培養(yǎng)基的配制

關(guān)于培養(yǎng)基的配制

培養(yǎng)基(culturemedium)是指人工配制的、適合微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。自然界中微生物種類繁多，營(yíng)養(yǎng)類型多樣，加之實(shí)驗(yàn)和研究目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，不同種類的培養(yǎng)基一般都應(yīng)含有微生物生長(zhǎng)所需的碳源、氮源、能源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子和水六大營(yíng)養(yǎng)要素，且各成分比例應(yīng)合適。為了滿足微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的要求，還必須控制培養(yǎng)基合適的pH。實(shí)驗(yàn)原理第2頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏為微生物提供碳源、能源、磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供氮源和維生素，而NaCL提供無(wú)機(jī)鹽。瓊脂在常用濃度下96℃時(shí)溶化，在40℃時(shí)凝固，通常不被微生物分解利用。固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和氣溫的不同而有所不同。

第3頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天常用培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基廣泛用于細(xì)菌的培養(yǎng)；高氏一號(hào)培養(yǎng)基用于培養(yǎng)放線菌；馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基被廣泛用于培養(yǎng)霉菌。常用凝固劑是瓊脂，固體培養(yǎng)基瓊脂加量通常為1.5%-2%；半固體培養(yǎng)基瓊脂加量為0.5%-0.8%。第4頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)分組安排4-5人一組配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基400mL

馬鈴薯糖瓊脂培養(yǎng)基200mL

淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏培養(yǎng)基）200mL

平皿30個(gè)

99mL無(wú)菌水裝三角瓶6瓶

9mL無(wú)菌水試管裝12支

1mL吸管15支牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基斜面5支第5頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方：牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5g瓊脂15-20g水1000mlpH7.4-7.6第6頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天

淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏培養(yǎng)基）

：可溶性淀粉20g硝酸鉀1g磷酸氫二鉀0.5gNaCl0.5g硫酸鎂0.5g硫酸亞鐵0.01克

瓊脂15-20g水1000mlpH7.2-7.4第7頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基：把馬鈴薯洗凈去皮，取200克切成小塊，加水1000毫升，煮沸半小時(shí)后，補(bǔ)足水分。在濾液中加入15克瓊脂，煮沸溶解后加蔗糖20克補(bǔ)足水分

pH值調(diào)到7.2～7.4

第8頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天1、稱量及溶化2、調(diào)pH3、加瓊脂、溶化、定容、（過(guò)濾）4、分裝、加塞、包扎5、滅菌6、擺斜面操作步驟第9頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天

稱量與溶化：注意：1）牛肉膏的稱?。河貌ＡО粽喝∵m量牛肉膏，抹于稱量紙上，勿取過(guò)量，不足時(shí)，再蘸取少量，逐步添加；然后將牛肉膏連同稱量紙放入水中，稍等片刻牛肉膏即從稱量紙上脫落，用玻璃棒將紙撈出即可。操作步驟(continued)第10頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天

稱量與溶化：注意：2）蛋白胨很易吸濕，在稱取時(shí)動(dòng)作要迅速。另外，稱藥品時(shí)嚴(yán)防藥品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈，擦干，再稱取另一藥品．瓶蓋也不要蓋錯(cuò)。操作步驟(continued)第11頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天調(diào)pH值：在未調(diào)pH值前，先用精密pH試紙測(cè)量培養(yǎng)基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入1mol/LNaOH邊加邊攪拌，并隨時(shí)用pH試紙測(cè)其pH，直至pH達(dá)要求。反之，用1mol/LHCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。

操作步驟(continued)第12頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天加瓊脂、溶化、定容、（過(guò)濾）

瓊脂一般應(yīng)在調(diào)好了pH后加入，瓊脂的加入不會(huì)影響培養(yǎng)基的pH。

瓊脂加入后應(yīng)煮沸數(shù)分鐘，以使其完全溶化，否則易出現(xiàn)分布不均，導(dǎo)致部分斜面不凝固或過(guò)軟，另外部分則瓊脂過(guò)多。加熱過(guò)程中因水分蒸發(fā)而可能使培養(yǎng)基體積減小，應(yīng)補(bǔ)充水分至所需量。操作步驟(continued)第13頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天分裝：1）裝量：液體——試管高度的1/4左右固體——試管高度的1/5，滅菌后擺斜面半固體——一般為試管高度的1/3，滅菌后垂直放置操作步驟(continued)第14頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天棉塞制作方法：加塞：棉塞或硅膠塞作用：防止外界微生物進(jìn)入培養(yǎng)基內(nèi)造成污染，并保證有良好的通氣性能。第15頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天包扎：

加塞后，試管通常每7支一起，包上一層牛皮紙或兩層報(bào)紙，用線繩扎緊。三角瓶加塞后也用牛皮紙包扎。

以活結(jié)形式扎緊，以便使用時(shí)容易解開(kāi)。

用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱、配制日期、配制人或?qū)嶒?yàn)組。操作步驟(continued)滅菌時(shí)包牛皮紙第16頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天滅菌：

培養(yǎng)基滅菌一般采用壓力蒸汽滅菌

通常滅菌條件為1.05kg/cm2,121℃滅菌20分鐘；含糖量高的培養(yǎng)基，則為0.56kg/cm2,115℃滅菌30分鐘。操作步驟(continued)第17頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天擺斜面：

成扎擺放，不需將每支試管單獨(dú)擺放

最好待培養(yǎng)基冷至60℃時(shí)擺斜面，以免形成大量冷凝水無(wú)菌檢查：

將滅菌的培養(yǎng)基放在37℃溫箱中培養(yǎng)24-48小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。第18頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天二消毒與滅菌第19頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天

加熱法干熱法濕熱法火焰燒灼熱空氣滅菌壓力蒸汽滅菌間歇滅菌煮沸滅菌巴斯德消毒實(shí)驗(yàn)原理1、了解掌握常用消毒、滅菌方法的原理。2、學(xué)習(xí)掌握干熱滅菌和壓力蒸汽滅菌操作步驟。實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡?0頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天

濾膜過(guò)濾器的濾膜是一種多孔纖維素，孔徑一般為0.45um，過(guò)濾時(shí)，液體和小分子物質(zhì)通過(guò)，細(xì)菌被截流在濾膜上。過(guò)濾除菌——

許多材料，如血清、糖溶液等，用一般加熱消毒滅菌方法，均會(huì)被熱破壞，應(yīng)采用過(guò)濾除菌。應(yīng)用最廣的過(guò)濾器有蔡氏(Seitz)過(guò)濾器和膜過(guò)濾器。第21頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天紫外線滅菌——

紫外線波長(zhǎng)在200-300nm,具有殺菌作用，其中以265-266nm殺菌力最強(qiáng)。無(wú)菌室或無(wú)菌接種箱空氣可用紫外線燈照射滅菌。實(shí)驗(yàn)原理(continued)

第22頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天干熱滅菌電烤箱實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)步驟

1、干熱滅菌

2、壓力蒸汽滅菌第23頁(yè),共27頁(yè)，2024年2月25日，星期天干熱滅菌1、裝入待滅菌物品2、升溫接通電源，加熱升溫至160-170℃。3、恒溫保持160-170℃2小時(shí)。4、降溫切斷電源，自然降溫。5、開(kāi)箱取物待烤箱溫度降到70℃以下以后，方可打開(kāi)箱門，取出物品。箱內(nèi)溫度高于70℃，切勿自行打開(kāi)箱門，以免玻璃器皿炸裂。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)步驟(co