病理室常用試劑配制方法課件

病理常用試劑及染液的配制南昌高新達安臨床檢驗所1可編輯課件PPT病理常用試劑及染液的配制1.蘇木素配制方法2.伊紅配制方法3.脫鈣液配制方法4.鹽酸酒精配制方法5.福爾馬林配制方法2可編輯課件PPT蘇木精染色液的配制石蠟切片蘇木精伊紅（HE）染色技術(shù)是病理、解剖學(xué)、組織胚胎學(xué)、法醫(yī)學(xué)和生物學(xué)等領(lǐng)域最基本的技術(shù)操作。對于蘇木精，應(yīng)該有一個全面的了解，才能對常規(guī)的HE染色靈活掌握。蘇木精，又稱蘇木素。蘇木精若存放過久或接觸空氣，顏色可慢慢加深，用其染液就不理想；它易溶于乙醇、乙二醇和甘油，微溶于水；它本身不是一種染料，沒有染色性能，需要經(jīng)過氧化和媒染后，才成為一種很好的細胞核染料。3可編輯課件PPT人工氧化：是指在配制蘇木精染液時加入一定量的氧化劑如氧化汞、碘酸鈉等可立即使蘇木精氧化成蘇木紅。但要注意加入氧化劑的量不能太多，不要使蘇木精分子全部氧化變成蘇木紅，否則，蘇木精染液的染色力減弱甚至失效。蘇木精染色液的配制4可編輯課件PPT蘇木精氧化劑中首選碘酸鈉。其優(yōu)點是在室溫下易溶于水，不需煮沸就能放氧。氧化后，產(chǎn)生的碘化鈉是無害的，染液的穩(wěn)定性好。而氧化汞需要在蘇木精染液煮沸時加入才能放氧，當開始放氧時又要立即把染液置入冷水中終止放氧。隨后蘇木精染液每天都會在液面形成一層金屬膜，需要把染液過濾后才能用以染色，而汞鹽也是一種毒性物質(zhì)。蘇木精染色液的配制5可編輯課件PPT蘇木精的氧化與下列因素有關(guān)：蘇木精染液PH值。染液偏堿性氧化快，中性時稍慢，酸性時很慢，所以加酸時的蘇木精染液可延緩氧化。氧化劑的量。加入人工氧化劑后蘇木精可立即被氧化成熟可用。自然氧化和供氧量有關(guān)。如靠近陽光、染液通風(fēng)、經(jīng)常搖動等可加速氧化。氧化時蘇木精液的溫度。用碘酸鈉等作氧化劑時，在常溫下加入即可，而用氧化汞作氧化劑時，需把蘇木精液煮沸時加入才能放氧。蘇木精染色液的配制6可編輯課件PPT蘇木精的媒染：蘇木精被氧化成蘇木紅，為弱酸性，染色淺淡。但當加入二價或三價的金屬鹽如鋁、鐵鹽后，染料分子就能與這些金屬鹽的離子結(jié)合形成色淀。這種色淀具有陽電荷，和帶負電荷的DNA極性吸著而完成染色。這些二價或三價的金屬鹽就稱為媒染劑。蘇木精染色液的配制7可編輯課件PPT配制蘇木精染液所需試劑的作用：氧化汞、碘酸鈉：作為蘇木精的氧化劑，使無染色力的蘇木精氧化后轉(zhuǎn)變成有染色力的蘇木紅。硫酸鋁鉀、硫酸鋁銨和硫酸鋁：作為媒染劑，其三價鋁離子與蘇木紅結(jié)合形成藍紫色的色淀與細胞核內(nèi)核酸的磷酸基牢固結(jié)合。

無水乙醇：較快溶解蘇木精，并可抑制霉菌生長。蘇木精染色液的配制8可編輯課件PPT配制蘇木精染液所需試劑的作用：甘油：作為穩(wěn)定劑，延緩蘇木精染液蒸發(fā)，防止蘇木精過度氧化，延長蘇木精液的使用期。冰醋酸：可抵銷氧化劑的氧化，使蘇木精和蘇木紅保持均衡。同時又可增加胞核的選擇性染色，使胞核染色質(zhì)顯示得清晰細致。蘇木精染色液的配制9可編輯課件PPT改良Lillie-Mayen蘇木素染液的配制：

A液：蘇木素5g充分溶于無水乙醇50ml；B液：硫酸鋁鉀50g溶于蒸餾水650ml；稍加熱待完全溶解后把二者混合,再依次加入碘酸鈉0.5g、甘油300ml和冰乙酸20ml,蘇木素染液有效期3個月。蘇木精染色液的配制10可編輯課件PPT蘇木精染色液的配制11可編輯課件PPT蘇木精染液配制是否理想，可從以下幾方面檢測：將幾滴蘇木精染液滴入一小盤自來水內(nèi)，滴入的瞬間由紅色轉(zhuǎn)為紫色再轉(zhuǎn)為紫藍色慢慢擴散，則該蘇木精液配制得好；若在擴散中仍保持紅色，則為未足夠成熟或陳舊的蘇木精染液。取一塊濾紙滴入蘇木精染液兩滴，蘇木精在濾紙上擴散后不久將呈一紫醬色的圓斑，在圓斑的周邊最后呈深紫色，這是好的蘇木精液。若周邊不呈深紫色，說明該染液未夠成熟或沒有配好。理想的方法還是在實際操作中染一張淋巴結(jié)組織切片，在鏡下觀察其染色效果。蘇木精染色液的配制12可編輯課件PPT伊紅染色液的配制伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解成帶負電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷的陽離子結(jié)合使胞漿染色，細胞漿、紅細胞、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍色的細胞核形成鮮明對比。伊紅是細胞漿的良好染料。13可編輯課件PPT先將伊紅0.5-1g溶于95%酒精100ml中，用玻璃棒研碎溶解后，每100ml加冰醋酸一滴。用乙醇性伊紅液染細胞漿后，可不經(jīng)水洗直接用85%酒精脫水。伊紅染色液有效期3個月。伊紅染色液的配制14可編輯課件PPT脫鈣液的配制

在病理實驗制作切片時，我們會經(jīng)常碰到一些含鈣組織，而且鈣十分堅硬。由于組織中的鈣和石蠟之間的密度不同，含鈣的組織一般不能直接制作切片。因此，脫鈣是制作骨組織切片的重要環(huán)節(jié)15可編輯課件PPT用于脫鈣的試劑很多，脫鈣劑包括有機酸、無機酸、乙二胺四乙酸（EDTA）除此之外還有電解脫鈣法。強有機酸，如硝酸和鹽酸可用于密皮質(zhì)骨的脫鈣，在短時間內(nèi)可除去大量的鈣。但是這些強酸對組織形態(tài)會產(chǎn)生不良影響，脫鈣作用強對組織破壞性大。脫鈣液的配制16可編輯課件PPT我們常用的脫鈣液配制方法是，先將10%福爾馬林10ml倒入80ml蒸餾水中，再加入鹽酸10ml即可。脫鈣液的有效期3個月。脫鈣液的配制17可編輯課件PPT鹽酸酒精的配制1％鹽酸酒精(即由1ml37％濃鹽酸加上99ml170％酒精配制而成,其實際濃度應(yīng)該是0.37％)的分化作用,主要是依靠鹽酸在水中電離出H+,改變組織表面的電荷,使過染和吸附的蘇木素染料從組織中脫離,達到其分化目的。18可編輯課件PPT鹽酸酒精的配制方法是，用滴定管配合吸耳球轉(zhuǎn)移鹽酸1ml至99ml70%乙醇中混勻即可。1%鹽酸酒精有效期3個月。鹽酸酒精的配制19可編輯課件PPT福爾馬林的配制固定的目的是在于盡量使組織和細胞保持與生活時相仿的成分和形態(tài)，迅速防止組織、細胞的死后變化，防止自溶與腐敗，使細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等各種成分轉(zhuǎn)變成不溶性物質(zhì)，使組織中的各種物質(zhì)沉淀和凝固起來。因此，固定的組織愈新鮮愈好，固定組織時，應(yīng)使用足量的固定液。20可編輯課件PPT固定液的種類很多，分為單純固定液和混合固定液。

常用單純固定液：1.甲醛(formaldehyde）；2.乙醇(alcohol)；3.醋酸(aceticacid)又名乙酸

福爾馬林的配制21可編輯課件PPT甲醛為非沉淀性固定劑，是一種約有40％重量溶于水的氣體，易揮發(fā)，市售的為40％的甲醛水溶液，也稱為福爾馬林原液(formalin)。此液久存自行分解，形成的白色沉淀為副醛(三聚甲醛或多聚甲醛)。福爾馬林的配制22可編輯課件PPT日常工作中用于組織固定的10%福爾