細(xì)胞載體指南┃一般人我不告訴玻璃罐里微載體培養(yǎng)細(xì)胞的秘訣

第第頁(yè)細(xì)胞載體指南┃一般人我不告知，玻璃罐里微載體培育細(xì)胞的秘訣玻璃罐是試驗(yàn)室常用的懸浮培育設(shè)備之一，基于貼壁細(xì)胞，球狀微載體目前已成功實(shí)現(xiàn)從2D培育進(jìn)入3D培育的工藝，充足讓細(xì)胞貼附在載體上，使載體以懸浮培育的形式進(jìn)行細(xì)胞擴(kuò)增。但屏幕前的你是不是會(huì)碰到這樣的問(wèn)題，用微載體在既有玻璃罐中進(jìn)行細(xì)胞培育，顯現(xiàn)了如:微載體分層，細(xì)胞貼附生長(zhǎng)不均勻，細(xì)胞密度增殖效果差等各類問(wèn)題？假如這些問(wèn)題還在困擾你，今日我們帶來(lái)的微載體X玻璃罐的培育細(xì)胞四大秘訣，不僅能解決你的困擾，還能幫你成為細(xì)分領(lǐng)域的細(xì)胞培育小能手！下劃看重點(diǎn)秘訣一：玻璃罐構(gòu)造的訣竅傳統(tǒng)的玻璃罐重要以培育懸浮細(xì)胞為主，它們未必可以直接拿來(lái)使用微載體的培育工藝。不合適的罐體及構(gòu)造極有可能導(dǎo)致微載體在攪拌懸浮時(shí)分層。就有可能會(huì)遭逢仿佛尷尬：轉(zhuǎn)速小了，微載體不能均勻的全部分散在培育基中，轉(zhuǎn)速大了，細(xì)胞又不能很好的貼附和生長(zhǎng)？那是由于罐體尺寸和槳葉大小需要匹配并充足不同培育體積和載體濃度，幫忙微載體能夠在合適的轉(zhuǎn)速下均勻分散，不顯現(xiàn)分層的現(xiàn)象。例如罐體底部直徑偏大，攪拌漿較小，安裝位置不合適或者單槳葉的玻璃罐，都可能會(huì)有微載體分布不均勻的風(fēng)險(xiǎn)，所以選擇玻璃罐需要先嘗試滿載下高濃度載體填充的攪拌測(cè)試，并察看微載體的分布狀態(tài)。秘訣二：避開(kāi)微載體粘壁的訣竅當(dāng)玻璃罐顯現(xiàn)微載體粘壁的情況，會(huì)導(dǎo)致微載體的損失，從而降低細(xì)胞生長(zhǎng)面積?？赡茉斐扇缟锨闆r的原因：1、培育微載體的玻璃罐在使用前未進(jìn)行硅化，目前市面上已有無(wú)毒的硅化劑可供選擇，且已有試驗(yàn)證明其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)并無(wú)影響。2、除了沒(méi)有硅化，通氣量的設(shè)置也會(huì)造成肯定影響。過(guò)大的通氣量簡(jiǎn)單使微載體隨氣泡上浮，并且液體上表面形成大量氣泡，將微載體聚集在氣泡表面，槳葉以及罐壁上。按2L培育體積的玻璃罐舉例，通氣量最好在0.01～0.03lpm之間。秘訣三：微載體進(jìn)行平衡時(shí)的訣竅滅菌后，微載體需將上清的PBS去除，而后加入新鮮培育基置換過(guò)夜。再去除置換培育基，重新加入新的培育基在玻璃罐內(nèi)平衡過(guò)夜，避開(kāi)稀釋培育基和血清濃度，導(dǎo)致貼壁效果不佳。平衡過(guò)程中的PH需要嚴(yán)格把控在7.0～7.4，以防影響后期細(xì)胞貼附的效果。將CO2通氣設(shè)置級(jí)聯(lián)PH值，保證整個(gè)平衡過(guò)程不會(huì)顯現(xiàn)PH值的大幅度變化。平衡過(guò)程中建議溫度設(shè)定比目標(biāo)值低3～4C。秘訣四：攪拌速率對(duì)貼壁影響的訣竅玻璃罐里用微載體培育細(xì)胞，攪拌速率該如何設(shè)置才更合理？速率太大，不利于細(xì)胞貼附，并且高剪切力也會(huì)使細(xì)胞受到肯定損傷；速率太小，部分載體簡(jiǎn)單沉降，也會(huì)導(dǎo)致貼附不均勻，甚至顯現(xiàn)部分空球的問(wèn)題。細(xì)胞不同階段攪拌速率的設(shè)置是很有講究的，比如平衡階段，需要把轉(zhuǎn)速調(diào)到剛好使載體均勻分布在培育基中的最低轉(zhuǎn)速；而在剛完成接種細(xì)胞，可以通過(guò)間歇式攪拌，高轉(zhuǎn)速使細(xì)胞與微載體混合均勻，低轉(zhuǎn)速或者停止攪拌可以予以細(xì)胞貼附更有利的環(huán)境；或者連續(xù)式攪拌，以最低的攪拌轉(zhuǎn)速完成貼壁過(guò)程。一般Vero細(xì)胞在接種后4小時(shí)左右即可達(dá)到95%以上的貼附率，之后可再設(shè)置恒定轉(zhuǎn)速進(jìn)行接下來(lái)的培育；每天要定期取樣監(jiān)測(cè)細(xì)胞密度和活率，以及在顯微鏡下察看細(xì)胞貼附及鋪展的狀態(tài)，并且察看微載體在罐體內(nèi)是否有分層、結(jié)團(tuán)或者沉淀的現(xiàn)象來(lái)判定是否需要調(diào)整轉(zhuǎn)速。當(dāng)然，成功的培育還和很多其他因素有關(guān)，如微載體的粒徑分布，也是細(xì)胞能否均勻貼壁至關(guān)緊要的因素之一、樂(lè)純生物L(fēng)eProlif?Sphere球狀微載體具有優(yōu)異的抗剪切本領(lǐng)和杰出的粒徑分布，結(jié)合樂(lè)純生物L(fēng)ePhinix?EZG臺(tái)式反應(yīng)器，先進(jìn)智能的玻璃罐，一起助力玻璃罐里微載體培育細(xì)胞的工藝，更簡(jiǎn)單，更高效！LePhinix?EZG臺(tái)式反應(yīng)器中，10L培育體積，Vero細(xì)胞在LeProlif?Sphere球狀微載體上的生長(zhǎng)情況。數(shù)據(jù)圖文顯示，利用LePhinix?EZG的智能攪拌設(shè)置，可使Vero細(xì)胞在接種后4h就達(dá)到貼壁率9