微生物學(xué)實驗教案及微生物學(xué)期末考試試題答案

織造工藝學(xué)試題Ａ總２頁第2頁試題B答案總NUMPAGES31頁第1頁微生物實驗教案實驗一顯微鏡油鏡的使用和細菌形態(tài)的觀察一、實驗?zāi)康囊匀旧Ｆ瑸槔?，熟練掌握顯微鏡油鏡的使用方法。二、實驗原理1顯微鏡油鏡使用的原理（1）光學(xué)部分:接目鏡、接物鏡、照明裝置(聚光鏡、虹彩光圈、反光鏡等)。它使檢視物放大,造成物象。（2）機械部分:鏡座、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺、載物臺轉(zhuǎn)移器、粗調(diào)節(jié)器、細調(diào)節(jié)器等部件。它起著支持、調(diào)節(jié)、固定等作用。2顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率（1）放大倍數(shù)=接物鏡放大倍數(shù)×接目鏡放大倍數(shù)（2）顯微鏡的分辨率：表示顯微鏡辨析物體（兩端）兩點之間距離的能力，可用公式表示為：D=λ/2n·sin(α/2)式中D：物鏡分辨出物體兩點間的最短距離。λ：可見光的波長（平均0.55μm）n:物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率。：鏡口角（即入射角）。3油鏡使用的原理油鏡，即油浸接物鏡。當(dāng)光線由反光鏡通過玻片與鏡頭之間的空氣時，由于空氣與玻片的密度不同，使光線受到曲折，發(fā)生散射，降低了視野的照明度。若中間的介質(zhì)是一層油（其折射率與玻片的相近），則幾乎不發(fā)生折射，增加了視野的進光量，從而使物象更加清晰。三、實驗材料1顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、鑷子、酒精燈、火柴、玻璃鉛筆、蒸餾水等。2枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌的玻片染色標(biāo)本。四、實驗方法與步驟（1）用前檢查：零件是否齊全，鏡頭是否清潔。（2）調(diào)節(jié)光亮度。（3）低倍鏡觀察：先粗調(diào)再微調(diào)至物象清晰。（4）轉(zhuǎn)入中倍、高倍觀察，每一不只需調(diào)微調(diào)旋紐即可看到清晰的物象。（5）油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后，旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換器，在標(biāo)本中央滴一滴香柏油，使油鏡鏡頭浸入香柏油中，細調(diào)至看清物象為止。（6）繪出所觀察到的細菌形態(tài)圖像。（7）、換片：另換新片觀察，必須從（3）步開始操作。（8）、用后復(fù)原：觀察完畢，上懸鏡筒，先用擦鏡紙擦去油鏡頭上的香柏油，然后再用擦鏡紙沾取少量二甲苯擦去殘留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的二甲苯，后將鏡體全部復(fù)原。五、實驗報告油鏡使用的原理繪制細菌形態(tài)六、思考題1油鏡與普通物鏡在使用方法上有何不同？應(yīng)特別注意些什么？2使用油鏡時，為什么必須用鏡頭油？七、實驗注意事項1不準(zhǔn)擅自拆卸顯微鏡的任何部件,以免損壞。2鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度。3觀察標(biāo)本時，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。當(dāng)目視接目鏡時，特別在使用油鏡時，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。4觀察時，兩眼睜開，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習(xí)慣，以免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時，右眼注視繪圖。5拿顯微鏡時，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡座，不可單手拿，更不可傾斜拿。6顯微鏡應(yīng)存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌而腐蝕鏡片。八、教學(xué)反饋實驗二細菌的簡單染色一、實驗?zāi)康氖炀氄莆诊@微鏡油鏡的使用方法。學(xué)習(xí)染色的基本技術(shù)，二、實驗原理簡單染色的原理大多數(shù)微生物細胞質(zhì)是帶負電荷，簡單染色時采用已知的、帶正電荷的堿性染料。染料適用于熱固定的涂片，染料與菌體細胞質(zhì)黏附使菌體著色。經(jīng)染色后的細菌細胞與背景形成鮮明對比。三、實驗材料1顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、鑷子、酒精燈、火柴、玻璃鉛筆、蒸餾水等。2、培養(yǎng)12-18h的枯草芽孢桿菌和大腸桿菌以及金黃色葡萄球菌。3、簡單染色液（美藍染色液、黑色素液或炭素墨水）四、實驗方法與步驟1、活菌制片觀察取一張干凈的載玻片，在其中央滴上一滴干凈的蒸餾水，取培養(yǎng)12-18h的枯草芽孢桿菌一小環(huán)，在水滴上反復(fù)涂抹至菌體充分分散，蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去多余的水分，按照油鏡的使用步驟，觀察草芽孢桿菌形態(tài)，邊觀察邊繪圖。2、簡單染色(1)涂片:取兩塊干凈的載玻片，各滴一小滴生理鹽水于載玻片中央，用無菌操作分別挑取金黃色葡萄球菌和大腸桿菌于二載玻片的水滴中（每一種菌制一片），調(diào)勻并涂成薄膜。注意滴生理鹽水時不宜過多，涂片必須均勻。(2)干燥：自然氣干或酒精燈高處微微加熱。(3)固定:于火焰上通過2—3次。(4)染色：在整個涂面上滴加齊氏石炭酸復(fù)紅，染色１分鐘。（5）水洗：傾去染液，用自來水細流沖洗至流下的水中無染料顏色為止。（6）干燥：空氣中自然干燥或在酒精燈高處微微加熱。（7）鏡檢：在油鏡下觀察細菌形態(tài)。五、實驗報告油鏡使用的原理繪制細菌形態(tài)六、思考題1鏡檢標(biāo)本時，為什么先用低倍鏡觀察，而不是直接用高倍鏡或油鏡觀察？2根據(jù)實驗體會，你認為制備染色標(biāo)本時，應(yīng)注意哪些事項？七、教學(xué)反饋實驗三細菌的革蘭氏染色一、實驗?zāi)康?掌握革蘭氏染色。2了解革蘭氏染色法的原理及其在細菌分類鑒定中的重要性。二、實驗原理1革蘭氏染色的原理革蘭氏陽性菌的細胞壁主要有肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成，在染色過程中，當(dāng)用95%乙醇處理時，由于脫水而引起網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的孔徑變小，細胞壁的通透性降低，使結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被保留在細胞壁內(nèi)而不易脫色，因此呈藍紫色。革蘭氏陰性菌的細胞壁中肽聚糖含量低，脂類物質(zhì)含量高，當(dāng)用乙醇處理時，脂類物質(zhì)溶解，細胞壁的通透性增加，使結(jié)晶紫-碘復(fù)合物容易被乙醇抽提出來而脫色，然后又被染上了復(fù)染劑的顏色，因此呈現(xiàn)紅色。三、實驗材料1大腸桿菌24h的斜面培養(yǎng)物。2葡萄球菌24h的斜面培養(yǎng)物。4革蘭氏染色液（結(jié)晶紫染液、盧戈氏碘液、95%乙醇、石碳酸復(fù)紅）5載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、鑷子、酒精燈、火柴、玻璃鉛筆、蒸餾水等。6顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙等。四、實驗方法和步驟附表1細菌染色法分類附表2微生物染色常用染料A酸性染料：如酸性復(fù)紅、剛果紅、伊紅、藻紅、苯胺黑等。B堿性染料：一般有堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結(jié)晶紫、美蘭、甲基紫等，細菌易被堿性染料染色。C中性（復(fù)合）染料：如伊紅、美蘭等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于細胞核染色）。D單純?nèi)旧哼@類染料物，不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如蘇丹類（Sudanb）的染料2革蘭氏染色（1）涂片。（2）初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。（3）媒染：先用新配的盧哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面1分鐘，后水洗。（4）脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進行脫色約30秒，后立即用流水沖洗。（5）復(fù)染：滴加番紅染色液，染1分鐘，水洗后用吸水紙吸干。（6）鏡檢：觀察染色結(jié)果。五、實驗報告1革蘭氏染色的基本原理和意義2革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵六、思考題1根據(jù)實驗體會，你認為制備染色標(biāo)本時，應(yīng)注意哪些事項？2制片為什么要完全干燥后才能用油鏡觀察？3做革蘭氏染色涂片為什么不能過于濃厚？其染色成敗的關(guān)鍵一步是什么？4當(dāng)你對一株未知菌進行革蘭氏染色時，怎樣能確證你的染色技術(shù)操作正確，結(jié)果可靠?七、教學(xué)反饋實驗四培養(yǎng)基的配制一、實驗?zāi)康?學(xué)習(xí)和掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟2學(xué)會實驗室滅菌鍋的使用方法二、實驗材料1牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉紅、鏈霉素、1mol/LNaOH、1mol/LHCl、KNO3、NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4.·7H2O。2試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH試紙、棉花、牛皮紙、記號筆、線繩、紗布。3滅菌鍋三、實驗方法(一)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g．NaCl5g，瓊脂15-20g，水1000mL，pH7.4-7.6。1稱藥品：按實際用量計算后，按配方稱取各種藥品放入大燒杯中。牛肉膏可放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶解后倒入大燒杯；也可放在稱量紙上稱量，隨后放人熱水中，牛肉膏便與稱量紙分離，立即取出紙片。蛋白胨極易吸潮，故稱量時要迅速。2加熱溶解：在燒杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉網(wǎng)上，小火加熱，并用玻棒攪拌，待藥品完全溶解后再補充水分至所需量。若配制固體培養(yǎng)基，則將稱好的瓊脂放入已溶解的藥品中，再加熱融化，此過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底或溢出，最后補足所失的水分。3調(diào)pH：檢測培養(yǎng)基的pH，若pH偏酸，可滴加1滴1mol/LNaOH，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙檢測，直至達到所需pH范圍。若偏堿，則用1mol/LHCl進行調(diào)節(jié)。pH的調(diào)節(jié)通常放在加瓊脂前。應(yīng)注意pH值不要調(diào)過頭，以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。4過濾：液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾，固體培養(yǎng)基可用4層紗布趁熱過濾，以利結(jié)果的觀察。5分裝：按實驗要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶內(nèi)。分裝時可用三角漏斗以免培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上面造成污染。分裝量：固體培養(yǎng)基約為試管高度的1／5，滅菌后制成斜面。分裝入三角瓶內(nèi)以不超過其容積一半為宜。半固體培養(yǎng)基以試管高度的1/4為宜，滅菌后垂直待凝。6加棉塞：試管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脫脂棉)制作的棉塞。棉塞的形狀、大小和松緊度要合適，四周緊貼管壁，不留縫隙，才能起到防止雜菌侵入和有利通汽的作用。要使棉塞總長約3／5塞人試管口或瓶口內(nèi)，以防棉塞脫落。有些微生物需要更好的通氣，則可用8層紗布制成通氣塞。有時也可用試管帽或塑料塞代替棉塞。7包扎：加塞后，將三角瓶的棉塞外包一層牛皮紙或雙層報紙，以防滅菌時冷凝水沾濕棉塞。若培養(yǎng)基分裝于試管中，則應(yīng)先把試管扎成捆后，再于棉塞外包一層牛皮紙。然后用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。8滅菌：將上述培養(yǎng)基于121.3℃9擺斜面：滅菌后，如制斜面，則需趁熱將試管口端擱在一根長木條上，并調(diào)整斜度，使斜度的長度不超過試管總長度的1/2。10無菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃四、實驗結(jié)果和報告記錄本實驗配制培養(yǎng)第的名稱、數(shù)量，并圖解說明其配制過程，指明要點。五、問題和思考1配制培養(yǎng)基有哪幾個步驟?在操作過程中應(yīng)注意些什么問題?為什么?2培養(yǎng)基配制完成后，為什么必須立即滅菌?若不能及時滅菌應(yīng)如何處理？如何進行無菌檢查，3試設(shè)計實驗對飲料進行無菌檢查。六、演示1培養(yǎng)基的分裝方法。2試管斜面的擱置方法七、注意事項稱藥品用的牛角匙不要混用，稱完藥品應(yīng)及時蓋緊瓶蓋。調(diào)PH時要小心操作，避免回調(diào)。不同培養(yǎng)基各有配制特點，要注意具體操作。八、教學(xué)反饋實驗五土壤的稀釋、分離、純化及無菌操作技術(shù)一、實驗?zāi)康暮蛢?nèi)容1學(xué)習(xí)從上壤中分離微生物的方法，學(xué)習(xí)無菌操作技術(shù)。2用稀釋法分離細菌、放線茵和霉菌。3用平板劃線法分離微生物。4學(xué)習(xí)平板接種等無菌操作技術(shù)。二、實驗材料1金黃色葡萄球菌和普通變形菌斜面菌種。2已滅菌的牛肉膏、高氏1號、土豆蔗糖固體培養(yǎng)基各1瓶。3無菌培養(yǎng)皿12套、無菌EP管10支、土壤樣品、天平、稱量紙、藥匙、試管架、記號筆、涂布器、1000ul移液器、200ul移液器、20ul移液器、1000ul槍頭、200ul槍頭、20ul槍頭。4無菌水(49.5mL、帶玻璃珠)1瓶、80％乳酸、10％酚液、95％乙醇。三、實驗方法(一)土壤稀釋分離1取土壤：取表層以下5-10ml處的土樣．放入滅菌的袋中備用，或放在4℃冰箱中暫存。2制備稀釋液(1)制備土壤懸液：稱土樣0.5g，迅速倒人帶玻璃珠的無菌水瓶中，振蕩5-10min,使土壤充分打散，即成為10-2的土壤懸液。(2)梯度稀釋：用移液器吸10-2的土壤懸液100ul，放入裝有900ul無菌水的EP管中，上下顛倒數(shù)次，即為10-3的稀釋液，如此重復(fù)，可依次制成10-3-10注意：每一個稀釋度換用一支槍頭。(二)平板劃線分離微生物1倒平板：按無菌操作要求，在火焰旁操作，取融化并冷卻至不燙手的固體培養(yǎng)基(約50℃)，倒入無菌培養(yǎng)皿中，倒量以鋪滿皿底為限，平放桌上待其充分凝固，備用。2劃線分離：使用接種環(huán)，從待純化的菌落或待分離的斜面菌種中沾取少量菌樣，在相應(yīng)培養(yǎng)基平板中劃線分離，劃線的方法多樣，目的是獲得單個菌落。3培養(yǎng)：方法同“土壤稀釋分離”(三)平板接種培養(yǎng)1混合平板培養(yǎng)法將無菌平板編上10-7、10-8、10-9號碼，每一號碼設(shè)置三個重復(fù)，用無菌吸管按無菌操作要求吸取10-9稀釋液各1ml放入編號10-9的3個平板中，同法吸取10-8稀釋液各lml放入編號10-8的3個平板中，再吸取10-7稀釋液各lml放入編號10-7的3個平板中（由低濃度向高濃度時，吸管可不必更換）。然后在9個平板中分別倒入已融化并冷卻至45—50℃2涂抹平板計數(shù)法涂抹平板計數(shù)法與混合法基本相同，所不同的是先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無菌平板中，待凝固后編號，然后用無菌吸管吸取0.1ml菌液對號接種在不同稀釋度編號的瓊脂平板上（每個編號設(shè)三個重復(fù)）。再用無菌刮鏟將菌液在平板上涂抹均勻（圖22-3），每個稀釋度用一個滅菌刮鏟，更換稀釋度時需將刮鏟灼燒滅菌。在由低濃度向高濃度涂抹時，也可以不更換刮鏟。將涂抹好的平板平放于桌上20—30min，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后將平板倒轉(zhuǎn)，保溫培養(yǎng)，至長出菌落后即可計數(shù)。四、實驗結(jié)果和報告1記錄土壤稀釋分離結(jié)果，并計算出每克土壤中的細菌、放線曲和霉菌的數(shù)量。計算方法：選擇長出菌落數(shù)30-300之間的培養(yǎng)皿進行計數(shù)，技以下公式：總個數(shù)／g＝同一稀釋度幾次重復(fù)的菌落平均數(shù)x稀釋倍數(shù)2分別記錄平板劃線、平板接種的結(jié)果，并自我評價。五、問題和思考1在測定土壤微生物含量中，除混菌法外還可用什么方法?2試設(shè)計實驗，從土壤中分離出酵母菌，并進行計數(shù)。3試設(shè)計實驗，從水或者空氣中分離微生物，并進行計數(shù)。六、注意事項1一般土壤中，細菌最多，放線菌及霉菌次之，而酵母菌主要見于果園及菜園土壤中，故從土壤中分離細菌時，要取較高的稀釋度，否則菌落連成一片不能計數(shù)。2在土壤稀釋分離操作中，每稀釋10倍，最好更換一次移液管，使計數(shù)準(zhǔn)確。3放線菌的培養(yǎng)時間較長，故制平板的培養(yǎng)基用量可適當(dāng)增多。六、教學(xué)反饋實驗六水中細菌總數(shù)和大腸菌群的檢測一、實驗?zāi)康?/p>

(1)了解和學(xué)習(xí)水中細菌總數(shù)和大腸菌群的測定原理和測定意義。

(2)學(xué)習(xí)和掌握用稀釋平板計數(shù)法測定水中細菌總數(shù)的方法。

(3)學(xué)習(xí)和掌握水中大腸菌群的檢測方法。二、實驗原理

水是微生物廣泛分布的天然環(huán)境。各種天然水中常含有一定數(shù)量的微生物。水中微生物的主要來源有：水中的水生性微生物(如光合藻類)、來自土壤徑流、降雨的外來菌群和來自下水道的污染物和人畜的排泄物等。水中的病原菌主要來源于人和動物的傳染性排泄物。

水的微生物學(xué)的檢驗，特別是腸道細菌的檢驗，在保證飲水安全和控制傳染病上有著重要意義，同時也是評價水質(zhì)狀況的重要指標(biāo)。國家飲用水標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，飲用水中大腸菌群數(shù)每升中不超過3個，細菌總數(shù)每mL不超過100個。

所謂細菌總數(shù)是指1mL或1g檢樣中所含細菌菌落的總數(shù)，所用的方法是稀釋平板計數(shù)法，由于計算的是平板上形成的菌落(colony-formingunit，cfu)數(shù)，故其單位應(yīng)是cfu/g(mL)。它反映的是檢樣中活菌的數(shù)量。

所謂大腸菌群，是指在37℃

水的大腸菌群數(shù)是指100mL水檢樣內(nèi)含有的大腸菌群實際數(shù)值，以大腸菌群最近似數(shù)(MPN)表示。在正常情況下，腸道中主要有大腸菌群、糞鏈球菌和厭氧芽胞桿菌等多種細菌。這些細菌都可隨人畜排泄物進入水源，由于大腸菌群在腸道內(nèi)數(shù)量最多，所以，水源中大腸菌群的數(shù)量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一項重要指標(biāo)。目前，國際上已公認大腸菌群的存在是糞便污染的指標(biāo)。因而對飲用水必須進行大腸菌群的檢查。

水中大腸菌群的檢驗方法，常用多管發(fā)酵法和濾膜法。多管發(fā)酵法可運用于各種水樣的檢驗，但操作繁瑣，需要時間長。濾膜法僅適用于自來水和深井水，操作簡單、快速，但不適用于雜質(zhì)較多、易于阻塞濾孔的水樣。多管發(fā)酵法包括初(步)發(fā)酵實驗、平板分離和復(fù)發(fā)酵實驗三個部分。1、初(步)發(fā)酵實驗：發(fā)酵管內(nèi)裝有乳糖蛋白胨液體培養(yǎng)基，并倒置一德漢氏小套管，乳糖能起選擇作用，因為很多細菌不能發(fā)酵乳糖，而大腸菌群能發(fā)酵乳糖而產(chǎn)酸產(chǎn)氣，為便于觀察細菌的產(chǎn)酸情況，培養(yǎng)基內(nèi)加有溴甲酚紫作為pH指示劑，細菌產(chǎn)酸后，培養(yǎng)基即由原來的紫色變?yōu)辄S色，溴甲酚紫還有抑制其他細菌如芽孢細菌生長的作用。水樣接種于發(fā)酵管內(nèi)，37℃2、平板分離：平板培養(yǎng)基一般使用復(fù)紅亞硫酸鈉瓊脂（遠藤氏培養(yǎng)基，Endo’smedium）或尹紅美藍瓊脂(eosinmethyleneblueagar,EMBagar),前者含有堿性復(fù)紅染料，在此作為指示劑，它可被培養(yǎng)基中亞硫酸鈉脫色，使培養(yǎng)基呈淡粉紅色，大腸菌群發(fā)酵乳糖后產(chǎn)生的酸和乙醛即和復(fù)紅反應(yīng)，形成深紅色復(fù)合物，使大腸菌群菌落變?yōu)閹Ы饘俟鉂傻纳罴t色。亞硫酸鈉還可抑制其他雜菌的生長，尹紅美藍瓊脂平板含有與美藍染料，在此亦作為指示劑，大腸菌群發(fā)酵乳糖造成酸性環(huán)境時，該兩種染料即結(jié)合成復(fù)合物，使大腸菌群產(chǎn)生與遠藤氏培養(yǎng)基上相似的、帶核心的、有金屬光澤的深紫色(龍膽紫的紫色)菌落。初發(fā)酵管24小時內(nèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣和48小時產(chǎn)酸產(chǎn)氣的均需在以上平板上劃線分離菌落。3、復(fù)發(fā)酵實驗：以上大腸菌群陽性菌落，經(jīng)涂片染色為革蘭氏染色陰性無芽孢桿菌者，通過此實驗再進一步證實。原理與初發(fā)酵實驗相同，經(jīng)24小時培養(yǎng)產(chǎn)酸又產(chǎn)氣的，最后確定為大腸菌群陽性結(jié)果。三、實驗器材1菌落總數(shù)的測定：1)培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，無菌生理鹽水。2)器材：滅菌三角瓶，滅菌的具塞三角瓶，滅菌平皿，滅菌吸管，滅菌試管等。2大腸菌群的測定；（1）、培養(yǎng)基：乳糖蛋白胨發(fā)酵管(內(nèi)有倒置小套管)，三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管(瓶)(內(nèi)有倒置小套管)，尹紅美藍瓊脂平板；2）、材料：無菌水、載玻片、滅菌帶玻璃塞空瓶、無菌吸管、無菌試管等。四、實驗方法

(1)水樣的采集：

1)自來水：先將自來水龍頭用酒精燈火焰灼燒滅菌，再開放水龍頭使水流5min，以滅菌三角瓶接取水樣以備分析。

2)池水、河水、湖水等地面水源水：在距岸邊5m處，取距水面10-15cm的深層水樣，先將滅菌的具塞三角瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻轉(zhuǎn)過來，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛滿后，將瓶塞蓋好，再從水中取出。如果不能在2h內(nèi)檢測的，需放入冰箱中保存。

(2)細菌總數(shù)的測定：

1)水樣稀釋及培養(yǎng)：

①按無菌操作法，將水樣作10倍系列稀釋：

⑦根據(jù)對水樣污染情況的估計，選擇2-3個適宜稀釋度(飲用水如自來水、深井水等，一般選擇1、1:10兩種濃度；水源水如河水等，比較清潔的可選擇1:10、1:100、1:1000三種稀釋度；污染水—被選擇1:100、1:1000、1:10000三種稀釋度)，吸取1mL稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個稀釋度作3個重復(fù)。

③將熔化后保溫度45℃

④待瓊脂凝固后，將平皿倒置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±

2)計算方法：

作平板計數(shù)時，可用肉眼觀察，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落數(shù)。

3)計數(shù)的報告：

①平板菌落數(shù)的選擇：

選取菌落數(shù)在30-300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標(biāo)準(zhǔn)。一個稀釋度使用兩個重復(fù)時，應(yīng)選取兩個平板的平均數(shù)。如果一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板計數(shù)作為該稀釋度的菌數(shù)。若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，可計算半個平板后乘2以代表整個平板的菌落數(shù)。

②稀釋度的選擇：a.應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30-300之間的稀釋度，乘以該稀釋倍數(shù)報告之(表1例1)。

b．若有兩個稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30-300之間，則視二者之比如何來決定。若其比值小于2，應(yīng)報告其平均數(shù)；若比值大于2，則報告其中較小的數(shù)字(l例2、例3)。c．若所有稀釋度的平均菌落均大于300，則應(yīng)按稀釋倍數(shù)最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之(l例4)。d．若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30、則應(yīng)按稀釋倍數(shù)最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之(1例5)。e.若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之（表1例6)。

f.若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30-300之間，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以該稀釋倍數(shù)報告之(表l例7)。

③細菌總數(shù)的報告：

細菌的菌落數(shù)在l00以內(nèi)時，按其實有數(shù)報告；大于100時，用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)字，以四舍五入方法修約。為了縮短數(shù)字后面的0的個數(shù)，可用10的指數(shù)來表示，如表1“報告方式”一欄所示。(3)大腸菌群的測定(多管發(fā)酵法)：(一)自來水檢查：1、初(步)發(fā)酵實驗在2個含有50ml三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵瓶中，各加入100ml水樣；在10支含有5ml三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管中，各加入10ml水樣(見圖)。搖勻后，37℃2、平板分離經(jīng)24小時培養(yǎng)后，產(chǎn)酸產(chǎn)氣及48小時產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管(瓶)，分別劃線接種于尹紅美藍瓊脂平板上，再于37℃⑴深紫黑色、有金屬光澤。⑵紫黑色、不帶或略帶金屬光澤；⑶淡紫紅色、中心顏色較深。3、復(fù)發(fā)酵實驗經(jīng)涂片、染色、鏡檢，如為革蘭氏染色陰性無芽孢桿菌，則挑取該菌落的另一部分，重新接種于普通濃度的乳糖蛋白胨發(fā)酵管中，每管可接種來自同一初發(fā)酵管的同類型菌落1-3個，37℃證實有大腸菌群存在后，再根據(jù)初發(fā)酵的陽性管(瓶)數(shù)查表，即得大腸菌群數(shù)(見表一)。表一接種水樣總量300ml(100ml2份、10ml10份)100ml水量陽性管數(shù)10ml水量陽性管數(shù)012每升水樣中大腸菌群數(shù)每升水樣中大腸菌群數(shù)每升水樣中大腸菌群數(shù)0<3411138182713273111838414245251830706223692727431208315116193660230104069>230（二）、池水、河水或湖水等的檢查：1、將水樣稀釋成10-1與10-2。2、分別吸取1ml10-2、10-1的稀釋水樣和1ml原水樣，各注入裝有10ml普通濃度的乳糖蛋白胨發(fā)酵管中。另取10ml和100ml原水樣，分別注入裝有5ml和50ml三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管(瓶)中。3、以下步驟同自來水的平板分離和復(fù)發(fā)酵實驗。4、將100、10、1、0.1(10-1)ml水樣的發(fā)酵管結(jié)果查表見表二：將10、1、0.1(10-1)、0.01(10-2)ml水樣的發(fā)酵管結(jié)果查表見表三：即得每升水樣中大腸菌群數(shù)表二接種水樣總量111.1ml(100、10、1、0.1ml各1份)接種水樣量(ml)每升水樣中大腸菌群數(shù)1001010.1<9+9--+-9-+--9.5--++18-+-+19-++-22+23-+++28+--+92+-+-94+-++180++--230++-+960+++-2380++++>2380表三接種水樣總量11.11ml(10、10、0.1、0.01ml各1份)接種水樣量(ml)每升水樣中大腸菌群數(shù)1010.10.0190+90--+-90-+--95--++180-+-+190-++-220+230-+++280+--+920+-+-940+-++1800++--2300++-+9600+++-23800++++23800“+”發(fā)酵陽性、“-”發(fā)酵陰性表1稀釋度的選擇及細菌數(shù)報告方式

稀釋度及菌落數(shù)兩稀釋度之比菌落總數(shù)/（cfu/g或cfu/mL）報告方式（菌落總數(shù)）/（cfu/mL或cfu/g）10-110-210-31多不可計16420-1640016000或1.6×1042多不可計295461.63775038000或3.8×1043多不可計271602.22710027000或2.7×1044多不可計多不可計313-313000310000或3.1×105527115-270270或6000-＜10＜107多不可計30512-3050031000或3.1×1041)生活飲用水或食品生產(chǎn)用水的檢驗：

五、實驗報告：1、結(jié)果：(1)自來水100ml水樣的陽性管數(shù)是多少？10ml水樣的陽性管數(shù)是多少？查表一得每升水樣中大腸菌群是多少？(2)池水、河水或湖水陽性結(jié)果記“+”；陰性結(jié)果記“-”。查表二得每升水樣中大腸菌群是多少？查表三得每升水樣中大腸菌群是多少？2、思考題：p188(1-3)六、教學(xué)反饋1.細菌特殊構(gòu)造包括、、、等。（本題2分）2.溶源性細胞在正常情況下有大約10-5細胞會發(fā)生現(xiàn)象，這是由于少數(shù)溶源細胞中的變成了的緣故。（本題1.5分）3.營養(yǎng)物質(zhì)可以通過、、和四種方式進入細胞。（本題2分）4.控制有害微生物措施中殺滅的方法有和，常用和方法，抑制的方法有和。（本題3分）5.證明遺傳物質(zhì)的基礎(chǔ)是核酸的三個著名的實驗為、、。（本題1.5分）6.微生物基因重組的方式包括、_____、_____和。（本題2分）1.純培養(yǎng)是其中（）的培養(yǎng)物。A.只有一種微生物B.只有細菌生長所需的一種營養(yǎng)物C.除主要微生物外只有一種微生物D.沒有代謝廢物2.實驗室常用的培養(yǎng)細菌的培養(yǎng)基是（）。A.馬鈴薯培養(yǎng)基B.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基C.高氏一號培養(yǎng)基D.麥芽汁培養(yǎng)基3.己糖單磷酸支路和ED途徑是進行（）替換的一個機制。A.微生物中DNA合成B.光合生物中的光合作用C.某些種類微生物中的能量代謝D.化學(xué)滲透作用4.微生物代謝中，硝酸鹽和硫酸鹽可作為電子受體是在（）。A.無酶時B.無ATP時C.有細胞色素時D.無氧時5.由于控制微生物的目的，滅菌一詞指的是（）。A.除去病原微生物B.降低微生物的數(shù)量C.消滅所有的生物D.只消滅體表的微生物6.紫外線輻射主要作用于微生物的（）。A.核酸B.酶類C.糖類D.細胞壁7.青霉素族的抗生素主要用于抗（）。A.病毒B.真菌C.革蘭氏陰性菌D.革蘭氏陽性菌8.所有下述特征皆適合質(zhì)粒，除了（）之外。A.它們是自我復(fù)制的DNA環(huán)B.它們有10～50個基因C.它們是細菌存活所必需的成分D.它們是接合所必需的成分9.接合時F因子進入受體細胞，受體細胞（）。A.經(jīng)歷裂解B.快速繁殖C.變成供體細胞D.發(fā)育出線粒體10.研究不同微生物群落及其環(huán)境之間的關(guān)系的是（）。A.微生物進化B.微生物生態(tài)學(xué)C.微生物生理學(xué)D.微生物生物化學(xué)四、判斷題（每小題1分，共10小題10分）1.巴斯德的曲頸瓶試驗否定了有關(guān)微生物的"自生說"。（）2.金黃色葡萄球菌細胞壁含有肽聚糖。（）3.八孢裂殖酵母是酵母營養(yǎng)體只能以單倍體形式存在這類生活史的代表。（）4.鏈霉菌和毛霉都呈絲狀生長，但是它們不都屬于霉菌。（）5.微生物可合成自身所需的生長因子，不必從外界攝取。（）6.營養(yǎng)物跨膜的被動運送必需依賴載體和能量。（）7.各種抗性突變是通過適應(yīng)而發(fā)生的，即由其所處的環(huán)境誘發(fā)出來的。（）8.與細菌所有性狀相關(guān)的遺傳信息都存在細菌染色體上。（）9.普遍轉(zhuǎn)導(dǎo)現(xiàn)象是由部分缺陷的溫和噬菌體為媒介實現(xiàn)的。（）10.核酸分子雜交法是一種現(xiàn)代鑒定微生物的方法。（）1.試用滲透調(diào)節(jié)皮層膨脹學(xué)說解釋芽孢耐熱機制。（本題6分）2.什么是微生物典型生長曲線，可以分成幾個階段？（本題8分）3.根據(jù)F質(zhì)粒的有無，可以把大腸桿菌分為幾種類型菌株，請對它們進行簡要說明。（本題8分）4.試從三方面比較細菌、放線菌、酵母菌和霉菌的菌落特征。（本題6分）一、名詞解釋（每小題4分，共5小題20分）1．微生物：是一類個體微小、結(jié)構(gòu)簡單的低等生物。包括原核微生物、真核微生物以及屬于非細胞類的病毒和亞病毒。2．病毒：病毒粒子指成熟的、結(jié)構(gòu)完整和有感染性的單個病毒,基本成分為核酸和蛋白質(zhì)。3．營養(yǎng)：指生物體從外部環(huán)境中攝取對其生命活動必需的能量和物質(zhì)，以滿足正常生長和繁殖需要的一種最基本的生理功能。４．無氧呼吸:底物按常規(guī)方式脫氫后，經(jīng)部分呼吸鏈遞氫，最終由無機化合物或有機化合物接受氫的過程稱無氧呼吸。5．同步生長：這種通過同步培養(yǎng)而使細胞群體處于分裂步調(diào)一致的狀態(tài)，就稱同步生長。二、填空題（每空0.5分，共6小題12分）1.芽孢，鞭毛，菌毛，糖被2.裂解，溫和噬菌體，烈性噬菌體3.被動擴散，協(xié)助擴散，主動運輸，基團移位4.滅菌，消毒，濕熱滅菌，干熱滅菌，防腐，化療5.轉(zhuǎn)化實驗，噬菌體感染實驗，植物病毒重建實驗6.轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)導(dǎo)，接合，原生質(zhì)體融合三、選擇題（每小題1分，共10小題10分）1.A2.B3.C4.D5.C6.A7.D8.C9.C10.B四、判斷題（每小題1分，共10小題10分）1.√2.√3.√4.√5.×6.×7.×8.×9.×10.√六、論述題（共1小題20分）以T4噬菌體為例，試述烈性噬菌體生活史。答：①吸附：T4噬菌體以尾絲牢固吸附在宿主細胞上后，靠刺突“釘”在細胞表面上。(2分)②侵入：T4噬菌體尾部所含酶類物質(zhì)可使細胞壁產(chǎn)生一些小孔，然后尾鞘收縮，尾髓刺入細胞壁，并將核酸注入細胞內(nèi)，蛋白質(zhì)外殼留在細胞外。(4分)③復(fù)制：包括核酸的復(fù)制和蛋白質(zhì)合成。T4噬菌體核酸進入宿主細胞后，會控制宿主細胞的合成系統(tǒng)，然后以T4噬菌體核酸中的指令合成噬菌體所需的核酸和蛋白質(zhì)。(6分)④裝配：DNA分子的縮合-衣殼包裹DNA而形成頭部-尾絲及尾部的其它部件獨立裝配完成，頭部與尾部相結(jié)合-最后裝上尾絲，至此，一個個成熟的形狀、大小相同的噬菌體裝配完成。(6分)⑤釋放：多以裂解細胞的方式釋放。(2分)簡述尿素的氨化作用.很多細菌都含有尿酶,能水解尿素，產(chǎn)生氨，其中有些種類的作用特別強，稱為尿素細菌。尿素和尿酸的氨化作用:進到土壤中的尿素一般很快地被尿素細菌和土壤中的尿酶分解成為碳酸銨。147.

生化需氧量用（

A

）來表示

A.

BOD

B.

COD

C.

TOD

D.

TOC

148.

自然界氮素循環(huán)過程中，進行硝化作用和反硝化作用的微生物分別是（

C

）。

A.

異養(yǎng)微生物和自養(yǎng)微生物

B.

都是自養(yǎng)微生物

C.

自養(yǎng)微生物和異養(yǎng)微生物

D.

都是異養(yǎng)微生物

149.

沼氣發(fā)酵中產(chǎn)甲烷細菌是（

A

）

。

A.

專性厭氧菌

B.

兼性厭氧菌

C.

好氧菌

D.

微好氧菌

150.

植物根系對根際微生物最大的影響是通過（

B

）。

A.

植物遮蔭

B.

根系分泌各種有機物

C.

根系富集水分

D.

根系伸長過程式中造成土壤通氣

151.

沼氣發(fā)酵的主要產(chǎn)物為（

B

）。

A.

CO2

B.

CH4

C.

NH3

D.

H2S

152.

下列屬于微生物學(xué)研究范圍的是（

B

）。

A.土壤質(zhì)地

B.微生物在海洋中的分布

C.湖泊水文

D.地球化學(xué)

153.

空氣并不是微生物良好的棲息繁殖場所，因為（

A

）。

A.缺乏營養(yǎng)

B.高pH

C.夏季高溫

D.無固定場所。

154.

生長于下列海水水域中的微生物應(yīng)認為是極端環(huán)境微生物的是（

C

）。

A.近海海水微生物。

B.遠洋淺層海水微生物。

C.遠洋深處海水微生物。

D.表面海水微生物。

155.

地衣中的藻類（或藍細菌）為真菌提供碳源，能源和O2，而真菌則為藻類提供礦質(zhì)營養(yǎng)，CO2和水分，它們之間構(gòu)成了（

B

）。

A.互利共棲關(guān)系

B.共生關(guān)系

C.偏利共棲關(guān)系

D.競爭關(guān)系

156.

海水中的微生物具有的特點是（

D

）。

A.嗜酸

B.嗜堿

C.嗜熱

D.嗜鹽

157.纖維分解菌與自生固氮菌之間由于前者為后者提供碳源，后者為前者提供氮源而構(gòu)成了（

B

）。

A.偏利共棲關(guān)系

B.互生關(guān)系

C.共生關(guān)系

D.寄生關(guān)系

158.

甲種微生物較乙種微生物更喜高溫生長，一旦環(huán)境溫度有所提高，就會出現(xiàn)（

A

）。

A.甲種微生物漸占優(yōu)勢。

B.乙種微生物漸占優(yōu)勢。

C.甲、乙兩種微生物都受到抑制。

D.甲、乙兩種微生物的比例維持均勢原狀。

159.

土壤淹水后有利于下列微生物的生長的是（

C

）。

A.兼性厭氧細菌。

B.專性厭氧細菌。

C.好氧性細菌。

D.放線菌和霉菌。

160.

原生動物捕食細菌、酵母、放線菌和真菌孢子等可以（

A

）。

A.促進微生物各類群之間的平衡。

B.原生動物的無節(jié)制繁殖。

C.殺死除原生動物外的其他所有微生物。

D.促進其他微生物的生長繁殖。

161.下列敘述中正確的說法是（

A

）。

A.

好氧的微生物需要較高的氧化還原電位。

B.

任何生物親代與子代、子代與子代之間，無論在形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生理等方面總會有差異，這些差異稱為變異性。

C.

放線菌的細胞構(gòu)造和細胞壁化學(xué)組成與細菌相似，經(jīng)革蘭氏染色也可分成G+

菌和

G-

菌。

D.

產(chǎn)生抗逆性強的芽孢是產(chǎn)芽孢細菌在不良環(huán)境條件下的一種生殖方式。

162.

適合所有微生物的特殊特征是（

C

）。

A.它們是多細胞的

B.細胞有明顯的核

C.只有用顯微鏡才能觀察到

D.可進行光合作用

163.

下列敘述中正確的說法是（

B

）。

A.

產(chǎn)生抗逆性強的芽孢是產(chǎn)芽孢細菌在不良環(huán)境條件下的一種生殖方式。

B.

厭氧的微生物需要較低的氧化還原電位。

C.

一種細菌的學(xué)名是Staphylococcus

aureus，其中aureus屬名，Staphyloccus是種名。

D.

類病毒是有侵染性的蛋白顆粒。

三、填空題

1.

生物分類學(xué)家將種

做為分類的基本單位，將相近似的分類基本單位歸為一類，稱之為屬，更高一級的分類單位依次推為科、目、綱、門、界。

2.

根據(jù)Whittaker的五界學(xué)說，將生物分為動物界，植物界，原生生物界，真菌界以及原核生物界。根據(jù)―三域‖分類系統(tǒng)，把生物分為真核生物域、細菌域和古生菌域。

3.

細菌個體的基本形態(tài)有球狀、桿狀和螺旋狀三大類型。

4.

細菌的一般構(gòu)造有細胞壁、細胞膜、細胞質(zhì)和原核等，特殊構(gòu)造主要有鞭毛、性菌毛、莢膜和芽孢等。

5.

G+細菌的細胞壁中的磷壁酸有壁磷壁酸和脂磷壁酸兩種。

6.

革蘭氏陰性細菌細胞壁外膜的化學(xué)成分是脂多糖、磷脂和若干種外膜蛋白。

7.

脂多糖是革蘭氏__陰性____細菌細胞壁的主要成分，它由__類脂A__，_核心多糖____和_O-特異側(cè)鏈__三部分構(gòu)成。

8.

用溶菌酶處理G+細菌獲得的去壁完全的球狀體，稱為__原生質(zhì)體_______。

9.

在細菌的細胞膜上―嵌埋著‖許多表面呈疏水性具運輸功能的蛋白是整合蛋白，―漂浮著‖許多表面含親水基團具酶促作用的蛋白是周邊蛋白。

10.

趨磁菌中含有的磁小體具有導(dǎo)向功能。

11.自養(yǎng)細菌固定二氧化碳的場所是羧酶體。

12.

某些細菌在一定條件下向胞外分泌的包被于細胞壁外表厚度不定的膠粘狀物質(zhì)是糖被。

13.

芽孢耐熱機制的關(guān)鍵是核心部位含水量的稀少(10%~25%)。

14.

對原核微生物分類最全面的書籍是《伯杰氏細菌鑒定手冊》。

15.

放線菌是一類有分枝狀的菌絲體

和以孢子進行繁殖的絲狀細菌，其對國民經(jīng)濟的重要性，在于它們是__抗生素___的主要產(chǎn)生菌。

16.

地球上最早出現(xiàn)的綠色自養(yǎng)原核生物是藍細菌。

17.

大氣中最早的產(chǎn)氧生物是藍細菌。

18.

藍細菌沒有鞭毛，但能進行__滑行________運動。

19.

生物界中能獨立生活的最小型生物是支原體。

20.

能引起落基山斑點熱的原核微生物是立克次氏體；能引起沙眼的原核微生物是衣原體。

21.

古生菌細胞壁不含肽聚糖，細胞膜脂成分是L-型甘油，核糖體大小為70S。

22.

真核微生物不是一個單系類群，而是包含了屬于不同生物界的幾個類群——真菌、藻類及原生動物等。

23.

構(gòu)成絲狀真菌營養(yǎng)體的基本單位是菌絲，根據(jù)菌絲有無橫隔結(jié)構(gòu)分為無隔菌絲和有隔菌絲。生長在基質(zhì)表面和插入基質(zhì)內(nèi)部、負責(zé)消化和吸收營養(yǎng)的菌絲體是營養(yǎng)菌絲。

24.

真菌無性繁殖孢子的種類主要有節(jié)孢子，厚垣孢子，游動孢子，孢囊孢子和分生孢子等五種。真菌的有性孢子種類有休眠孢子囊，卵孢子，接合孢子和子囊孢子和擔(dān)孢子等。

25.

酵母菌的無性繁殖方式主要有_

芽殖

_和_

裂殖

。

26.

完整的病毒顆粒主要由核酸和蛋白質(zhì)組成，核酸被衣殼包被，有的病毒在衣殼外面有包膜，包膜表面存在由刺突。

27.

病毒顆粒的形態(tài)有螺旋對稱結(jié)構(gòu)、二十面體對稱結(jié)構(gòu)和復(fù)合對稱結(jié)構(gòu)3種類型。

28.

國際公認的病毒分類與命名的權(quán)威機構(gòu)是國際病毒分類委員會(ICTV)。

29.

烈性噬菌體入侵寄主的過程可分為吸附、侵入、生物合成、成熟、釋放等五個階段。

30.

烈性噬菌體的一步生長曲線分為潛伏期、裂解期和平穩(wěn)期3個時期。由一步生長曲線可以獲得病毒繁殖的兩個特征性數(shù)據(jù)是潛伏期和裂解量。

31.

噬菌體與細胞共存的特性稱為溶原性，被浸染的細胞稱為溶原性細胞，溶原性細胞具有溶原性轉(zhuǎn)變

、免疫作用

、溶原性是可逆的3大特點。

32.

凡必需利用有機碳源的微生物為異養(yǎng)微生物；凡能利用無機碳源的微生物為自養(yǎng)微生物。

33.

微生物的能量來源，主要有光能和化學(xué)能。根據(jù)微生物生長所需要的碳源和能源的不同，可把微生物分為__光能自養(yǎng)型______，__光能異養(yǎng)型_____，_化能自養(yǎng)型___，__化能異養(yǎng)型_____

四種營養(yǎng)類型。

34.

培養(yǎng)放線菌常用的培養(yǎng)基是高氏I號培養(yǎng)基；培養(yǎng)真菌常用的合成培養(yǎng)基是察氏培養(yǎng)基；培養(yǎng)酵母菌常用的培養(yǎng)基是麥芽汁培養(yǎng)基。

35.

在配制培養(yǎng)基時，常用的凝固劑為瓊脂或明膠。

36.

鑒別產(chǎn)蛋白酶菌株時，常采用的鑒別培養(yǎng)基是酪素培養(yǎng)基或明膠培養(yǎng)基；鑒別腸道細菌時，常采用的鑒別培養(yǎng)基是糖發(fā)酵培養(yǎng)基。

37.

在實驗室中，常用固體平板劃線法，稀釋涂布平板法或稀釋傾注平板法分離、純化微生物。

38.

常用的純培養(yǎng)的保藏方法有斜面冷藏法、沙土管保藏法、低溫冷凍保藏法、冷凍干燥保藏法。

39.

微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收方式主要分為被動運輸和主動運輸兩大類。

40.

在營養(yǎng)物質(zhì)運輸中需要載體參加的運輸方式是促進擴散，主動運送和基團轉(zhuǎn)位。

41.

在營養(yǎng)物質(zhì)運輸中既消耗能量又需要載體的運輸方式是主動運送

和基團移位

。

42.

在營養(yǎng)物質(zhì)的四種運輸方式中，只有基團移位運輸方式改變了被運輸物質(zhì)的化學(xué)組成。

43.

在營養(yǎng)物質(zhì)運輸中順濃度梯度方向運輸營養(yǎng)物質(zhì)進入微生物細胞的運輸方式是單純擴散和促進擴散。

44.

根據(jù)微生物的生長溫度范圍，可將微生物分為嗜冷微生物、耐冷微生物、嗜溫微生物、嗜熱微生物和超嗜熱微生物5種。

45.

多數(shù)細菌生長最適pH是7-8；放線菌生長最適pH一般是7.5-8.5；酵母菌生長的最適pH一般是3.8-6.0。

46.

根據(jù)微生物對氧的需求，可將其分為專性好氧微生物、兼性厭氧微生物、耐氧厭氧微生物、專性厭氧微生物和微好氧微生物。

47.

測定樣品中總的微生物細胞數(shù)常采用的方法是直接顯微鏡計數(shù)法，該法也稱為血球計數(shù)板法。

48.

測定樣品中微生物的活細胞數(shù)常采用的方法是平板計數(shù)法和膜過濾法。

49.

細菌純培養(yǎng)的生長曲線可分為遲緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和死亡期4個主要時期。

50.

如果培養(yǎng)細菌的目的在于獲得大量菌體，應(yīng)在培養(yǎng)的穩(wěn)定期進行收獲。

51.

連續(xù)培養(yǎng)的方法主要有恒化器和恒濁器兩種。

52.

培養(yǎng)基常采用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法；玻璃器皿常采用的滅菌方法是烘箱烘烤法；傳染病人廢棄的衣服常采用的滅菌方法是火焰焚燒法；室內(nèi)空氣常采用的殺菌方法是輻射殺菌。

53.

紅藥水的殺菌成分是2%的汞溴紅水溶液；紫藥水的殺菌成分是2%~4%的結(jié)晶紫水溶液。

54.

第一個成功用作化學(xué)治療劑的代謝拮抗劑是磺胺。

55.

微生物的抗性是由染色體或質(zhì)粒DNA所編碼的。

56.

合成代謝是耗能代謝，分解代謝是產(chǎn)能代謝。

57.

微生物的產(chǎn)能代謝可分為化能異養(yǎng)作用、化能自養(yǎng)作用和光合作用?；墚愷B(yǎng)作用又可分為有氧呼吸、無氧呼吸和發(fā)酵作用3種類型。

58.

根據(jù)外源電子受體的性質(zhì)不同，可以將呼吸分為有氧呼吸和無氧呼吸兩種類型，前者以自由氧為電子受體，后者以含氧化合物作為電子受體。

59.

中心產(chǎn)能代謝由糖酵解途徑、磷酸戊糖途徑、三羧酸循環(huán)和呼吸電子傳遞鏈途徑組成。

60.

一分子葡萄糖經(jīng)EMP途徑徹底氧化可產(chǎn)生2分子ATP。

61.

EMP途徑，HMP途徑，ED途徑三者相比，產(chǎn)能最多的途徑是EMP途徑。

62.

乙醇發(fā)酵根據(jù)代謝途徑的不同分為酵母型乙醇發(fā)酵和細菌型乙醇發(fā)酵。酵母型乙醇發(fā)酵過程中，酵母菌利用EMP_途徑將葡萄糖分解成丙酮酸，然后脫羧生成乙醛，乙醛再還原為乙醇。

63.

乳酸發(fā)酵根據(jù)產(chǎn)物的不同，可分為同型乳酸發(fā)酵和異型乳酸發(fā)酵。

64.

在微生物生理生化鑒定過程中，常采用VP反應(yīng)和甲基紅反應(yīng)來鑒別大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌。常采用葡萄糖發(fā)酵實驗來鑒別大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌和志賀氏菌。

65.

硝化作用指的是將土壤中的氨氧化成硝酸鹽的過程。反硝化作用

66.

自養(yǎng)微生物對CO2的固定作用通過反向三羧酸循環(huán)、乙酰-CoA途徑、羥基丙酸循環(huán)和卡爾文循環(huán)來實現(xiàn)。

67.

卡爾文循環(huán)中兩個特征性酶是磷酸核酮糖激酶和核酮糖二磷酸羧化酶。

68.

固氮酶是由鐵蛋白和鉬鐵蛋白兩種蛋白成分組成的復(fù)合體。

69.

DNA由腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶和胸腺嘧啶聚合而成；RNA由腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶聚合而成。

70.

目前來說，研究得最多的染色體以外的遺傳因子是質(zhì)粒。

71.

導(dǎo)致遺傳變異的兩個主要過程是基因突變和基因重組。

72.

基因突變具有不對應(yīng)性、稀有性、獨立性、隨機性、穩(wěn)定性、可逆性等特點。Lederberg的影印培養(yǎng)實驗證明了基因突變的自發(fā)性和不對應(yīng)性。

73.

DNA分子中一種嘧啶被另一種嘌呤取代稱為轉(zhuǎn)換。

74.

基因重組分為同源重組、位點特異性重組和轉(zhuǎn)座作用3種類型；基因在原核生物細胞之間進行轉(zhuǎn)移的主要方式有接合、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)等幾種形式。

75.

在基因工程中，常用的克隆宿主為大腸桿菌；理想的基因克隆和表達載體是質(zhì)粒載體。

76.

微生物間的相互關(guān)系有互生關(guān)系、共生關(guān)系、寄生關(guān)系、拮抗關(guān)系和捕食關(guān)系等。

77.

空氣不是微生物生長和繁殖的良好場所，因為缺乏微生物生長和繁殖所需的營養(yǎng)物質(zhì)和生活條件。

78．病原微生物感染包括_特異性吸附_、_浸入__、_定居__和_繁殖_等步驟。

79.

病原微生物致病力大小通常以毒力_表示。

80．病原菌或病原體的侵襲力由_吸附與浸入能力

__、_繁殖與擴散能力____和_對宿主防御機能的抵抗能力__三方面組成。

81.

根據(jù)菌體所產(chǎn)毒素是否可以泌出，可分為外毒素和內(nèi)毒素兩種主要類型。

82.

病原微生物的致病性除了與其本身的毒力有關(guān)外，還受浸入數(shù)量、

浸染途徑、以及機體的免疫力和環(huán)境等因素的影響。

83.

感染的最終結(jié)局大體分為顯性感染、隱性感染、潛伏感染和帶菌狀態(tài)4種不同類型

84．人體及高等動物對入侵病原微生物的第一道防線是__生理屏障作用__。人體及高等動物對入侵病原微生物的第二道防線是__非特異性細胞免疫，包括吞噬作用和炎癥反應(yīng)__。

85．吞噬細胞的吞噬過程包括__識別_、__吞食__、__裂解__和__排出__四個階段。

86．炎癥反應(yīng)主要癥狀表現(xiàn)為受傷部位_發(fā)熱_、_發(fā)紅_、_腫脹_和_疼__等。

87.

補體是一組存在于正常人體或動物血液、淋巴和體液中的蛋白質(zhì)。

特異性免疫細胞包括T細胞和B細胞。

88.

抗原具有免疫原性和反應(yīng)原性或特異性反應(yīng)性兩個顯著特性。

89.

同時具有免疫原性和反應(yīng)原性的抗體稱為完全抗原；只具有反應(yīng)原性而無免疫原性的抗原稱為半抗原。

90．抗體是_B淋巴細胞__產(chǎn)生的免疫球蛋白，通過中和作用、調(diào)理作用和補體激活作用等發(fā)揮免疫作用6、什么叫細菌純培養(yǎng)的生長曲線？生長曲線可分為哪幾個時期，各時期有什么特點？它在生產(chǎn)實踐中有何指導(dǎo)意義？

定量描述液體培養(yǎng)基中，微生物群體生長規(guī)律的實驗曲線，稱為生長曲線。

分為延滯期、指數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。

延滯期特點：第一，生長速率常數(shù)為0

；第二，細胞形態(tài)變大或增長；第三，細胞內(nèi)的RNA

尤其是rRNA

含量增高，原生質(zhì)呈嗜堿性；第四，合成代謝旺盛；第五，對外界不良條件如NaC1

溶液濃度、溫度和抗生素等理、化因素反應(yīng)敏感。

指數(shù)期特點：第一，生長速率常數(shù)最大；第二，細胞進行平衡成長；第三，酶系活躍，代謝旺盛。

是用作代謝、生理等研究的良好材料，是增殖噬菌體的最適宿主，也是發(fā)酵工業(yè)中用作種子的最佳材料。

穩(wěn)定期特點：生長速率常數(shù)等于0，這時菌體產(chǎn)量達到最高點，而且菌體產(chǎn)量與營養(yǎng)物的消耗間呈現(xiàn)出有規(guī)律的比例關(guān)系。

衰亡期特點：整個群體呈現(xiàn)負生長狀態(tài)。細胞形態(tài)多形化，產(chǎn)生自溶等現(xiàn)象，細胞大量死亡。

意義：可以根據(jù)微生物的生長規(guī)律來選擇或創(chuàng)出符合生產(chǎn)條件的方法。1.病毒的一步生長曲線分為、和三個時期。（本題1.5分）2.微生物生物氧化底物脫氫通過、、、四個途徑實現(xiàn)。其中微生物特有的途徑。（本題2.5分）3.殺滅或抑制微生物的方式有、、和。（本題2分）4.在革蘭氏染色過程中，當(dāng)用初染時，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌都被染成色，用乙醇脫色后，大腸桿菌呈色，金黃色葡萄球菌呈色，用復(fù)染劑復(fù)染時，大腸桿菌呈色，金黃色葡萄球菌呈色。（本題3.5分）5.微生物與生物環(huán)境之間有、、、和五種關(guān)系。（本題2.5分）三、選擇題（每小題1分，共10小題10分）1.發(fā)明了外科消毒術(shù)的科學(xué)家是（

）。A.科赫B.李斯特C.弗萊明D.巴斯德2.屬于細菌細胞基本結(jié)構(gòu)的為()。A.莢膜

B.擬核

C.芽孢

D.鞭毛3.微生物運輸營養(yǎng)物質(zhì)的主要方式()。A.單純擴散

B.促進擴散

C.主動運輸

D.基團轉(zhuǎn)位4.微生物代謝中，硝酸鹽和硫酸鹽可作為電子受體是在（

）。A.無酶時B.無ATP時C.無氧時D.有細胞色素時5.磺胺類藥物是一種抗代謝藥物，與（

）是結(jié)構(gòu)類似物。A.對氨基苯甲酸B.二氫蝶酸C.戊二醛D.四氫葉酸6.配制1000ml的固體培養(yǎng)基需加瓊脂()。A.0

B.15～20克

C.2～7克

D.100克7.F-菌株可以通過（）轉(zhuǎn)變?yōu)镕+菌株。A.轉(zhuǎn)化B.轉(zhuǎn)導(dǎo)C.接合D.原生質(zhì)體融合8.Hfr菌株是（

）的一種菌株。A.含有許多不尋常的質(zhì)粒B.從受體細菌獲得染色體物質(zhì)C.有轉(zhuǎn)導(dǎo)能力D.高頻重組菌株9.在原生質(zhì)體融合實驗中制備酵母菌原生質(zhì)體常用（

）。A.溶菌酶B.蝸牛消化酶C.青霉素D.制霉菌素10.下列非原核生物基因重組方式的是（

）。A.突變B.轉(zhuǎn)導(dǎo)C.轉(zhuǎn)化D.原生質(zhì)體融合四、判斷題（每小題1分，共10小題10分）1.原核微生物的主要特征是細胞內(nèi)無定形核。（

）2.細菌芽孢是細菌繁殖構(gòu)造。（）3.在最適生長溫度下，微生物生長繁殖速度最快，因此生產(chǎn)單細胞蛋白的發(fā)酵溫度應(yīng)選擇最適生長溫度。（）4.E．coliK12（λ）表示一株帶有λ前噬菌體的大腸桿菌K12溶源菌株。（

）5.單細胞微生物典型生長曲線對數(shù)期菌種處于快速生長階段。（）6.營養(yǎng)物跨膜的主動運輸必需依賴載體和能量。（）7.一般認為各種抗性突變是通過其所處的環(huán)境誘發(fā)出來的。（

）8.GC比接近的種其親緣關(guān)系相近。（

）9.民間制作的泡菜就是乳酸菌產(chǎn)生的乳酸對其他腐敗菌產(chǎn)生的拮抗作用才保證泡菜的風(fēng)味、質(zhì)量和良好的保藏性能。（）10.微生物系統(tǒng)分類單元從高到低依次為界、門、綱、目、種、屬、科。（

）五、簡答題（共4小題28分）1．什么是純培養(yǎng)物，在實驗室如何利用固體培養(yǎng)基獲得微生物純培養(yǎng)物?（本題6分）2．簡要回答金黃色葡萄球菌肽聚糖單體組成成分？（本題6分）3．酵母菌的特點是什么？（本題10分）4．影響轉(zhuǎn)化效率的因素有哪些？（本題6分）1.微生物學(xué)：研究微生物形態(tài)構(gòu)造以及生命活動規(guī)律的學(xué)科叫做微生物學(xué)。2.噬菌斑:由于噬菌體粒子對敏感菌宿主細胞的侵染和裂解，而在菌苔上形成具有一定大小、形狀、邊緣的透明圈，稱為噬菌斑。3.溶源性:溫和噬菌體侵入宿主細胞后，由于基因組整合到宿主細胞的基因組上，與宿主細胞DNA同步復(fù)制，因此，一般情況下不引起宿主細胞裂解，這稱為溶源性。4.轉(zhuǎn)化：受體菌接受供體菌的DNA片段而獲得部分新的遺傳性狀的現(xiàn)象，就稱轉(zhuǎn)化。5.消毒：消毒是一種采用較溫和的理化因素，僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的病原菌。二、填空題（每空0.5分，共5小題12分）1.潛伏期，裂解期，穩(wěn)定期2.糖酵解，HMP，ED,TCA循環(huán)，ED3.滅菌，消毒，防腐，化療4.結(jié)晶紫，紫色，無色，紫色，番紅，紅色，紫色5.互生，共生，寄生，拮抗，捕食 三、選擇題（每小題1分，共10小題10分）1.B2.B3.C4.C5.A6.B7.C8.D9.B10.A四、判斷題（每小題1分，共10小題10分）1.√2.×3.×4.√5.√6.√7.×8.×9.√10.×五、簡答題（共4小題28分）1．什么是純培養(yǎng)物，在實驗室如何利用固體培養(yǎng)基獲得微生物純培養(yǎng)物?（本題6分）答：純培養(yǎng)物是只含有一種微生物的培養(yǎng)物。在實驗室如何利用固體培養(yǎng)基可以通過以下方法獲得微生物純培養(yǎng)物：1）稀釋涂布平板法；2）平板劃線分離法；3）澆注培養(yǎng)法。2．簡要回答金黃色葡萄球菌肽聚糖單體組成成分？（本題6分）答：1）雙糖單位：N-乙酰胞壁酸和N-乙酰葡萄糖胺通過?-1，4糖苷鍵連接；2）甘氨酸五肽；3）短肽尾，L-Ala-D-Glu-L-Lys-D-Ala。3．酵母菌的特點是什么？（本題10分）答：1）個體一般以單細胞狀態(tài)存在；2）多數(shù)營出芽繁殖，少數(shù)裂殖；3）能發(fā)酵糖類產(chǎn)能；4）細胞壁常含有甘露聚糖；5）喜在含糖量較高、酸度較大的水生環(huán)境中生長。4．影響轉(zhuǎn)化效率的因素有哪些？（本題6分）答：1）受體細胞的感受態(tài)，它決定轉(zhuǎn)化因子能否被吸收進入受體細胞；2）受體細胞的限制酶系統(tǒng)和其他核酸酶，它們決定轉(zhuǎn)化因子在整合前是否被分解；3）受體和供體染色體的同源性，它決定轉(zhuǎn)化因子的整合。

六、論述題（共1小題20分）試述一種細菌的蘇氨酸營養(yǎng)缺陷型突變株的篩選方法。答：（1）誘變劑處理；（2分）（2）淘汰野生型：用青霉素法。將誘變劑處理后的單細胞懸液均勻涂布于相應(yīng)基本培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，同時在平板表面均勻噴上青霉素。培養(yǎng)后用影印方法接種到完全培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。（6分）（3）檢出缺陷型：將上述平板上生長的菌落全部用影印接種工具轉(zhuǎn)印到另一基本培養(yǎng)基平板上。比較兩種平板上菌落生長情況，在基本培養(yǎng)基平板上不生長但是在完全培養(yǎng)基上能生長的菌落就是營養(yǎng)缺陷型突變株。（6分）（4）鑒定缺陷型：生長譜法。（6分）1細菌基本形態(tài)可以分為、和。(本題1.5分)2.霉菌菌絲有兩類，一類是，如和，另一類是，例如和。(本題3分)3.在某些原核生物細胞壁外，會著生一些特殊的附屬物，包括、、、等。(本題2分)4.根據(jù)營養(yǎng)物質(zhì)在機體中生理功能的不同，可以將它們分為、、、、5大類。(本題2.5分)5.微生物的系統(tǒng)命名采用

法，即

加

。（本題1.5分）6.病毒粒子衣殼對稱體制包括：、和。（本題1.5分）三、選擇題（每小題1分，共10小題10分）1.產(chǎn)生假根是（）的形態(tài)特征。

A.根霉

B.酵母菌

C.青霉

D.曲霉2.革蘭氏陽性菌細胞壁特有成分是（）。A.蛋白質(zhì)B.肽聚糖C.脂多糖D.磷壁酸3.微生物從糖酵解途徑獲得（

）ATP分子。A.2個B.4個C.36個D.38個4.處于對數(shù)生長期的細菌其特點是（）。A.生長緩慢B.生長迅速C.大多數(shù)死亡D.繁殖代時長5.深層穿刺接種細菌到試管半固體培養(yǎng)基中（

）。A.可以觀察細菌是否能運動B.除去代謝廢物的一個機會C.增加氧氣D.增加鉀和鈉離子的數(shù)目6.加壓蒸汽滅菌鍋滅菌參數(shù)是（

）。A.100℃,30minB.180℃,10minC.121℃,20～30min7.霉菌適宜生長的pH范圍為（）。

A.＜4.0B.4.0-6.0C.6.5-8.0D.8.08.strR是（

）的一種菌株。A.丙氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株B.抗鏈霉素突變株C.異亮氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株D.抗慶大霉素突變株9.微生物是生產(chǎn)以下食品時的一個重要因素，除了（

）之外。A.酸菜B.朝鮮泡菜C.純牛奶D.酸奶10.蘇云金孢桿菌作為（

）廣泛用于現(xiàn)代生物學(xué)中。A.乳酸菌B.干酪和干酪產(chǎn)品的生產(chǎn)者C.