再放到天平秤上稱定重量，用水進(jìn)行補(bǔ)重，充分搖晃均勻后，用干燥漏斗濾過(guò)，用25毫升移液管移取濾液至已恒重的蒸發(fā)皿上，調(diào)整水浴鍋溫度為100攝氏度，把蒸發(fā)皿內(nèi)溶劑蒸干后，轉(zhuǎn)移至已穩(wěn)定于105攝氏度的烘箱內(nèi)進(jìn)行3小時(shí)干燥過(guò)程，然后取出裝有浸出物的蒸發(fā)皿，轉(zhuǎn)移至放有預(yù)先干燥好的硅膠珠的干燥器中，30分鐘后蒸發(fā)皿及樣品冷卻，迅速在萬(wàn)分之一天平上稱重。由式：浸出物含量%2.2.6含量測(cè)定2.2.6.1色譜條件本課題研究選擇C-18色譜柱（250mm×4.5mm，5μm)，采用0.1%磷酸溶液-甲醇（15:85）流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為二百五十四納米；流動(dòng)相流動(dòng)速度為每分鐘一毫升；柱溫箱溫度為三十?dāng)z氏度；進(jìn)樣量為十微升；理論塔板數(shù)以大黃素峰計(jì)算應(yīng)≥3000。2.2.6.2對(duì)照品溶液的制備稱量舟精密稱定大黃素甲醚對(duì)照品1毫克，用吸管少量多次吸取甲醇溶液沖洗稱量舟中的對(duì)照品，溶解到25毫升容量瓶中，制成每1毫升含大黃素甲醚40微克的溶液；同時(shí)用微量天平稱定蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚對(duì)照品各1.6毫克，同法制成濃度均為80μg/ml的四份對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別用2微升移液管吸取上述對(duì)照品溶液混合到同一容量瓶中，得到每1毫升溶液中含8微克大黃素甲醚及含上述其余四種對(duì)照品各16微克的混合對(duì)照溶液。取一支5毫升注射器，針頭裝入帶有0.45微米微孔濾膜的進(jìn)樣頭，將配置好的對(duì)照品儲(chǔ)備液倒入少量至此注射器，將溶液打進(jìn)1.5毫升進(jìn)樣小瓶中，作為對(duì)照品溶液。2.2.6.3總蒽醌供試品溶液的制備采用減重稱量法在萬(wàn)分之一天平上稱取0.15克過(guò)四號(hào)篩的大黃藥材粉末，倒入規(guī)格為250毫升的錐形瓶中，用25毫升移液管吸取甲醇試液到裝有樣品的錐形瓶中，蓋緊塞子，放到天平秤上稱定重量，調(diào)整水浴鍋溫度，再把錐形瓶放入其中進(jìn)行加熱回流，保持溶液微沸1小時(shí)后，迅速?gòu)乃″佒腥〕鲥F形瓶，待錐形瓶?jī)?nèi)溶液自然晾涼后，再放到天平秤上稱定重量，用甲醇試液進(jìn)行補(bǔ)重，充分搖晃均勻后，用干燥漏斗濾過(guò)。用5毫升移液管移取所得續(xù)濾液到100毫升的具塞錐形瓶中，把錐形瓶敞開(kāi)塞子放于通風(fēng)櫥，待甲醇完全揮去后，移取10毫升8%鹽酸溶液到已揮干甲醇的錐形瓶中，蓋上塞子，封上封口膜，放入超聲儀（超聲儀功率為250W），使溶液進(jìn)行2分鐘的超聲提取，再往錐形瓶加入10毫升氯仿，調(diào)整水浴鍋溫度，再把錐形瓶放入其中進(jìn)行加熱回流，保持溶液微沸1小時(shí)后，迅速?gòu)乃″佒腥〕鲥F形瓶，待錐形瓶?jī)?nèi)溶液自然晾涼后，轉(zhuǎn)移100毫升錐形瓶中所有溶液到分液漏斗中，為保證成分不損失，再采用氯仿試液少量多次地洗滌錐形瓶，合并洗滌液，并轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，靜置分層，緩慢旋動(dòng)分液漏斗的活塞，使下層的氯仿萃取液流入圓底燒瓶中，再以每次10毫升氯仿的用量，對(duì)酸液進(jìn)行三次萃取操作，合并所有氯仿萃取液，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收?qǐng)A底燒瓶?jī)?nèi)溶劑至干，往殘?jiān)尤脒m量甲醇試液復(fù)溶，并把復(fù)溶后的溶液吸到至規(guī)格為10毫升的容量瓶，以甲醇為溶劑進(jìn)行定容，充分搖勻，取一支2毫升注射器，針頭裝入帶有0.45微米微孔濾膜的進(jìn)樣頭，將得到的樣品溶液倒入少量至此注射器，將溶液打進(jìn)1.5毫升進(jìn)樣小瓶中，作為總蒽醌供試品溶液。2.2.6.4游離蒽醌供試品溶液的制備采用減重稱量法在萬(wàn)分之一天平上稱取0.15克過(guò)四號(hào)篩的大黃藥材粉末，倒入規(guī)格為250毫升的錐形瓶中，用25毫升移液管吸取甲醇試液到裝有樣品的錐形瓶中，蓋緊塞子，放到天平秤上稱定重量，調(diào)整水浴鍋溫度，再把錐形瓶放入其中進(jìn)行加熱回流，保持溶液微沸1小時(shí)后，迅速?gòu)乃″佒腥〕鲥F形瓶，待錐形瓶?jī)?nèi)溶液自然晾涼后，再次放到天平秤上稱定重量，用甲醇試液進(jìn)行補(bǔ)重，充分搖晃均勻后，用干燥漏斗濾過(guò)。取一支2毫升注射器，針頭裝入帶有0.45微米微孔濾膜的進(jìn)樣頭，將得到的樣品溶液倒入少量至此注射器，將溶液打進(jìn)1.5毫升進(jìn)樣小瓶中，作為游離蒽醌供試品溶液。2.2.6.5測(cè)定法液相色譜儀設(shè)置對(duì)照品溶液、供試品溶液的進(jìn)樣量、流速、柱溫、檢測(cè)波長(zhǎng)、梯度洗脫等相關(guān)參數(shù)，由自動(dòng)進(jìn)樣器取樣并注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。2.2.7數(shù)據(jù)分析方法2.2.7.1主成分分析法主成分分析分析常選擇實(shí)驗(yàn)結(jié)果中相關(guān)性較強(qiáng)的一些指標(biāo)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，最終構(gòu)建出少數(shù)能替代原始數(shù)據(jù)的主成分，并進(jìn)行后續(xù)分析。在本課題研究中，采用IBMSPSS25軟件，將水分、總灰分、浸出物檢查、總蒽醌含量測(cè)定及游離蒽醌含量測(cè)定這五項(xiàng)指標(biāo)的數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，消除五個(gè)變量指標(biāo)量綱不同的影響后，再進(jìn)行主成分分析，并通過(guò)相關(guān)公式計(jì)算，得出綜合得分，并根據(jù)綜合得分進(jìn)行排名[8]。2.2.7.2系統(tǒng)聚類分析法系統(tǒng)聚類分析利用了分類的思想，以多個(gè)不同的考察指標(biāo)為依據(jù)，對(duì)樣品間的相似性進(jìn)行分析，將特征相似的研究對(duì)象歸為一類，使組內(nèi)相似性最大化，組間差距最大化。在本課題研究中，選擇對(duì)不同批次的大黃藥材進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析，采用IBMSPSS25軟件，以水分、總灰分、浸出物檢查、總蒽醌含量測(cè)定及游離蒽醌含量測(cè)定為指標(biāo)，將具有相似特征的大黃藥材聚為一類，初步區(qū)分差異較大的大黃藥材。

3結(jié)果與分析3.1大黃藥材質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果3.1.1薄層鑒別及土大黃苷的檢查在365納米波長(zhǎng)下，可以看到大黃供試品薄層色譜中，有熒光斑點(diǎn)顯示，同時(shí)大黃酸對(duì)照品及對(duì)照藥材的色譜相應(yīng)的位置上，也出現(xiàn)了相同的現(xiàn)象，結(jié)果見(jiàn)圖1；氨熏后，大黃供試品薄層色譜中的斑點(diǎn)顏色由橙黃色轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色，結(jié)果見(jiàn)圖2。在土大黃苷的檢查薄層色譜中，大黃樣品均無(wú)與土大黃苷對(duì)照品一樣的亮藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，結(jié)果見(jiàn)圖3。1212345678910R2R1圖1不同產(chǎn)地大黃藥材薄層鑒別色譜圖（365nm）（R1：大黃對(duì)照藥材；R2：大黃酸對(duì)照品；1～10：大黃供試品）圖2不同產(chǎn)地大黃藥材薄層鑒別色譜圖（氨熏）（R1：大黃對(duì)照藥材；R2：大黃酸對(duì)照品；1～10：大黃供試品）圖3大黃土大黃苷色譜圖（365nm）R：土大黃苷對(duì)照品；1～10：大黃供試品3.1.2水分檢查對(duì)10批大黃藥材樣品進(jìn)行水分測(cè)定，并對(duì)每批樣品進(jìn)行3個(gè)平行樣測(cè)定，結(jié)果取平均值，求得其RSD（%）為0.00%～0.46%，均小于2.0%，符合偶然誤差的限定。水分測(cè)定結(jié)果為6.02%～8.71%，平均值為7.00%，根據(jù)2020年版《中國(guó)藥典》大黃所測(cè)水分不得超過(guò)15.0%，水分檢查均合格，結(jié)果見(jiàn)表5。表5大黃水分測(cè)定結(jié)果（x±s,n=3）樣品水分含量（%）RSD（%123456789由上表5結(jié)果可得，10批大黃藥材中水分的含量較低，可能與超微粉碎后的干燥、滅菌工藝有關(guān)，該操作可使藥材內(nèi)部的水分明顯減少。3.1.3總灰分檢查對(duì)10批大黃藥材樣品進(jìn)行總灰分檢查，并對(duì)每批樣品進(jìn)行3個(gè)平行樣測(cè)定，結(jié)果取平均值，求得其RSD（%）為0.16%～0.89%，均小于2.0%，符合偶然誤差的限定?？偦曳譁y(cè)定結(jié)果為3.37%～8.91%，平均值為3.37%，根據(jù)2020年版《中國(guó)藥典》大黃所測(cè)總灰分不得超過(guò)10.0%，總灰分檢查均合格，結(jié)果見(jiàn)表6。表6大黃總灰分測(cè)定結(jié)果（x±s,n=3）樣品總灰分（%）RSD（%123456789由上表6結(jié)果可得，10批大黃藥材中灰分的含量較低，可能與大黃經(jīng)過(guò)凈選、粉碎等工藝有關(guān)，這些操作極大程度上減少了藥材自身的雜質(zhì)。3.1.4二氧化硫殘留量檢查對(duì)10批大黃藥材樣品進(jìn)行二氧化硫殘留量檢查，并對(duì)每批樣品進(jìn)行3個(gè)平行樣測(cè)定，結(jié)果取平均值，求得其RSD（%）為0.26%～1.44%，均小于3.0%，符合偶然誤差的限定。二氧化硫殘留量測(cè)定結(jié)果為0~7.35mg/kg，平均值為2.10mg/kg，根據(jù)2020年版《中國(guó)藥典》大黃所測(cè)二氧化硫殘留量測(cè)定結(jié)果應(yīng)≤150mg/kg，故大黃藥材的二氧化硫殘留量檢查均合格，如表7所示。表7大黃二氧化硫殘留量測(cè)定結(jié)果（x±s,n=3）樣品二氧化硫殘留量（%）RSD（%123456789注：“-”表示未檢出。由上表7結(jié)果可得，10批大黃藥材的二氧化硫殘留量含量非常低，可能與大黃原藥材基本不進(jìn)行二氧化硫熏蒸加工有關(guān)。3.1.5浸出物檢查對(duì)10批大黃藥材樣品進(jìn)行水溶性浸出物檢查，并對(duì)每批樣品進(jìn)行3個(gè)平行樣測(cè)定，結(jié)果取平均值，求得其RSD（%）為0.06%～0.28%，均小于2.0%，符合偶然誤差的限定。浸出物測(cè)定結(jié)果為33.53%～49.31%，平均值為42.11%，根據(jù)2020年版《中國(guó)藥典》大黃所測(cè)浸出物不得少于25.0%，浸出物檢查均合格，如表8所示。表8大黃浸出物測(cè)定結(jié)果（x±s,n=3）樣品浸出物含量（%）RSD（%137.83±0.0523456789由上表8結(jié)果可得，10批大黃藥材的浸出物含量普遍偏高，可能與超微粉碎之后的溶出增加有關(guān)。3.1.6含量測(cè)定對(duì)10批大黃藥材樣品進(jìn)行總蒽醌與游離蒽醌的含量測(cè)定，對(duì)每批樣品進(jìn)行3個(gè)平行樣測(cè)定，結(jié)果取平均值，求得總蒽醌含量其RSD（%）為0.00%～1.17%，游離蒽醌含量其RSD（%）為0.00%～3.77%，均不超過(guò)4.0%，符合偶然誤差限定?？傒祯繙y(cè)定結(jié)果為1.23%～2.13%，平均值為1.76%；游離蒽醌含量測(cè)定結(jié)果為0.32%～1.58%，平均值為0.94%，結(jié)果見(jiàn)表9。根據(jù)2020年版《中國(guó)藥典》大黃中所測(cè)總蒽醌含量不得少于1.5%，游離蒽醌含量不得少于0.20%，10批大黃樣品含量測(cè)定結(jié)果只有1批不符合藥典規(guī)定總量，色譜圖見(jiàn)圖4。表9大黃中總蒽醌與游離蒽醌的含量（x±s,n=3）樣品總蒽醌含量（%）RSD（%）游離蒽醌含量（%）RSD（%）10.53±0.0220.001.58±0.0130.631.18±0.0240.32±0.0150.70±0.0160.97±0.0171.43±0.0080.001.25±0.0090.000.86±0.00AABBCCA：蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、大黃酸的混合對(duì)照品；B：大黃樣品中的總蒽醌；C：大黃樣品中的游離蒽醌；HPLC圖由上表9結(jié)果可得，批號(hào)YPA7D0002的大黃樣品總蒽醌及游離蒽醌含量最高；批號(hào)YPA7D0004的大黃樣品總蒽醌及游離蒽醌含量最低，其中總蒽醌含量不符合2020年版《中國(guó)藥典》大黃中所規(guī)定總蒽醌含量。圖4的HPLC圖中大黃樣品色譜圖在與混合對(duì)照品色譜圖相同保留時(shí)間處具有相對(duì)應(yīng)的峰，說(shuō)明測(cè)定的成分為大黃藥材中的總蒽醌及游離蒽醌。3.2各批次大黃綜合評(píng)價(jià)結(jié)果3.2.1主成分分析采用IBMSPSS25軟件，針對(duì)這10批大黃藥材的質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果，選擇五個(gè)指標(biāo)：水分檢查、總灰分檢查、浸出物檢查、總蒽醌含量測(cè)定、游離蒽醌含量測(cè)定作為變量進(jìn)行主成分分析，選擇相關(guān)性矩陣，得到以上五個(gè)指標(biāo)的分析結(jié)果見(jiàn)下表10、表11、表12、表13，主成分F1、F2的各項(xiàng)分析參數(shù)見(jiàn)下表14。表10KMO和巴特利特檢驗(yàn)表KMO取樣適切性量數(shù)巴特利特球形檢驗(yàn)近似卡方自由度顯著性

表11公因子方差表指標(biāo)初始提取水分總灰分浸出物總蒽醌含量測(cè)定表12總方差解釋表成分初始特征值總計(jì)方差百分比累積%提取載荷平方和總計(jì)方差百分比累積%13.38267.63267.6323.38267.63267.63221.23024.59492.2261.23024.59492.22630.2284.55796.78440.1282.55799.34150.0330.659100.00表13成分矩陣表因子載荷矩陣值提取成分?jǐn)?shù)水分總灰分浸出物總蒽醌含量測(cè)定游離蒽醌含量測(cè)定表14主成分分析特征值、累積貢獻(xiàn)率信息表主成分特征值方差貢獻(xiàn)率（%）累積貢獻(xiàn)率（%）F167.63267.632F224.59492.226由表10中得到的KMO取樣適切性量數(shù)為0.645，可知這五個(gè)指標(biāo)適宜用作因子分析的變量，且巴特利特球形檢驗(yàn)計(jì)算所得顯著性值(為0.000)<0.05，均說(shuō)明本課題數(shù)據(jù)適合做主成分分析，選取的五個(gè)指標(biāo)可為因子分析提供合理的分析基礎(chǔ)。為了達(dá)到降維及信息濃縮的目的，綜合本次分析結(jié)果，決定從5個(gè)指標(biāo)中提取出2個(gè)特征值大于1的成分作為本次分析的主成分。這兩個(gè)主成分的累計(jì)貢獻(xiàn)率達(dá)67%以上，能很好地反應(yīng)5個(gè)變量指標(biāo)的情況。本次檢查的10批大黃藥材綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果由其主成分對(duì)應(yīng)的方差貢獻(xiàn)率得出，記水分檢查結(jié)果、總灰分檢查結(jié)果、浸出物檢查結(jié)果、總蒽醌含量測(cè)定結(jié)果及游離蒽醌含量測(cè)定結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化所得值分別為Z1、Z2、Z3、Z4、Z5，主成分F1、F2因子載荷矩陣值分別為A、B，特征值分別為C1、C2，計(jì)算出主成分的變換矩陣U，主成分得分表達(dá)式見(jiàn)式（1）、式（2），再由變換矩陣U分別計(jì)算得出這10批不同產(chǎn)地大黃藥材的主成分得分及綜合得分，其表達(dá)式分別見(jiàn)式（3）、式（4）、式（5），計(jì)算出的10批大黃藥材質(zhì)量的主成分得分、綜合得分及質(zhì)量排名結(jié)果見(jiàn)下表15。Un=AnU’n=BnF1=U1×Z1+U2×Z2+U3×Z3+U4×Z4+U5×Z5（3）F2=U’1×Z1+U’2×Z2+U’3×Z3+U’4×Z4+U’5×Z5（4）F=0.67632×F1+0.92226×F2（5）表1510批大黃藥材主成分得分、綜合得分、排名信息表批號(hào)主成分得分F1主成分得分F2綜合得分F綜合排名YPA7D0001-0.89292.29361.51151YPA7D00022.4344-0.78300.92434YPA7D0003-0.8530-1.4408-1.90579YPA7D0004-3.6900-1.2652-3.662510YPA7D0005-0.21480.41680.23927YPA7D00061.2069-0.36550.47925YPA7D00071.9630-0.03071.29932YPA7D00081.6209-0.07531.02683YPA7D0009-0.51830.1658-0.19778YPA7D00010-1.05611.08420.28566根據(jù)主成分綜合得分越高，質(zhì)量越好的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，并結(jié)合表15中批號(hào)為YPA7D0001的大黃藥材綜合得分F最高，可以初步推斷，在這10批大黃藥材中，批號(hào)為YPA7D0001的大黃藥材質(zhì)量最佳，側(cè)面反映出該地區(qū)所產(chǎn)大黃的質(zhì)量較優(yōu)，其余大黃藥材的主成分綜合得分與批號(hào)為YPA7D0001的大黃藥材綜合得分相差較大，質(zhì)量相對(duì)較次，其中，批號(hào)為YPA7D0003、YPA7D0004、YPA7D0009的大黃藥材質(zhì)量綜合得分為負(fù)值，由此可初步推斷出其質(zhì)量較差。3.2.2系統(tǒng)聚類分析采用IBMSPSS25軟件，對(duì)10批大黃藥材進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析，以水分、總灰分、浸出物、總蒽醌含量測(cè)定、游離蒽醌含量測(cè)定為考察指標(biāo)，將特征相似度高的大黃藥材聚為一類，最終使特征差異較大的大黃藥材進(jìn)行分離，得到垂直冰柱圖、樹(shù)狀譜系圖見(jiàn)下圖5、圖6。圖5系統(tǒng)聚類分析垂直冰柱圖圖6系統(tǒng)聚類分析樹(shù)狀譜系圖在系統(tǒng)聚類分析的垂直冰柱圖（圖5）中，于聚類數(shù)目為3處作一水平線，以白色條形為間隔，將10個(gè)樣本劃分為3類；在樹(shù)狀譜系圖（圖6）中，以距離為10處作一垂直線，將10批樣品分為了3類，與冰柱圖分類相同。其中將批號(hào)5、8、6、7、2歸為第一類，批號(hào)4為第二類，批號(hào)3、1、10、9歸為第三大類。由表15可知，批號(hào)YPA7D0004的大黃藥材主成分得分為負(fù)值，且由表9可知，該批次的大黃藥材中總蒽醌及游離蒽醌含量不符合2020年版《中國(guó)藥典》的規(guī)定，綜合以上因素，故將其單獨(dú)歸為一類。其余批次根據(jù)5個(gè)考察指標(biāo)結(jié)果的相似性，綜合分析，將批號(hào)為YPA7D0001、YPA7D0003、YPA7D0009、YPA7D00010的大黃藥材歸為一類，其余批號(hào)的大黃藥材歸為另一類。

4結(jié)論在365納米波長(zhǎng)下，可以看到大黃供試品薄層色譜中，有熒光斑點(diǎn)顯示，同時(shí)大黃酸對(duì)照品及對(duì)照藥材的色譜相應(yīng)的位置上，也出現(xiàn)了相同的現(xiàn)象，證明這10批藥材均為大黃藥材。水分測(cè)定結(jié)果為6.02%～8.71%，平均值7.00%，不超過(guò)藥典規(guī)定15.0%，水分檢查均合格。總灰分檢查結(jié)果為3.37%～8.91%，平均值為5.39%，不超過(guò)藥典規(guī)定10.0%，均符合要求。水溶性浸出物結(jié)果為33.53%～49.31%，平均值42.11%，不少于藥典規(guī)定25.0%，均符合要求。二氧化硫殘留量測(cè)定結(jié)果為0~7.35mg/kg，平均值為2.10mg/kg，不超過(guò)藥典規(guī)定150mg/kg，二氧化硫殘留量檢查均合格；總蒽醌含量測(cè)定結(jié)果為1.23%~2.13%，平均值為1.76%，藥典規(guī)定不得少于1.5%，部分批次不符合要求。游離蒽醌含量測(cè)定結(jié)果為0.32%~1.58%，平均值為0.94%，藥典規(guī)定不得少于0.20%，所有批次均符合要求。本次實(shí)驗(yàn)的10批大黃藥材可按照主成分分析、系統(tǒng)聚類分析分為3類，由表15可知，批號(hào)YPA7D0004的大黃藥材主成分得分為負(fù)值，排名最后一名，且結(jié)合表9數(shù)據(jù)，該批次的大黃藥材中總蒽醌及游離蒽醌含量不符合2020年版《中國(guó)藥典》的規(guī)定，故將批號(hào)YPA7D0004的大黃藥材單獨(dú)歸為一類。綜合5個(gè)考察指標(biāo)結(jié)果的相似性分析，因批號(hào)YPA7D0001、YPA7D0003、YPA7D0009、YPA7D00010的大黃藥材在浸出物檢查、總蒽醌及游離蒽醌含量測(cè)定結(jié)果均小于除YPA7D0004以外批次，故歸為一類，其余批號(hào)的大黃藥材歸為另一類。綜合本實(shí)驗(yàn)所有測(cè)定及檢查結(jié)果，可以初步認(rèn)為的批號(hào)為YPA7D0001的大黃藥材質(zhì)量最佳，其次為批號(hào)YPA7D0007的大黃藥材，這為進(jìn)一步分析影響大黃質(zhì)量?jī)?yōu)劣的因素提供了方向。

5討論本課題研究采用2020年版《中國(guó)藥典》方法對(duì)大黃藥材進(jìn)行薄層鑒別、水分檢查等考察。在本實(shí)驗(yàn)全過(guò)程均使用精密度較高的萬(wàn)分之一電子天平進(jìn)行樣品稱量，確保使實(shí)驗(yàn)誤差盡可能減小。同時(shí)，為了保證稱樣時(shí)準(zhǔn)確度，在使用萬(wàn)分之一電子天平稱量前需將電子天平進(jìn)行校準(zhǔn)，同時(shí)應(yīng)待電子天平讀數(shù)穩(wěn)定10s后再進(jìn)行讀數(shù)并記錄數(shù)據(jù)，確保讀數(shù)精確。在薄層鑒別實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，需確保點(diǎn)樣量的取樣合適，保證斑點(diǎn)的顯示清晰、不拖尾。關(guān)于展開(kāi)劑的制備，需注意展開(kāi)劑各個(gè)組分的密度不同，易導(dǎo)致所制備的展開(kāi)劑出現(xiàn)分層，因此已按比例混合的展開(kāi)劑需超聲充分，得到均一的展開(kāi)劑。針對(duì)大黃原藥材與對(duì)照藥材的薄層鑒別實(shí)驗(yàn)，出于對(duì)所用展開(kāi)劑極性的要求，此實(shí)驗(yàn)展開(kāi)劑需進(jìn)行充分混合，再用分液漏斗分取上層溶液進(jìn)行薄層板展開(kāi)。此外，載有樣品的薄層板需經(jīng)預(yù)飽和后再進(jìn)行展板，以確保薄層板各位置的溶劑濃度一致，展開(kāi)后所得色譜不出現(xiàn)邊緣效應(yīng)。為了保證藥材所得數(shù)據(jù)的真實(shí)性及準(zhǔn)確性，本實(shí)驗(yàn)的水分檢查項(xiàng)目在取得樣品后馬上粉碎進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以保證樣品不在后續(xù)貯藏時(shí)，出現(xiàn)吸潮現(xiàn)象，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)誤差。對(duì)于總灰分的檢查，應(yīng)保證大黃藥材在炭化時(shí)不灰化，在充分炭化后再將樣品轉(zhuǎn)移至馬弗爐里進(jìn)行熾灼，同時(shí)需注意全程在風(fēng)力穩(wěn)定較小的環(huán)境下進(jìn)行，避免灰分飛走，造成誤差。水分檢查及總灰分檢查在恒重過(guò)程中應(yīng)保證兩次稱量重量之差小于0.3mg。二氧化硫?yàn)橛卸練怏w，為保證安全，二氧化硫殘留量的測(cè)定選擇在通風(fēng)櫥進(jìn)行。進(jìn)行滴定時(shí)，應(yīng)準(zhǔn)確滴定，在指示劑變色后30s內(nèi)不褪