艾滋病梅毒乙肝實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)

艾滋病梅毒乙肝實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)艾滋病抗體檢測(cè)及

樣品處理實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理生物安全質(zhì)量控制梅毒乙肝

檢測(cè)要點(diǎn)第2頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天

艾滋病抗體檢測(cè)及樣品處理

一、HIV抗體檢測(cè)篩查方法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)快速檢測(cè)（RT）（建議配備合格的快速檢測(cè)試劑，灰區(qū)。）第3頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、篩查程序初篩和復(fù)檢流程（圖1）第4頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天第5頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、篩查試驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告（建議用修改后附表3）（例）HIV抗體篩查試驗(yàn)用附表1進(jìn)行報(bào)告，陰性反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體陰性（-）”；陽(yáng)性反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體待復(fù)檢”。第6頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、HIV感染產(chǎn)婦所生兒童HIV抗體檢測(cè)策略及流程1、適用范圍HIV感染產(chǎn)婦所生嬰幼兒；已滿(mǎn)18個(gè)月的嬰幼兒，其母親HIV感染狀態(tài)不詳，兒童出現(xiàn)HIV相關(guān)臨床表現(xiàn)，臨床懷疑HIV感染的兒童。第7頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、檢測(cè)程序第8頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天五、樣品的處理1樣品的保存用于抗體和抗原檢測(cè)的血清或血漿樣品，短期（1周）內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可存放于2～8℃，一周以上應(yīng)存放于-20℃以下。2.樣品的運(yùn)送（例）（1）應(yīng)符合生物安全要求；(2)應(yīng)采用三層容器對(duì)樣品進(jìn)行包裝。第9頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一層容器：直接裝樣品，應(yīng)防滲漏。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)。在試管的周?chē)鷳?yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。第二層容器：容納并保護(hù)第一層容器，可以裝若干個(gè)第一層容器。要求不易破碎、帶蓋、防滲漏、容器的材料要易于消毒處理。第三層容器：容納并保護(hù)第二層容器的運(yùn)輸用外層包裝箱。外面要貼上醒目的標(biāo)簽、聯(lián)系方式，還應(yīng)易于消毒。第10頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天第11頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天(3)用于抗體檢測(cè)的血清和血漿樣品應(yīng)在凍存條件下運(yùn)送。第12頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天質(zhì)量控制

一、艾滋病抗體檢測(cè)的統(tǒng)計(jì)學(xué)室內(nèi)質(zhì)量控制1、試劑盒內(nèi)部對(duì)照即試劑盒提供的陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清。用于判斷實(shí)驗(yàn)的有效性，不能作為室內(nèi)質(zhì)控品使用，內(nèi)部對(duì)照結(jié)果無(wú)效，必須重新試驗(yàn)。第13頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、室內(nèi)質(zhì)控品為非試劑盒組份的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測(cè)的重復(fù)性而設(shè)置的，包括強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性和陰性質(zhì)控血清。也可以只設(shè)置一個(gè)弱陽(yáng)性質(zhì)控，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2～3倍為宜。作用：判斷該批臨床樣品檢測(cè)的有效性，每次實(shí)驗(yàn)必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，其結(jié)果無(wú)效，必須重新試驗(yàn)。第14頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、統(tǒng)計(jì)室內(nèi)質(zhì)控的主要表示方法—建立質(zhì)控圖最常用的質(zhì)控圖是Levey-Jennings質(zhì)控圖，下面以ELISA方法檢測(cè)HIV抗體為例，描述建立質(zhì)控圖步驟：第15頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天第16頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天第17頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天第18頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、繪制質(zhì)控圖（a）在常規(guī)條件下，對(duì)同一批血清連續(xù)測(cè)定20次（天）或以上，獲得一組S/CO值，求均數(shù)（

）和標(biāo)準(zhǔn)差（s）,超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。（b）將均值（

）和標(biāo)準(zhǔn)差（s）分別在質(zhì)控框架圖中標(biāo)示出來(lái)。以S/CO值作縱座標(biāo)（Y軸），每一批次試驗(yàn)作橫座標(biāo)（x軸），繪制質(zhì)控圖。第19頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天（c）從第21次起，將每次質(zhì)控血清的檢測(cè)結(jié)果依次點(diǎn)入該質(zhì)控框架圖中，檢驗(yàn)進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)。第20頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天3、質(zhì)控規(guī)則及其使用質(zhì)控規(guī)則的使用應(yīng)檢出隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差，目前有許多質(zhì)控規(guī)則，常用的是12S和13S規(guī)則。（a）告警（12S）：當(dāng)外部質(zhì)控品的S/CO值超出+2s范圍時(shí)，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測(cè)需要進(jìn)一步觀察。若將12S做失控標(biāo)準(zhǔn)，有較高的假失控概率，所以一般不采用。第21頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天（b）失控（13S）：當(dāng)外部質(zhì)控品的S/CO值超出+3s范圍時(shí)，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差或外部質(zhì)控品穩(wěn)定性下降所致。（c）漂移：連續(xù)幾次（3～5次）外部質(zhì)控品的S/CO值都落在均值的一側(cè)則稱(chēng)為漂移，提示實(shí)驗(yàn)條件發(fā)生了較大的變化。（d）趨勢(shì)：連續(xù)幾次（5～7次）外部質(zhì)控品的S/CO值幾乎按一個(gè)方向分布時(shí)稱(chēng)為趨勢(shì)，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。第22頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天艾滋病實(shí)驗(yàn)室生物安全

一、HIV的生物危害第一類(lèi)、第二類(lèi)病原微生物統(tǒng)稱(chēng)為高致病性病原微生物。人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）屬第二類(lèi)病原微生物，是高致病性病原微生物。第23頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、HIV相關(guān)檢測(cè)的生物安全級(jí)別HIV抗體檢測(cè)應(yīng)在符合Ⅱ級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）要求的艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。第24頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、生物安全保證措施1、建立安全制度艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立下列安全制度(1)實(shí)驗(yàn)室的安全工作制度或安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序（S-SOP）。(2)意外事故處理預(yù)案，主要是生物安全意外事故。(3)

信息安全及保密制度：（例）

第25頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、培訓(xùn)和管理3、個(gè)人保健和防護(hù)4、安全操作5、實(shí)驗(yàn)室的清潔和消毒工作完畢應(yīng)對(duì)工作臺(tái)面消毒，推薦用0.1～0.2%的次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥20min以上；操作過(guò)程中如有樣品、檢測(cè)試劑外濺，應(yīng)及時(shí)消毒。第26頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天如有大量高濃度的傳染性液體濺出，在清潔之前應(yīng)先用1%的次氯酸鈉溶液浸泡，然后戴上手套擦凈。離心樣品時(shí)要使用密閉的罐和密封頭，防止離心時(shí)液體溢出或在超/高速離心時(shí)形成氣溶膠。第27頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、污染物處理1、艾滋病實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)生的所有廢棄物，包括不再需要的樣品、培養(yǎng)物和其它物品，均應(yīng)視為感染性廢棄物，應(yīng)置于專(zhuān)用的密封防漏容器中，安全運(yùn)至消毒室，經(jīng)高壓消毒后再進(jìn)行處理或廢棄。第28頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用的消毒方法（1）物理消毒方法a高壓蒸汽消毒，121℃，保持15～20min;b干燥空氣烘箱消毒（干烤消毒），140℃，保持2～3h。（2）

化學(xué)消毒方法

含氯消毒劑（次氯酸鈉，含有效氯2000～5000mg/L）、75%乙醇、2%戊二醛第29頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天（3）艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室物品常用的消毒方法a、廢棄物缸：5000mg/L次氯酸鈉。b、生物安全柜工作臺(tái)面和儀器表面：75%乙醇。c、溢出物：5000mg/L次氯酸鈉。d、污染的臺(tái)面和器具：2000mg/L次氯酸鈉,也可以用過(guò)氧化氫或過(guò)氧乙酸。器械可用2%戊二醛消毒。第30頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理

一、范圍艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理包括質(zhì)量保證、質(zhì)量控制和質(zhì)量評(píng)價(jià)第31頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、質(zhì)量保證1、人員培訓(xùn)檢測(cè)技術(shù)人員需經(jīng)過(guò)上崗培訓(xùn)和在崗持續(xù)培訓(xùn)。篩查實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員至少每2年1次。第32頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、環(huán)境條件艾滋病抗體篩查實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及其建筑、設(shè)施、設(shè)備必須符合《全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作管理辦法》的要求。HCV，HBV及梅毒等血清學(xué)檢測(cè)在滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)室管理要求和保證生物安全的條件下，可以與HIV檢測(cè)共享空間和設(shè)備，應(yīng)避免交叉污染。第33頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天3、樣品采集、運(yùn)送和處理4、檢測(cè)方法和試劑的選擇5、設(shè)備維護(hù)與校準(zhǔn)6、實(shí)驗(yàn)耗材7、文件和文件管理第34頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天8、標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）篩查實(shí)驗(yàn)室SOP文件包括：（1）樣品的接收、登記、處理、保存和運(yùn)輸；（2）檢測(cè)方法和步驟；（3）試劑使用和保存；（4）儀器的使用維護(hù)和校準(zhǔn)；（5）質(zhì)量控制要求及程序；（6）結(jié)果解釋與報(bào)告；（7）保密程序；（8）實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)、相關(guān)文件記錄與保存；（9）不確定樣品追蹤和處理；（10）實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)及實(shí)驗(yàn)室的清理和消毒；第35頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天（11）標(biāo)題和編號(hào)；（12）編寫(xiě)和修訂日期；（13）編寫(xiě)和修訂人員姓名；（14）方法、目的和應(yīng)用范圍；（15）檢測(cè)設(shè)備；（16）試劑及有效期；（17）安全防護(hù)相關(guān)步驟；（18）結(jié)果的解釋和報(bào)告；（19）附錄，包括相關(guān)的附加文件如標(biāo)準(zhǔn)表格、設(shè)備和試劑盒說(shuō)明書(shū)等。第36頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天9、實(shí)驗(yàn)原始記錄表（附表4）10、結(jié)果報(bào)告11、樣品登記和保存第37頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、質(zhì)量控制四、質(zhì)量評(píng)價(jià)包括內(nèi)部質(zhì)量評(píng)價(jià)和外部質(zhì)量評(píng)價(jià)。1、內(nèi)部質(zhì)量評(píng)價(jià)2、外部質(zhì)量評(píng)價(jià)篩查實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加省級(jí)職能工作考核和PT。第38頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天3、職能工作考核現(xiàn)場(chǎng)評(píng)價(jià)內(nèi)容，篩查實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)場(chǎng)評(píng)價(jià)應(yīng)包括：實(shí)驗(yàn)室人員組成及其職責(zé)分工；實(shí)驗(yàn)室分區(qū)、布局、恒溫設(shè)施；儀器設(shè)備及其使用、校準(zhǔn)記錄；質(zhì)量保證文件、實(shí)驗(yàn)室SOP文件及原始記錄；實(shí)驗(yàn)室的安全防護(hù)措施，安全用品及安全規(guī)程；第39頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天消毒與污物處理方法及設(shè)施；HIV檢測(cè)資料數(shù)據(jù)庫(kù)的建設(shè)、存檔、備份、安全和保密；樣品保存和安全；開(kāi)展的HIV檢測(cè)項(xiàng)目和檢測(cè)試劑等。第40頁(yè),共42頁(yè)，2024年2月25日，星期天梅毒、乙肝檢測(cè)要點(diǎn)

一、梅毒螺旋體感染人體后出現(xiàn)兩種抗體，特異體抗體和非特異性抗體。特異性抗體(TPHA)：為lgM