器官移植和配型

關于器官移植和配型

器官移植與HLA分型檢測技術第2頁,共58頁，2024年2月25日，星期天majorhistocompatibilitycomplex,

MHC主要組織相容性復合體人類白細胞抗原h(huán)umanleukocyteantigen,HLA/HLA復合體/MHC分子/MHC抗原第3頁,共58頁，2024年2月25日，星期天HLA的結構HLA-Ⅱ類分子HLA-Ⅰ類分子第4頁,共58頁，2024年2月25日，星期天公元4世紀羅馬教堂第5頁,共58頁，2024年2月25日，星期天自體移植同種同基因移植同種異基因移植異種移植移植物抗原刺激受者的免疫系統(tǒng)/受者組織抗原刺激移植物中的免疫細胞誘發(fā)的免疫應答稱為移植排斥反應同種異型移植排斥反應第6頁,共58頁，2024年2月25日，星期天第1節(jié)MHC基因和遺傳特點（復習）MHC基因的構成MHC基因的特性MHC基因的意義第7頁,共58頁，2024年2月25日，星期天一、MHC基因的構成（一）定位

第6號染色體短臂（6p21.31）全長3600kb，共有224個基因座位，128個表達產物。（二）基因區(qū)經典Ⅰ類基因：B、C、A位點經典Ⅱ類基因：DP、DQ、DR位點第8頁,共58頁，2024年2月25日，星期天Ⅰ類基因區(qū)HLA復合體3600kb長度224基因座位Ⅱ類基因區(qū)ACBDRDQDP著絲點Pq人6號染色體MHC-Ⅱ類分子MHC-Ⅰ類分子第9頁,共58頁，2024年2月25日，星期天αβDPDQDRBCAαβαββααα第10頁,共58頁，2024年2月25日，星期天二、MHC基因遺傳特點（一）HLA為高度多態(tài)性基因

MHC基因復合體是由多個位置相鄰的基因座位組成，可以編碼相同或相似的MHC抗原。第11頁,共58頁，2024年2月25日，星期天MHC為共顯性表達第12頁,共58頁，2024年2月25日，星期天Ⅱ類基因Ⅰ類基因αβDPDQDRBCAαβαβααα2496281062抗原特異性5593812412623506276851等位基因數(shù)DRBDRADQBDQADPBDPAACBⅡ類基因Ⅰ類基因基因型別第13頁,共58頁，2024年2月25日，星期天2496281062抗原特異性5593812412623506276851等位基因數(shù)DRBDRADQBDQADPBDPAACBⅡ類基因Ⅰ類基因基因型別人群之中所有基因座位等位基因都相同的幾率：

1262381245593851276506≈1

1019

人群之中MHC抗原相同的幾率：

6924621028≈1

109

第14頁,共58頁，2024年2月25日，星期天（二）單體型和連鎖不平衡性意義：器官移植選擇供體順序自身﹥同卵雙生﹥兄弟姐妹﹥父母﹥親屬﹥無關人群父母與子女完全相同的幾率：父母與子女一半相同的幾率：子女間完全相同的幾率：子女間一半相同的幾率：子女間完全不同的幾率：0100%25%50%25%1.單體型遺傳第15頁,共58頁，2024年2月25日，星期天1.單體型遺傳（二）單體型和連鎖不平衡性2.連鎖不平衡性（一）HLA為高度多態(tài)性基因第16頁,共58頁，2024年2月25日，星期天第2節(jié)HLA與器官移植第17頁,共58頁，2024年2月25日，星期天

在三類HLA分子中，Ⅰ、Ⅱ類分子是觸發(fā)移植排斥反應的首要抗原。次要組織相容性抗原ABO血型抗原系統(tǒng)其他組織特異性抗原主要組織相容性抗原

決定移植“成敗”的抗原第18頁,共58頁，2024年2月25日，星期天

一、器官移植的類型

（1）自體移植（autograft）皮膚，骨髓，軟骨和骨（2）同種同基因移植（syngraft）（3）同種異基因移植（allograft）

同種異型移植（4）異種移植（xenograft）第19頁,共58頁，2024年2月25日，星期天一、同種異型排斥反應的識別機制受者對T細胞對供者的MHC分子的直接與間接識別。（一）直接識別機制：

第20頁,共58頁，2024年2月25日，星期天直接識別受者T細胞第21頁,共58頁，2024年2月25日，星期天受者T細胞直接識別的靶結構

第22頁,共58頁，2024年2月25日，星期天同種異型抗原的直接識別及其效應

第23頁,共58頁，2024年2月25日，星期天（二）間接識別受者T細胞識別受者APC加工處理的供者的MHC分子在急性排斥反應中、晚期以及慢性排斥反應中起重要作用。第24頁,共58頁，2024年2月25日，星期天識別方式間接識別第25頁,共58頁，2024年2月25日，星期天

同種異型抗原的間接識別

第26頁,共58頁，2024年2月25日，星期天第27頁,共58頁，2024年2月25日，星期天二、同種異型移植排斥反應的類型及效應機制（一）宿主抗移植物反應（hostversusgraftreaction,HVGR）依據(jù)反應發(fā)生的時間及病理強度分為：

1、超急性排斥反應（術后開始至幾個小時）

2、急性排斥反應（術后幾天至幾周）

3、慢性排斥反應（術后數(shù)月至數(shù)年）第28頁,共58頁，2024年2月25日，星期天

超急性排斥反應發(fā)生示意圖

第29頁,共58頁，2024年2月25日，星期天（二）移植物抗宿主反應

（graft

versushostreaction,GVHR

）更為嚴重的一種排斥反應原因：（1）受者與供者HLA不相匹配；（2）移植物中成熟的T細胞多；（3）受者處于免疫功能極度低下的狀態(tài)常見于：骨髓移植（造血干細胞移植）、胸腺、脾移植及新生兒接受大量輸血。第30頁,共58頁，2024年2月25日，星期天三、同種異體移植排斥反應的防治（一）尋求與受者MHC相配的供者組織或器官是目前最為有效多見的方法。

1、ABO血型抗原配型

2、HLA抗原配型①供者與受者HLA-A、B相配的位點越多存活率越高；②上述的基礎上，HLA-DR、DQ盡可能的匹配；③HLA-DR類型對存活率影響較大。第31頁,共58頁，2024年2月25日，星期天（二）使用免疫抑制藥物

1、多為抑制T細胞藥物環(huán)孢菌素A（CsA），

FK-506、Rapamycin2、去氧精胍菌素等抗生素類；阻斷T細胞的生長周期

3、激素

4、可溶性CK受體、抗CK抗體和抗粘附分子抗體第32頁,共58頁，2024年2月25日，星期天阻斷協(xié)同刺激信號誘導T細胞失能第33頁,共58頁，2024年2月25日，星期天（三）誘導對移植抗原的特異性耐受免疫抑制劑的毒副作用（致死性感染和腫瘤）理想方法是誘導特異性耐受。新方案：①誘導凋亡；②誘導T細胞無應答（anergy）包括輸入可溶性CTLA-4及CD40L-CD40、CD2-CD58等信息傳遞阻斷。第34頁,共58頁，2024年2月25日，星期天第3節(jié)HLA分型檢測技術分子生物學分型血清學分型技術細胞分型技術20世紀60年代20世紀80年代20世紀70年代第35頁,共58頁，2024年2月25日，星期天一、血清學分型技術1.原理

應用一系列已知HLA特異性的分型血清與待測的淋巴細胞反應，通過補體依賴的細胞毒性實驗，來檢測HLA抗原特異性。典型技術：定型板法（微量細胞毒實驗）第36頁,共58頁，2024年2月25日，星期天反應結果測定1.染料拒染法臺盼藍伊紅碘化丙啶7-AAD2.流式細胞術第37頁,共58頁，2024年2月25日，星期天死（著染）細胞（%）記分結果判斷0～101陰性11～202可疑陰性21～504弱陽性51～806陽性>808強陽性0未試驗或不能讀數(shù)染料拒染法的判定標準第38頁,共58頁，2024年2月25日，星期天第39頁,共58頁，2024年2月25日，星期天2.血清學分型可檢測的抗原（SD抗原）HLA-Ⅱ類分子:HLA-Ⅰ類分子:B,C,ADR,DQ（B細胞為靶細胞）第40頁,共58頁，2024年2月25日，星期天3.方法學評價操作簡便易行節(jié)約試劑、結果可靠、重復性好無需特殊設備耗時長不同批號抗血清結果常有不同優(yōu)點缺點第41頁,共58頁，2024年2月25日，星期天二、細胞學分型技術（LD抗原）1.原理混合淋巴細胞培養(yǎng)，檢測細胞增殖（mixedlymphocyteculture,MLC）單向MLC雙向MLC第42頁,共58頁，2024年2月25日，星期天陰性分型法

陽性分型法

1.單向MLC刺激細胞：已知HLA型別的分型細胞（預處理，使其失去增殖能力）反應細胞：受檢者外周血單個核細胞（具有增殖能力）淋巴細胞轉化（形態(tài)學）3H-TdR摻入法MTT還原法第43頁,共58頁，2024年2月25日，星期天（1）陰性分型法

刺激細胞

HLA-DP1受者T淋巴細胞

+增殖弱HLA-DP1非HLA-DP1

增殖強

純合子細胞只表達HLA-DP1

照射處理第44頁,共58頁，2024年2月25日，星期天（2）陽性分型法

預致T敏細胞

非HLA-DP1待測B淋巴細胞

+增殖弱非HLA-DP1HLA-DP1

增殖強

刺激細胞

HLA-DP1

除DP抗原外，其他HLA抗原相同照射處理第45頁,共58頁，2024年2月25日，星期天2.雙向MLC

遺傳型不同的兩個個體淋巴細胞在體外混合培養(yǎng)時，由于兩者HLA不同，能相互刺激導致對方淋巴細胞增殖，故稱雙向MLC。方法學評價：不能分型，但可全面地反應供-受雙方組織相容性。第46頁,共58頁，2024年2月25日，星期天三、分子生物學分型技術(一）基本技術1.限制性片斷長度多態(tài)性分析（restrictionfragmentlengthpolymorphism,

RFLP）2.PCR/SSP3.PCR-SSCP分型法4.序列特異性寡核苷酸-聚合酶鏈反應（PCR-sequencespecificoligonucleotide,PCR-SSO）5.基于序列的HLA分型法（sequence-basedHLAtyping,SBT）第47頁,共58頁，2024年2月25日，星期天芯片技術原理：PCR-SSO反向斑點或印漬法的微型化。(二）集成技術第48頁,共58頁，2024年2月25日，星期天（三）PCR-SSCP分型法原理：對ssDNA進行無變性劑的聚丙烯酰凝膠電泳，序列的差異可形成不同的空間構象而導致電泳遷移率的差異，如此可分辨出單一堿基的差異和檢測出DNA多態(tài)性或點突變。（單鏈非變性電泳遷移分析）第49頁,共58頁，2024年2月25日，星期天病例介紹一例鏈球群感染后腎炎、腎衰竭后腎臟移植。男，14歲。首診前3個月，感冒發(fā)燒病史。首次就診原因:頭痛，乏力，眼瞼浮腫。實驗室檢查：蛋白尿，尿紅細胞陽性?？寡装Y治療1周，稍好，恢復上學，正常飲食。2月后，惡心、乏力，眼瞼浮腫加重，24小時尿量減少，蛋白管型。住院治療2個月，腎臟衰竭加重，每周透析3到4次?；顧z見腎小球內CIC沉淀，抗人IgA、IgG陽性。建議：申請腎移植手術。親屬自愿做HLA配型，同時申請自無關人群尋找供體腎。第50頁,共58頁，2024年2月25日，星期天半年后分配到合適供體腎（無關人群）；檢查身體，符合手術要求，進行腎臟移植手術。術后臨床觀察并服用移植排斥抑制藥物，補充EPO。定期到醫(yī)院檢測血藥濃度，檢測免疫功能。（移植后8年后生存狀態(tài)良好，但長期服用抗移植排斥藥物。病例介紹一例鏈球群感染后腎炎、腎衰竭后腎臟移植。第51頁,共58頁，2024年2月25日，星期天腎臟移植前選擇供者的檢查項目：傳染性疾病病原學檢查

ABO血型配型

HLA配型符合要求供受雙方淋巴細胞混合培養(yǎng)陰性腎源選擇的原則：以ABO血型完全相同者為好，選擇最佳HLA配型的供者器官，供者無傳染性疾病。第52頁,共58頁，2024年2月25日，星期天移植后的臨床觀測:1.T細胞總數(shù)、CD4/CD8比值、IL-2及其受體的檢測，判斷排斥反應的發(fā)生和評估免疫抑制劑治療效果；2.必要時做腎組織活檢；3.血藥濃度檢測