細(xì)胞培養(yǎng)的一般過程注意事項1

第第頁細(xì)胞培養(yǎng)的一般過程注意事項細(xì)胞培養(yǎng)：是指將活細(xì)胞（尤其是分散的細(xì)胞）在體外進(jìn)行培養(yǎng)的方法。細(xì)胞培養(yǎng)的一般過程:一、準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作對開展細(xì)胞培養(yǎng)異常緊要，工作量也較大，應(yīng)予以充分的重視，推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致試驗失敗或無法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包含器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。二、取材在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視試驗?zāi)康亩ǎ?，?jīng)過肯定的處理（如消化分散細(xì)胞、分別等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無取材這一過程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的第一次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。理論上講各種動物和人體內(nèi)的全部組織都可以用于培養(yǎng)，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個體的組織容易培養(yǎng)，分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng)，腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng)。取材后應(yīng)立刻處理，盡快培養(yǎng)，因故不能立刻培養(yǎng)時，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養(yǎng)液中保管。取組織時應(yīng)嚴(yán)格保持無菌，同時也要避開接觸其他的有害物質(zhì)。取病理組織和皮膚及消化道上皮細(xì)胞時容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。三、培養(yǎng)將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部，幾個小時后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基。如系細(xì)胞培養(yǎng)，一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，按要求以肯定的量（以每毫升細(xì)胞數(shù)表示）接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后，立刻放入培養(yǎng)箱中，使細(xì)胞盡早進(jìn)入生長狀態(tài)。正在培養(yǎng)中的細(xì)胞應(yīng)每隔肯定時間察看一次，察看的內(nèi)容包含細(xì)胞是否生長良好，形態(tài)是否正常，有無污染，培養(yǎng)基的PH是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示），另外對培養(yǎng)溫度和CO2濃度也要定時檢查。原代培養(yǎng)一般有一段潛匿期（數(shù)小時到數(shù)十天不等），在潛匿期細(xì)胞一般不分裂，但可貼壁和游走。過了潛匿期后細(xì)胞進(jìn)入旺盛的分裂生長期。細(xì)胞長滿瓶底后要進(jìn)行傳代培養(yǎng)，將一瓶中的細(xì)胞消化懸浮后分至兩到三瓶連續(xù)培養(yǎng)。每傳代一次稱為“一代”。二倍體細(xì)胞一般只能傳幾十代，而轉(zhuǎn)化細(xì)胞系或細(xì)胞株則可無限地傳代下去。轉(zhuǎn)化細(xì)胞可能具有惡性性質(zhì)，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性。四、凍存及復(fù)蘇為了保管細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度—196℃，將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養(yǎng)基，以肯定的冷卻速度凍存，最終保管于液氮中。在極低的溫度下，細(xì)胞保管的時間將近是無限的。復(fù)蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立刻放入37℃水中，使之在一分鐘內(nèi)快速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。凍存過程中保護(hù)劑的選用、細(xì)胞密度、降溫速度及復(fù)蘇時溫度、溶化速度等都對細(xì)胞活力有影響。五、常用儀器設(shè)備無菌室,超凈工作臺,三重純水蒸餾器,抽氣泵,壓力蒸氣消毒器