DB37T 4711-2024海洋動(dòng)物資源線粒體DNA遺傳多樣性監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程

37CodeofpracticeformonitoringmitochondrialDNAgeneticdiversityofmarine 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定海洋動(dòng)物資源線粒體DNA遺傳多樣性監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程本文件確立了海洋動(dòng)物資源線粒體DNA遺傳多樣性監(jiān)測(cè)程序，規(guī)定了監(jiān)測(cè)方案設(shè)計(jì)、樣品采集、保GB/T12763.6海洋調(diào)查規(guī)范第6部分：海洋生GB/T18654.2養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗(yàn)第2部分：抽種內(nèi)不同群體之間或一個(gè)群體內(nèi)不同個(gè)體的遺傳變異4監(jiān)測(cè)程序海洋動(dòng)物資源線粒體DNA遺傳多樣性監(jiān)測(cè)程序包括監(jiān)測(cè)方案設(shè)計(jì)、樣品采集、保存與運(yùn)輸、樣品檢制、數(shù)據(jù)分析、監(jiān)測(cè)報(bào)告等。其中，對(duì)調(diào)查海域某種野生海洋動(dòng)物資源的遺傳多樣性監(jiān)測(cè)，宜每5年~a)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查采樣：按GB/T12763.6規(guī)定執(zhí)行。對(duì)海洋底移動(dòng)迅速的底棲動(dòng)物可設(shè)地籠誘捕。對(duì)游泳能力強(qiáng)的魚類、甲殼類等進(jìn)行拖網(wǎng)采c)對(duì)海洋保護(hù)動(dòng)物、珍稀瀕危生物實(shí)行非致死性采樣：●視監(jiān)測(cè)生物的具體情況，無(wú)菌操作剪取部分魚類鰭條組織約0.1g，或用無(wú)菌靜脈處抽取血液約0.5mL；采集的每批樣品分別填寫樣品采集記錄，格式參見附細(xì)胞色素氧化酶I（Cytochromeo錄B。酚-氯仿法提取DNA的步驟參見附錄C；用商品化試劑提取的DNA用洗脫液或滅菌雙蒸水溶解，取5μL經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳，檢查DNA質(zhì)量，電泳方法參見附錄D，或取適量DNA溶液用核酸定量分析儀測(cè)定，A260/A280比值為1.8～2.0，DNA濃度不低于50ng/引物宜引用已公開發(fā)表學(xué)術(shù)論文或研究報(bào)告，或在基因數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索目標(biāo)物行設(shè)計(jì)2對(duì)～3對(duì)，引物宜符合Tm值50℃~60℃、長(zhǎng)度18bp～24bp、G+C含量在40%～60%、PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度用合成的引物對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。按每對(duì)引物的Tm值設(shè)定退火溫度，按7.5.2進(jìn)行PCR。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%的瓊脂糖凝膠電泳后，選擇PCR產(chǎn)物條帶單一、清晰、且長(zhǎng)度與預(yù)期一致的引物，作為），對(duì)所有樣品進(jìn)行擴(kuò)增后，PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%的瓊脂糖凝膠電泳，選擇單一、清晰、且長(zhǎng)度與預(yù)期一致9數(shù)據(jù)分析數(shù)與序列長(zhǎng)度的比值）等遺傳多樣性數(shù)據(jù)。分析結(jié)果格式參見o現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查采樣：□定點(diǎn)；□地籠；□拖網(wǎng)□整體；□肌肉；□血液；□鰭條；□其他：□鮮活；□新鮮；□變質(zhì)□活體；□冷凍；□冰鮮；□常溫；□其他：h)核酸定量分析儀；C.10離心管開口放于潔凈的環(huán)境中，自然干燥15min～30min。50ng～100ngMgCl2檢測(cè)記錄海洋動(dòng)物