《人載脂蛋白AⅠ羊多抗血清制備技術(shù)規(guī)程》

ICS65.020.20

B41

DB32

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/TXXXX-2022

人載脂蛋白AⅠ羊多抗血清制備技術(shù)規(guī)程

Technicalregulationsforproductionofsheepanti-human

apolipoproteinAⅠpolyclonalantiserum

江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB32/TXXXX-2022

人載脂蛋白AⅠ羊多抗血清制備技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件運(yùn)用于人載脂蛋白AⅠ羊多抗血清制備中羊品種選擇和飼養(yǎng)要求、免疫佐劑

選用、抗原乳化、抗原接種、抗體效價(jià)評估、抗血清制備的步驟和方法。

2規(guī)范性引用文件

本文件無規(guī)范性引用文件。

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

載脂蛋白AⅠApolipoproteinAⅠ

用于運(yùn)輸血液中脂類的高密度主要載脂蛋白,A1是載脂蛋白A族中最多的一種組分，

約占HDL顆粒的65%，主要在肝臟、部分在小腸合成。

4羊的選擇和飼養(yǎng)要求

選用體重30kg—40kg生長發(fā)育良好、10月齡左右的健康羊。采用群養(yǎng)放牧，適當(dāng)補(bǔ)飼

方式，每天早晚觀察羊的健康狀況。

5抗原要求

人血清通過優(yōu)化PEG沉淀、離子交換吸附的方法，純度達(dá)96%。

6免疫佐劑選用

首次免疫佐劑采用弗氏完全佐劑，從第二次免疫開始，采用弗氏不完全佐劑。

7抗原乳化

采用高速剪切法乳化抗原。乳化容器需放置在降溫夾套中，將佐劑按需要量置于乳化

容器中，用吸管以60滴/min的速度緩慢加入載脂蛋白AⅠ抗原溶液，用漩渦混合器以1.5萬

1

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rmp/min混合均勻，抗原溶液全部加完后，再持續(xù)混合15min。

8抗原接種免疫劑量和部位

每只羊免疫抗原劑量為1mg，抗原濃度為1mg/ml,為各部位平均接種。不同免疫次數(shù)

間的間隔天數(shù)和部位，見表1。

表1免疫劑量和部位

間隔天數(shù)

次數(shù)免疫接種部位

（d）

第1次0腹股溝、肘部、耳后、額下、背側(cè)和足窩

腹股溝、肘部、耳后、額下、背側(cè)和腹股溝

第2次15

淋巴結(jié)點(diǎn)

第3~9次9腹股溝、肘部、耳后、額下和背側(cè)

9抗體效價(jià)評估

在第7次免疫后動脈采血檢測抗體水平，采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行效價(jià)測定,效價(jià)不低于1：

16，可以判定為合格，可以采血。

10抗血清制備

10.1采血

在檢測抗體水平達(dá)到效價(jià)要求后，采用動脈一次性采血。血液用250mL玻璃瓶收集，

血液占玻璃瓶的1/5。

10.2血清制備

把收集好血液的玻璃瓶，放在37℃恒溫水浴鍋中1h后，把玻璃瓶從水浴鍋中取出；

再把血清從玻璃瓶中吸出；用低速離心機(jī)4500rmp/min，離心15min，取上清液，顏色為

乳白色或微黃色，去掉沉淀物雜質(zhì)。

10.3外觀質(zhì)量

血清應(yīng)呈黃色或微紅色血清狀液體，允許少量的絮狀物或沉淀。

10.4血清保存

2

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血清用滅菌處理的塑料瓶保存。在-20℃保存3年，或-70℃保存6年。

10.5記錄

對生產(chǎn)全過程、血清保存和使用情況記錄、歸檔。

__________________________

3

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前言

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)

則》的規(guī)定起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。

本文件由江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所提出。

本文件由江蘇省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。

本文件起草單位：江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所、句容市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局、江蘇大學(xué)、

江蘇省農(nóng)科院。

本文件主要起草人：徐志偉、姚明霞、徐一然、溫小林、鄧碧華、于建寧、李云、胡

強(qiáng)、張兆麗、譚圣偉、盛媛媛。

I

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人載脂蛋白AⅠ羊多抗血清制備技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件運(yùn)用于人載脂蛋白AⅠ羊多抗血清制備中羊品種選擇和飼養(yǎng)要求、免疫佐劑

選用、抗原乳化、抗原接種、抗體效價(jià)評估、抗血清制備的步驟和方法。

2規(guī)范性引用文件

本文件無規(guī)范性引用文件。

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

載脂蛋白AⅠApolipoproteinAⅠ

用于運(yùn)輸血液中脂類的高密度主要載脂蛋白,A1是載脂蛋白A族中最多的一種組分，

約占HDL顆粒的65%，主要在肝臟、部分在小腸合成。

4羊的選擇和飼養(yǎng)要求

選用體重30kg—40kg生長發(fā)育良好、10月齡左右的健康羊。采用群養(yǎng)放牧，適當(dāng)補(bǔ)飼

方式，每天早晚觀察羊的健康狀況。

5抗原要求

人血清通過優(yōu)化PEG沉淀、離子交換吸附的方法，純度達(dá)96%。

6免疫佐劑選用

首次免疫佐劑采用弗氏完全佐劑，從第二次免疫開始，采用弗氏不完全佐劑。

7抗原乳化

采用高速剪切法乳化抗原。乳化容器需放置在降溫夾套中，將佐劑按需要量置于乳化

容器中，用吸管以60滴/min的速度緩慢加入載脂蛋白AⅠ抗原溶液，用漩渦混合器以1.5萬

1

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rmp/min混合均勻，抗原溶液全部加完后，再持續(xù)混合15min。

8抗原接種免疫劑量和部位

每只羊免疫抗原劑量為1mg，抗原濃度為1mg/ml,為各部位平均接種。不同免疫次數(shù)

間的間隔天數(shù)和部位，見表1。

表1免疫劑量和部位

間隔天數(shù)

次數(shù)免疫接種部位

（d）

第1次0腹股溝、肘部、耳后、額下、背側(cè)和足窩

腹股溝、肘部、耳后、額下、背側(cè)和腹股溝

第2次15

淋巴結(jié)點(diǎn)

第3~9次9腹股溝、肘部、耳后、額下和背側(cè)

9抗體效價(jià)評估

在第7次免疫后動脈采血檢測抗體水平，采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行效價(jià)測定,效價(jià)不低于1：

16，可以判定為合格，可以采血。

10抗血清制備

10.1采血

在檢測抗體水平達(dá)到效價(jià)要求后，采用動脈一次性采血。血液用250mL玻璃瓶收集，

血液占玻璃瓶的1/5。

10.2血清制備

把收集好血液的玻璃瓶，放在37℃恒溫水浴鍋中1h后，把玻璃瓶從水浴鍋中取出；

再把血清從玻璃瓶中吸出；用低速離心機(jī)4500rmp/min，離心15min，取上清液，顏色為

乳白色或微黃色，去掉沉淀物雜質(zhì)。

10.3外觀質(zhì)量

血清應(yīng)呈黃色或微紅色血清狀液體，允許少量的絮狀物或沉淀。

10.4血清保存

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血清用滅菌處理的塑料瓶保存。在-20℃保存3