莨菪烷類抗膽堿藥物分析

關(guān)于莨菪烷類抗膽堿藥物分析學(xué)習(xí)要求掌握莨菪烷類藥物的鑒別和特殊雜質(zhì)檢查方法原理與應(yīng)用熟悉含量測定的酸性染料比色法、非水滴定法和HPLC法掌握莨菪烷類抗膽堿藥物的結(jié)構(gòu)特征、理化性質(zhì)與分析方法之間的關(guān)系4123了解其他分析方法在莨菪烷類藥物分析中的應(yīng)用第2頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)莨菪烷類藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)顛茄生物堿的來源：從茄科植物，如顛茄、莨菪和曼陀羅等中提取的生物堿，由莨菪醇與不同有機酸所成的酯。作用：具有對M受體阻斷作用第3頁,共39頁，2024年2月25日，星期天（一）典型藥物的結(jié)構(gòu)

硫酸阿托品

氫溴酸東莨菪堿

（atropinesulfate）(Scopolaminehydrobromide）第一節(jié)莨菪烷類藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)第4頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)莨菪烷類藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)氫溴酸山莨菪堿(Anisodaminehydrobromide）氫溴酸后馬托品(Hormatropinehydrobromide）第5頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)莨菪烷類藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)樟柳堿(Anisodine）甲溴東莨菪堿(MethscopolaminBromide）第6頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)莨菪烷類藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)（二）主要化學(xué)性質(zhì)1.

水解性

阿托品和東莨菪堿分子結(jié)構(gòu)中，具有酯的結(jié)構(gòu)，易水解。以阿托品為例，水解生成莨菪醇(Ⅰ)和莨菪酸(Ⅱ)，其反應(yīng)結(jié)構(gòu)式:

2.

堿性

阿托品和東莨菪堿結(jié)構(gòu)中，五原脂環(huán)含有叔胺氮原子，較強的堿性，易于酸成鹽，如阿托品pKb1為4.353.

旋光性

氫溴酸東莨菪堿含有不對稱碳原子，左旋體比旋度為-24°至-27°。阿托品雖然含有不對稱碳原子，但外消旋化，無旋光性第7頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)鑒別反應(yīng)鑒別反應(yīng)12345托烷生物堿的鑒別反應(yīng)（Vitaili反應(yīng)）與硫酸-重鉻酸鉀的反應(yīng)與生物堿顯色劑和沉淀劑的反應(yīng)

色譜法

光譜鑒別法第8頁,共39頁，2024年2月25日，星期天阿托品、莨菪堿等托烷類生物堿水解后生成莨菪酸，均可發(fā)生Vitaili反應(yīng)

生成具有共軛結(jié)構(gòu)的陰離子而顯深紫色

與發(fā)煙硝酸共熱，得到黃色三硝基衍生物，放冷，加醇制氫氧化鉀少許，即脫羧

一、托烷生物堿的鑒別反應(yīng)（Vitaili反應(yīng)）第二節(jié)鑒別反應(yīng)第9頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)鑒別反應(yīng)例1

氫溴酸山莨菪堿的鑒別取本品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色殘渣，放冷，加乙醇2~3滴濕潤，加固體氫氧化鉀一小粒，即顯深紫色。

第10頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)鑒別反應(yīng)二、與硫酸-重鉻酸鉀的反應(yīng)三、與生物堿顯色劑和沉淀劑的反應(yīng)

阿托品＋氯化汞醇試液→黃色沉淀東莨菪堿＋氯化汞醇→白色復(fù)鹽沉淀第11頁,共39頁，2024年2月25日，星期天氫溴酸東莨菪堿的鑒別即生成白色沉淀（與阿托品及后馬托品的區(qū)別）

取本品約10mg，加水1ml溶解后，置分液漏斗中分取三氯甲烷液，置水浴上蒸干，殘渣中加二氯化汞的乙醇溶液1.5ml

加氨試液使成堿性后，加三氯甲烷5ml，搖勻

第二節(jié)鑒別反應(yīng)（例2）第12頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)鑒別反應(yīng)生物堿沉淀試劑反應(yīng)條件及結(jié)果碘化鉍鉀試液（Dragendorff試劑）橙紅或棕紅色沉淀碘化鉀碘試液(Wagnen試劑)棕色或棕褐色沉淀碘化汞鉀試液(Mayen試劑)在酸性或堿性溶劑中生成白色或淡黃色沉淀三硝基苯酚試液（Hager試劑或苦味酸試液）結(jié)晶性沉淀并有特定熔點硅鎢酸試液（Bertrend試劑）白色、淡黃色或黃棕色沉淀磷鎢酸試液（Scheibler試劑）酸性或中性溶液中，淡黃色沉淀表13-2常用的生物堿沉淀試劑及反應(yīng)Tab.13-2Theprecipitationreagentsandreactionfortestingalkaloids

第13頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)鑒別反應(yīng)四、光譜鑒別法通過比較λmax、λmin或吸收光譜的一致性進行鑒別，也可比較其吸光度或吸收系數(shù)的比值來鑒別絕大多數(shù)生物堿原料藥都采用IR法鑒別

UV

IR第14頁,共39頁，2024年2月25日，星期天四、光譜鑒別法氫溴酸東莨菪紅外光譜TheinfraredspectrumofScopolamine

Hydrobromide

第二節(jié)鑒別反應(yīng)第15頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)鑒別反應(yīng)c色譜法一般用于已知生物堿的鑒別TLCHPLCGCPC五、色譜法第16頁,共39頁，2024年2月25日，星期天例4

Ch.P氫溴酸山莨菪堿注射液TLC鑒別取本品1ml，置水浴上蒸干。取殘渣與消旋山莨菪堿對照品，分別加甲醇制成10mg/ml的溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一氧化鋁（中性，活度Ⅱ-Ⅲ級）薄層板上，以三氯甲烷-無水乙醇（95∶5）為展開劑，展開，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液-碘化鉀碘試液（1∶1）。供試品溶液所顯主斑點位置和顏色，應(yīng)與對照品溶液的主斑點相同。第二節(jié)鑒別反應(yīng)第17頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)特殊雜質(zhì)與檢查氫溴酸東莨菪堿中特殊雜質(zhì)檢查氫溴酸東莨菪堿來源：

茄科植物顛茄、白曼陀羅、莨菪中等提?。ㄎ覈茁恿_的干燥品：洋金花中提取東莨菪堿，制成氫溴酸鹽）

制備方法：

洋金花粗粉乙醇/滲漉滲漉液減壓蒸餾浸膏H2SO4/提取酸性提取液Na2CO3,CHCl3/提取總生物堿Na2CO3,CHCl3/分離東莨菪堿HBr/成鹽氫溴酸東莨菪堿（粗品）75%C2H5OH/精制成品第18頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)特殊雜質(zhì)與檢查特殊雜質(zhì)與檢查取本品0.50g，加水10ml溶解后，依法測定（附錄ⅥH），pH值應(yīng)為4.0～5.5。－強酸弱堿取本品0.15g,加水5ml溶解后，在15～20℃加高錳酸鉀滴定液(0.02mol/L)0.05ml，10分鐘內(nèi)紅色不得完全消失。－阿撲東莨菪堿、其他含有不飽和雙鍵的有機物質(zhì)取本品0.10g，加水2ml溶解后，分成兩等份：一份中加氨試液2～3滴，不得發(fā)生渾濁；另一份中加氫氧化鉀試液數(shù)滴，只許發(fā)生瞬即消失的類白色渾濁。－阿撲阿托品、顛茄堿

酸度易氧化物其他生物堿第19頁,共39頁，2024年2月25日，星期天一、酸性染料比色法的基本原理UV

第四節(jié)含量測定第20頁,共39頁，2024年2月25日，星期天應(yīng)用示例硫酸阿托品片的含量測定精密量取對照品溶液和供試品溶液各2ml，分別置預(yù)先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液4ml，振搖提取后，靜置使分層；分取三氯甲烷液，照紫外-可見分光光度法，在420nm波長處分別測定吸光度，計算，即得。第四節(jié)含量測定第21頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)含量測定BECDA有機試劑的選擇水分的影響水相最佳pH值的選擇酸性染料的選擇及其濃度酸性染料中雜質(zhì)的影響酸性染料比色法的影響因素第22頁,共39頁，2024年2月25日，星期天

水性最佳pH值：使得BH+和In-最多

酸性染料及其濃度：定量結(jié)合；對離子對的溶解性好；有較高的吸收度；足夠量即可

有機溶劑的選擇：提取效率高，氯仿最理想

水分的影響：影響結(jié)果，脫水劑或濾紙除去水分

酸性染料中的有色雜質(zhì)：有機溶劑萃取除去第四節(jié)含量測定第23頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)含量測定測定法精密量取對照品溶液和供試品溶液各2ml，分別置預(yù)先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠2.0ml，振搖提取兩分鐘后，靜止分層，分取澄清的三氯甲烷液，在420nm波長處分別測定吸光度，計算，并將結(jié)果與1.027相乘，即得本品（C17H23NO3）2·H2SO4·H2O相當標示量的百分含量。百分標示量式中Ax、AS分別為供試品和對照品溶液的吸光度；CS為對照品溶液的濃度mg/ml；m為樣品質(zhì)量；為平均片重。1.027為（C17H23NO3）2·H2SO4·H2O與（C17H23NO3）2·H2SO4·H2O的質(zhì)量換算系數(shù)。第24頁,共39頁，2024年2月25日，星期天Fig.13-2TheUV-spectrumofatropinesulfatewithBTBions1.離子對2.染料空白（對照品平行測定，空白吸收可被扣除）3.阿托品（水溶液在420nm附近無吸收）第四節(jié)含量測定第25頁,共39頁，2024年2月25日，星期天一、非水溶液滴定法當HA酸性較強時，反應(yīng)不能定量完成，必須除去或降低HA的酸性，使反應(yīng)順利地完成。BH+A-+HClO4BH+ClO4+HA游離堿類鹽被置換出的弱酸第四節(jié)含量測定第26頁,共39頁，2024年2月25日，星期天供試品+冰醋酸10ml~30ml若供試品為氫鹵酸鹽再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml~5ml結(jié)果HClO4滴定空白試驗校正指示劑堿性溶液pKb>10，冰醋酸中滴定突躍不明顯，需加入醋酐，使堿性增強，突躍更明顯第四節(jié)含量測定第27頁,共39頁，2024年2月25日，星期天適用范圍廣

分離模式多樣

檢測手段多樣靈敏

選擇和專屬性強

分離速度快重復(fù)性好

HPLC優(yōu)點各國藥典中采用HPLC法對莨菪類生物堿的含量和有關(guān)物質(zhì)進行直接分析測定的比例不斷增加。

第四節(jié)含量測定第28頁,共39頁，2024年2月25日，星期天色譜保留常常較弱，從而影響到它們的含量或有關(guān)物質(zhì)HPLC測定的專屬性和準確度。采用離子對高效液相色譜法，可以改善它們的色譜保留行為，并實現(xiàn)準確測定。

在反相液相色譜條件下呈離子狀態(tài)的藥物，如有機堿類、有機酸類等調(diào)整流動相的pH，抑制它們的解離，以改變色譜保留行為。但并不都能獲得滿意的結(jié)果。

第四節(jié)含量測定第29頁,共39頁，2024年2月25日，星期天了解藥物在體內(nèi)數(shù)量與質(zhì)量的變化

獲得藥代參數(shù)和藥物轉(zhuǎn)化、代謝的方式、途徑等信息有助于對所研究的藥物作出綜合評價

概念：研究生物機體中藥物及其代謝物和內(nèi)源性物質(zhì)的質(zhì)與量變化規(guī)律的分析方法學(xué)

體內(nèi)藥物分析通過分析手段第五節(jié)體內(nèi)藥物分析

第30頁,共39頁，2024年2月25日，星期天去除蛋白質(zhì)

綴合物的水解

液-液提取

固相提取

化學(xué)衍生化

12345生物樣品組成復(fù)雜，干擾雜質(zhì)多，一般需經(jīng)分離、純化，排除干擾后才能進行測定第五節(jié)體內(nèi)藥物分析

第31頁,共39頁，2024年2月25日，星期天有些藥物的生物樣品即使經(jīng)預(yù)處理和富集，采用HPLC-UV測定時仍有干擾；而且對于小劑量或生物利用度低的藥物，采用UV檢測、甚至熒光檢測時，靈敏度也不能滿足要求現(xiàn)代色譜和光譜的聯(lián)用技術(shù)集色譜的高分離效能和光譜的高專屬性與高靈敏度于一體，尤其是液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)，對于絕大多數(shù)有機堿性藥物的檢測限能達10pg/ml。存在問題解決辦法第五節(jié)體內(nèi)藥物分析

第32頁,共39頁，2024年2月25日，星期天復(fù)雜生物樣品中微量藥物定量測定專屬有效的方法色譜與光譜聯(lián)用技術(shù)集色譜的高分離效能和光譜的高專屬性與高靈敏度于一體

特點作用藥物代謝物定性鑒定和含量測定常用的方法

第五節(jié)體內(nèi)藥物分析第33頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第五節(jié)體內(nèi)藥物分析人血漿和皮下脂肪組織