第8講實(shí)驗(yàn)3薄層板的制備及活化

天然產(chǎn)物化學(xué)生物技術(shù)及應(yīng)用專業(yè)1實(shí)驗(yàn)三薄層板的制備及活化

——硅膠板2薄層色譜簡(jiǎn)介薄層色譜中的吸附劑是鋪在玻璃、塑料或金屬片或薄板上的較薄的、均勻的一層細(xì)粉狀物質(zhì)，因支持劑的種類、制備方法和選用溶劑的不同，可按吸附、分配或二者結(jié)合的方式達(dá)到分離化合物的目的。TLC中涂布的物質(zhì)如硅膠、氧化鋁、聚酰胺等。硅膠是最常用的薄層色譜吸附劑。3可以通過比較斑點(diǎn)的Rf值，或?qū)⑽粗獦悠放c對(duì)照品在同一板上展開至同樣高度，對(duì)樣品進(jìn)行初步的鑒定。還可通過比較可見斑點(diǎn)的大小進(jìn)行半定量的判斷。還可以通過光密度測(cè)量法實(shí)現(xiàn)定量測(cè)定。4一、目的要求1．掌握薄層板的制備及薄層層析的操作方法；2．掌握吸附劑活度測(cè)定的原理及方法；3．會(huì)應(yīng)用薄層層析法檢測(cè)識(shí)中草藥化學(xué)成分。5二、薄層板的制備1．不加粘合劑的薄層涂布法（1）氧化鋁薄層（2）纖維素薄層（3）聚酰胺薄層2．加粘合劑薄層的涂布法（1）硅膠G薄層（2）硅膠（H）羧甲基纖維鈉（CMC-Na）薄層6（1）氧化鋁薄層將吸附劑置于薄層涂布器中，調(diào)節(jié)涂布器的高度，向前推動(dòng)，即得均勻薄層。本實(shí)驗(yàn)主要用下述簡(jiǎn)易操作涂布薄層，取表面光滑，直徑統(tǒng)一的玻璃一支，依據(jù)所制備薄層的寬度、厚度要求，在玻璃棒兩端套上厚度為0.3~1mm的塑料圈或金屬環(huán)，并在玻璃棒一端一定距離處套上較厚的塑料圈或金屬環(huán)，以使玻璃棒向前推動(dòng)時(shí)能保持平行方向，操作時(shí)，將氧化鋁粉均均地鋪在玻璃板上，勻速向前推動(dòng)。7（2）纖維素薄層

一般取纖維素粉1份加水約5份，在燒杯中混合均勻后，倒在玻璃板上，輕輕振動(dòng)，使涂布均勻，水平放置，待水分蒸發(fā)至近干，于100±2℃干燥30~60分鐘即得。8（3）聚酰胺薄層取錦綸絲經(jīng)一系列加工使其完全溶解成透明膠狀溶液。將此溶液適量倒在水平放置的洗凈的玻璃片上，并自然向周圍推勻，厚度約0.3mm,薄層太厚時(shí)，干后會(huì)裂開。完全固化后變不透明白色，再放數(shù)小時(shí)后，泡在流水中洗去甲酸，先在空氣中晾干，后在烘箱中0℃恒溫加熱活化15分鐘，冷后置干燥器中貯存?zhèn)溆谩?（1）硅膠G薄層取硅膠G或硅膠GF一份，置燒杯中加水約3份混合均勻（加水量根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整），放置片刻；隨即用藥匙取一定量，分別倒在一定大小的玻璃片上（或倒入涂布器中，推動(dòng)涂布），均勻涂布成0.25~0.5mm厚度，輕輕振動(dòng)玻璃板，使薄層面平整均勻；10在水平位置放置，待薄層發(fā)白近干，于烘箱中105℃活化0.5~1小時(shí)，冷后貯于干燥器內(nèi)備用?；罨瘻囟群蜁r(shí)間可依需要調(diào)整，一般檢識(shí)水溶性成分或一些極性大的成分時(shí)，所用薄層板只在空氣中自然干燥，不經(jīng)活化即可貯存?zhèn)溆谩?1物質(zhì)之所以能在吸附劑（以硅膠、氧化鋁或正相鍵合硅膠為例）的薄層上分離，是因?yàn)槲絼┑谋砻婕捌淇紫兜谋砻娲嬖谠S多活性點(diǎn)，被吸附物質(zhì)（極性或可極化的物質(zhì)）的量及被吸附的牢固程度在其它條件一定的條件下取決于活性點(diǎn)的強(qiáng)度（單位面積的表面能量）及數(shù)目（單位質(zhì)量的表面積），單位質(zhì)量吸附劑所含活性點(diǎn)的數(shù)目越多、活性點(diǎn)的強(qiáng)度越大，則吸附劑的活度越高，即，對(duì)物質(zhì)（極性或可極化的物質(zhì)）的吸附能力越強(qiáng)，被吸附物質(zhì)的Rf值就越小。12當(dāng)此類吸附劑的含水量增加時(shí)，吸附劑的活性點(diǎn)被水中羥基占據(jù)的數(shù)目增多，因此，自由活性點(diǎn)減少，吸附劑的活度變小，吸附力也變小，于是被吸附物質(zhì)的Rf就變大。因此,為了使薄層板的水分含量相對(duì)一致,使用對(duì)薄板進(jìn)行活化可以使Rf值具有較好的重現(xiàn)性。13（2）硅膠(H)CMC-Na薄層取羧甲基纖維素（CMC-Na）

0.2g，溶于25ml水中，在水浴上加熱攪拌使完全溶解，倒入燒杯中，加薄層層析用硅膠（顆粒度10~40μm的約6~8g）。混成均勻的稀糊，按照硅膠G薄層涂布法制備薄層;（輕搖均勻涂布）14或取0.8%羧甲基纖維納10ml，倒入廣口瓶（高約10~12cm）中，然后逐步加入薄層層析用硅膠3.3克，不斷振搖成均勻的稀糊；把兩塊載玻片面對(duì)面結(jié)合在一起，這樣每片只有一面與硅膠糊接觸，使薄片浸入硅膠稀糊中，然后慢慢取出，分開二塊薄片，將未粘附硅膠糊的那一面水平放在一張清潔的紙上，讓其自然陰干，100℃下烘30分鐘。冷后于干燥器內(nèi)備用。未消耗的硅膠稀糊可貯存在廣口瓶?jī)?nèi)，以供再用。15三、儀器和試劑玻璃板（5×10cm或2.5×7.5cm，潔凈且干燥）薄層色譜用硅膠H0.8%羧甲基纖維素鈉水溶液層析缸、點(diǎn)樣毛細(xì)管混合染料：含二甲黃、蘇丹紅、靛酚藍(lán)各0.40mg/ml。展開劑：石油醚（A.R.）或苯（A.R.）16四、實(shí)驗(yàn)步驟把玻璃板清洗干凈并烘干；取羧甲基纖維素（CMC-Na）

0.2g，溶于25ml水中，在水浴上加熱攪拌使完全溶解，在三角燒瓶中把一份硅膠H和三份CMC-Na溶液（0.8%）混合，并用力振搖至少30秒。（混合均勻）17將混合好的溶液傾倒在玻璃板上，輕輕振動(dòng)，使涂布均勻，水平放置。鋪好的板靜置5分鐘，然后把它們面朝上移至一個(gè)水平的平面上，陰干。把陰干后的板在105℃的烘箱中烘30分鐘?！罨?。待板涼至室溫后，置干燥器中保存18關(guān)于配制CMC-Na：先將稱好的CMC-Na加入所需水量的8/10，讓其充分溶漲后,再加熱煮沸,然后將剩余水慢慢加入.這樣在煮沸過程中不易形成顆粒,煮沸時(shí)間短.溶液的濃度0.3-0.8%比較合適，實(shí)際操作中0.4％～0.5％最為實(shí)用，濃度高：將來顯色時(shí)如有加熱過程板子容易發(fā)黑；濃度低：鋪的板子不結(jié)實(shí)，易掉渣，不易保存，點(diǎn)樣時(shí)易出洞。19五、硅膠活度的測(cè)定一般選用三種染料的薄層層析法進(jìn)行測(cè)定。歐洲藥典1969年記載用0.01%二甲基黃、蘇丹紅、靛酚藍(lán)的苯溶液各10μl點(diǎn)滴于硅膠G或硅膠H薄層上，以苯為展開劑，展開10cm（約20分鐘），三種染料應(yīng)明顯分離；20點(diǎn)樣與展開：取薄層板一塊，在距板的一端2cm處用鉛筆輕輕劃上起始線并在距起始線10cm處劃出前沿線。在起始線上劃上2-3個(gè)點(diǎn)樣點(diǎn)，每點(diǎn)間隔2cm，兩側(cè)點(diǎn)距邊緣2cm。用內(nèi)徑約1mm的平口毛細(xì)管輕輕點(diǎn)上混合染料溶液，邊點(diǎn)邊用冷風(fēng)吹，原點(diǎn)直徑應(yīng)不超過2~3mm。21揮干溶劑，將薄層板置于放有苯的層析缸中，展開至前沿線時(shí)，取出，揮干溶劑，劃出實(shí)際前沿線。觀察斑點(diǎn)的位置，測(cè)量計(jì)算出二甲黃、蘇丹紅、靛酚藍(lán)的Rf值，判斷活度。（相關(guān)活度級(jí)別可查詢有關(guān)資料）22苯展開則應(yīng)分成三個(gè)斑點(diǎn)，合格的硅膠粘合薄層，其Rf值分別為：染料名稱Rf值(cm)活度級(jí)別水份含量二甲黃0.58±5%Ⅱ~Ⅲ級(jí)5%~15%蘇丹紅0.38±5%靛酚藍(lán)0.08±5%23如Rf值＜標(biāo)準(zhǔn)值，表明硅膠的含水量?。ㄐ迈r活化的硅膠板），吸附能力強(qiáng)；如Rf值＞標(biāo)準(zhǔn)值，表明硅膠的含水量大（暴露在空氣中時(shí)間較長(zhǎng)的硅膠板），吸附能力弱，活度級(jí)別為＞Ⅲ級(jí)。24靛酚藍(lán)斑點(diǎn)接近于起始線；二甲基黃斑點(diǎn)在薄層的當(dāng)中；蘇丹紅斑點(diǎn)位于兩點(diǎn)之間，則認(rèn)為薄層板活性符合要求。點(diǎn)樣點(diǎn)2526國內(nèi)青島海洋化工廠出售薄層層析用的硅膠在吸附劑名稱之后加幾個(gè)字標(biāo)明的意思是：硅膠G（G是Gypsum石膏的縮寫。表示加了石膏），硅膠H（