臨床生化檢驗方法的選擇和評價

臨床生化檢驗方法的選擇和評價臨床生化檢驗方法的選擇和評價，是臨床生化檢驗質(zhì)量控制的重要基礎(chǔ)工作。當建立一個新的方法，或引進新的方法、都應(yīng)對它們的技術(shù)性能作出評價，以便科學(xué)的選擇和應(yīng)用。5/8/20241臨床生化檢驗方法的選擇和評價5/8/20242臨床生化檢驗方法的選擇和評價一檢驗方法和標準品的分級（一）方法的分級

臨床生化檢驗方法根據(jù)其準確度與精密度的不同可以分為決定性方法、參考方法、常規(guī)方法等三級。

5/8/20243臨床生化檢驗方法的選擇和評價1．決定性方法（definitivemethod）是指準確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳細的研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些方面不夠明確的方法。用于發(fā)展及評價參考方法和一級標準品。

5/8/20244臨床生化檢驗方法的選擇和評價2．參考方法（referencemethod）是指準確度與精密度已經(jīng)充分證實的分析方法，干擾因素少，系統(tǒng)誤差與重復(fù)測定的隨機誤差相比可以忽略不計，有適當?shù)撵`敏度、特異性及較寬的分析范圍。這類方法在條件許可的實驗室中應(yīng)經(jīng)常使用。用于評價常規(guī)方法和試劑盒，鑒定二級標準品。5/8/20245臨床生化檢驗方法的選擇和評價

3．常規(guī)方法（routinemethod）指性能指標符合臨床或其他目的的需要，有足夠的精密度、準確度、特異性和適當?shù)姆治龇秶?，而且?jīng)濟實用。這類方法經(jīng)有關(guān)學(xué)術(shù)組織認可后可稱為推薦方法（recommendedmethod），推薦方法應(yīng)具有足夠的實驗證據(jù)5/8/20246臨床生化檢驗方法的選擇和評價三級方法的相互關(guān)系常規(guī)方法參考方法決定性方法準確度增加應(yīng)用范圍增加5/8/20247臨床生化檢驗方法的選擇和評價（二）標準品的分級國際標準化委員會將標準品（參考物）的定義為：一類具有一種或多種成分、且含量均勻確定的物質(zhì)。

；被用于校正儀器或用于評價一種測定方法的物質(zhì)，并將其分成三級。

5/8/20248臨床生化檢驗方法的選擇和評價（二）標準品的分級1．一級標準品（原級參考物，primaryreferencematerial

）是一種穩(wěn)定而均一的物質(zhì)，它的數(shù)值已由決定性方法確定，或由高度準確的若干方法確定，所含雜質(zhì)也已經(jīng)定量，且有證書；用于校正決定性方法，評價及校正參考方法以及為二級標準品定值。5/8/20249臨床生化檢驗方法的選擇和評價2．二級標準品（次級參考物，secondaryreferencematerial

）包括用于常規(guī)分析的標準液。這類標準品可由實驗室自已配制或為商品，它的示值必須用一級標準品和參考方法并由訓(xùn)練有素的，能熟練掌握參考方法的操作者確定；主要用于常規(guī)方法的評價或為控制物定值和常規(guī)測定的結(jié)果計算。5/8/202410臨床生化檢驗方法的選擇和評價3．校準品（calibrator）用二級標準品和常規(guī)方法測定得到校準品，用于常規(guī)測定中的標準4.控制物（controlmaterial）具有與檢測過程相適應(yīng)的特性，其成分及基質(zhì)與檢測樣本相同或相似，且均勻、穩(wěn)定。用于質(zhì)量控制，控制患者樣本的測定誤差5/8/202411臨床生化檢驗方法的選擇和評價各級實驗方法與參考物的相互關(guān)系決定性方法用途：評價參考方法及為一級參考物定值一級參考物用途：發(fā)展和評價參考方法，校正決定性方法和參考方法，產(chǎn)生二級參考物參考方法用途：為二級參考物及控制物定值，評價常規(guī)方法（標準化、偏差、干擾因素）

二級參考物用途：常規(guī)方法的工作標準及為控制物定值5/8/202412臨床生化檢驗方法的選擇和評價二常規(guī)方法選擇的原則（一）適用性微量快速方法簡便安全可靠成本低廉（二）可靠性較高精密度、準確度較好檢測范圍5/8/202413臨床生化檢驗方法的選擇和評價（二）方法選擇的步驟（一）提出要求（二）獲取資料（三）選定候選方法（四）候選方法的初步試驗標準曲線的線性范圍和重復(fù)性；重復(fù)試驗——精密度；對比試驗——準確度；5/8/202414臨床生化檢驗方法的選擇和評價第二節(jié)臨床生化檢驗方法學(xué)評價方法學(xué)評價（evaluationofmethodology）通過實驗途徑測定分析方法的技術(shù)性能，并評價其是否能接受。

評價實驗的過程就是對誤差的測定。

一、方法學(xué)評價的意義和內(nèi)容5/8/202415臨床生化檢驗方法的選擇和評價主要的方法技術(shù)性能指標：

準確度(accuracy)

靈敏度(sensitivity)

特異度(specificity)

分析測量范圍(analyticalmeasurerange,AMR)評價實驗的過程就是對誤差的測定。

5/8/202416臨床生化檢驗方法的選擇和評價確定方法的質(zhì)量目標選定及進行適當?shù)慕沂痉治稣`差類型的實驗收集試驗數(shù)據(jù)，進行統(tǒng)計學(xué)分析判斷方法的可接受性二、方法學(xué)評價的基本步驟5/8/202417臨床生化檢驗方法的選擇和評價三、誤差的分類和表示1.系統(tǒng)誤差（SE）定義：指測定值與真值存在的同一傾向的偏差。系統(tǒng)誤差或正或負，即具有單向性，一般由恒定的因素引起，并在一定條件下多次測定中重復(fù)出現(xiàn)。5/8/202418臨床生化檢驗方法的選擇和評價三、誤差的分類和表示2.系統(tǒng)誤差分類恒定系統(tǒng)誤差（CE）指測定值與真值之間存在恒定的誤差，其大小與干擾物濃度相關(guān)，而與被測物濃度無關(guān)。比例系統(tǒng)誤差（PE）誤差大小與被測物濃度成正比。5/8/202419臨床生化檢驗方法的選擇和評價三、誤差的分類和表示3.隨機誤差（RE）定義：多次重復(fù)測定某一物質(zhì)時出現(xiàn)的誤差，誤差無一定的大小和方向，數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布。5/8/202420臨床生化檢驗方法的選擇和評價誤差類型示意圖比較方法結(jié)果試驗方法結(jié)果比例系統(tǒng)誤差恒定系統(tǒng)誤差隨機誤差5/8/202421臨床生化檢驗方法的選擇和評價揭示誤差類型的實驗

誤差類別實驗隨機誤差（RE）重復(fù)性比例誤差（PE）回收恒定誤差（CE）干擾系統(tǒng)誤差（SE）方法對比總誤差（TE）重復(fù)性和方法對比5/8/202422臨床生化檢驗方法的選擇和評價一、方法評價方案（一）精密度評價

1．目的要求反映精密度好壞的指標是變異系數(shù)CV，CV越小精密度越好，反之則差，故有人稱其為不精密度。變異系數(shù)CV包括：批內(nèi)、批間、日間和總CV，其中總CV最重要，它代表整個分析體系的可重復(fù)程度。

5/8/202423臨床生化檢驗方法的選擇和評價2．評價前的準備①對于評價對象和評價方案均應(yīng)熟悉。②實驗試劑應(yīng)是同批次配制，或同一批號的商品試劑盒和參考物，儀器也應(yīng)處于良好的工作狀態(tài)③實驗用標本一般選擇2個（亦可更多），一個在正常范圍或在醫(yī)學(xué)決定水平附近，另一個為異常值，實驗標本的介質(zhì)應(yīng)與臨床標本一致。④先作一個初步的批內(nèi)精密度測定，即一個標本重復(fù)測定20次，計算出均值，標準差和變異系數(shù)5/8/202424臨床生化檢驗方法的選擇和評價3．評價步驟用2個標本每天測定2次（2次測定間隔不得少于2小時），每次測定均作雙份，共測定20天。每次測定至少做一個質(zhì)控。

5/8/202425臨床生化檢驗方法的選擇和評價（二）準確度評價1．方法比較試驗將試驗方法（待評價或待驗證的方法）與比較方法（參考方法或準確度已知的方法）進行比較，用于評價試驗方法的恒定和比例系統(tǒng)誤差。5/8/202426臨床生化檢驗方法的選擇和評價（二）準確度評價1．方法比較試驗(1)要求比較方法應(yīng)是參考方法或推薦方法，如該測定沒有參考方法或推薦方法亦可用公認的常規(guī)方法。但須具備：①比較試驗方法有更好的精密度。②干擾影響已知。③與試驗方法使用相同的計算單位。5/8/202427臨床生化檢驗方法的選擇和評價(2)比較前準備①實驗者應(yīng)熟悉所用的儀器、試驗方法、比較方法和評價方案。②實驗標本應(yīng)收集新鮮的正常和異常的臨床標本，應(yīng)有足夠?qū)挼臐舛确秶?，各濃度?yīng)有合適的比例。如不能及時測定，標本應(yīng)妥善保存并應(yīng)在分析物的穩(wěn)定期內(nèi)測定。5/8/202428臨床生化檢驗方法的選擇和評價(3)方法比較步驟①樣本數(shù)至少為40個標本，每個標本用2種方法分別作雙份測定，如臨床標本的量太少可將2份含量相近的標本混合。②每天測定8個標本，雙份測定時第一次按順序1，2……7，8，第二次8，7……2，1，共測試5天。5/8/202429臨床生化檢驗方法的選擇和評價結(jié)果分析(1)作圖分析1)差異分析2)對比分析––差異圖:Y軸:試驗方法與比較方法之差X軸:比較方法的測定值––對比圖:Y軸:試驗方法測定值X軸:比較方法的測定值5/8/202430臨床生化檢驗方法的選擇和評價差異分析圖對比分析圖比較方法結(jié)果零線差異（試驗－比較）比較方法結(jié)果測定方法結(jié)果5/8/202431臨床生化檢驗方法的選擇和評價2．回收試驗所謂回收即分析方法正確測定加入常規(guī)分析樣品中的純分析物的能力。目的是測定比例系統(tǒng)誤差，以衡量候選方法的準確度。

（1）方法：將被分析的純品標準液加入樣品中，成為分析樣品，原樣品加入同量的無分析物的溶液作基礎(chǔ)樣品，然后用實驗方法分析，兩者測定結(jié)果的差值為回收量。

5/8/202432臨床生化檢驗方法的選擇和評價

（2）回收率計算：理想的回收率為100%，如某法測血鈣的回收率為95.7%，有4.3%的比例誤差，表明一個含鈣真值為2.5mmol/l的標本,若用該方法測定,約為2.39mmol/l(2.5×95.79%)，誤差為0.11mmol/L(2.5×4.3%)。5/8/202433臨床生化檢驗方法的選擇和評價（3）注意事項：①準確吸量,因為被分析物的理論值是根據(jù)加入標準液體積及原樣品的體積計算所得，吸量稍有不準，就會影響結(jié)果；②樣品中加入標準液后,總的濃度必須在方法的分析范圍內(nèi)，一般須加入高、中、低不同濃度做回收試驗，計算平均回收率；③加入標準液后，最好使實驗樣品的被測濃度達到醫(yī)學(xué)決定濃度；④加入標準液的體積一般在10%以內(nèi)。若稀釋過大，誤差將發(fā)生改變，甚至消失。5/8/202434臨床生化檢驗方法的選擇和評價（三）線性評價1．目的要求線性范圍是分析方法的一個重要技術(shù)指標，它能判斷對某一分析方法測得的濃度或活性值與設(shè)定的濃度或活性值之間的比例關(guān)系的范圍。常規(guī)方法應(yīng)具有較寬的分析范圍，一般應(yīng)覆蓋臨床可能出現(xiàn)的高值。

5/8/202435臨床生化檢驗方法的選擇和評價2．評價前準備①熟悉儀器、評價方案和試劑。②評價標本的介質(zhì)應(yīng)與實際測定的標本相一致，理想的標本是病人的低值或高值標本，這往往不易收集到，亦可用病人的混合標本加入分析物作為高值標本，用正常人標本作為低值標本。③濃度范圍應(yīng)以分析項目的線性要求為準。5/8/202436臨床生化檢驗方法的選擇和評價線性評價應(yīng)有5個不同濃度，可選擇低值和高值標本各一個，低值標本為1號，高值標本為5號，二者3：1混勻為2號，等份混勻為3號，1：3混勻為4號，2-4號標本的濃度按下式計算：

標本濃度=（C1V1+C5V5）/（V1+V5）C：濃度，V：體積。5/8/202437臨床生化檢驗方法的選擇和評價（四）干擾試驗1．目的要求判斷評價方法給出的結(jié)果是否受非分析物影響及影響程度。①干擾是指在測定某分析物的濃度或活性時，受另一非分析物影響而導(dǎo)致測定結(jié)果增高（正干擾）或降低（負干擾）。②干擾物質(zhì)可分為內(nèi)源性（標本中存在的）和外源性（外界污染的）兩類。5/8/202438臨床生化檢驗方法的選擇和評價③干擾的機理，可有物理作用、化學(xué)作用以及非特異反應(yīng)等。④干擾可能是造成誤差的一個重要原因，如果干擾物是恒定的將引起恒定誤差，如干擾物隨病理生理因素影響，將引起隨機誤差。因此，實驗室應(yīng)了解各種測定方法的干擾情況

5/8/202439臨床生化檢驗方法的選擇和評價2．試驗前準備①應(yīng)做的主要干擾物為病人標本中常常出現(xiàn)的黃疸，脂血和溶血；某些藥物如維生素C等；實驗常用的抗凝劑，防腐劑和穩(wěn)定劑。②質(zhì)量保證，不存在系統(tǒng)誤差；批內(nèi)精密度在可接受范圍內(nèi)；應(yīng)不存在前后結(jié)果的交叉污染；實驗過程有質(zhì)控監(jiān)督。

5/8/202440臨床生化檢驗方法的選擇和評價3．干擾試驗方法

(1)"配對差異"試驗:即將不同濃度的干擾物加入到實驗標本中，然后分別測定加與不加干擾物的標本，比較二者有無偏差，并了解干擾物濃度與偏差程度的關(guān)系。

(2)用病人標本作偏差分析:5/8/202441臨床生化檢驗方法的選擇和評價第三節(jié)方法學(xué)評價實驗（舉例）一、批內(nèi)重復(fù)性實驗重復(fù)性試驗依據(jù)時間間隔可分為批內(nèi)、天內(nèi)、天間三種重復(fù)性試驗。方法學(xué)評價重復(fù)性試驗應(yīng)由實驗者作批內(nèi)(或天內(nèi))及天間重復(fù)性試驗。

5/8/202442臨床生化檢驗方法的選擇和評價【目的與要求】掌握方法學(xué)重復(fù)性實驗的設(shè)計原理和基本方法及統(tǒng)計分析；熟悉重復(fù)性實驗的注意事項和評價標準?？陀^評價GOD-POD法測血糖隨機誤差的大小。

5/8/202443臨床生化檢驗方法的選擇和評價【原理】批內(nèi)重復(fù)性試驗是指在相同條件下對同一標本在盡可能短的時間內(nèi)進行m輪，每輪n次重復(fù)測定，以獲得批內(nèi)精密度數(shù)據(jù)的試驗方法。其結(jié)果能反映各次測定結(jié)果相互接近的程度，用于客觀評價GOD-POD法測血糖隨機誤差的大小。

【操作步驟】

將血清標本用GOD-POD法作5輪，每輪4次血糖測定，即可獲得20個測定數(shù)據(jù)。

5/8/202444臨床生化檢驗方法的選擇和評價【結(jié)果計算】1．檢驗20次測定數(shù)據(jù)中的離群值（用Grubbs檢驗準則，檢驗離群值）2．按照批內(nèi)精密度的計算公式計算5輪每輪4次測定值的平均數(shù)()、標準差(S)和變異系數(shù)(CV%)。

5/8/202445臨床生化檢驗方法的選擇和評價5/8/202446臨床生化檢驗方法的選擇和評價5/8/202447臨床生化檢驗方法的選擇和評價【評價標準】

如試驗求得的血清葡萄糖GOD-POD測定法的CV值＜WHO對中等實驗室提出的OCV(±3%)標準，即表明實驗條件的控制達到最佳條件，試驗結(jié)果可按OCV%報告。作為方法探討實驗，其變異系數(shù)應(yīng)該＜OCV標準。

5/8/202448臨床生化檢驗方法的選擇和評價【注意事項】1.血糖的醫(yī)學(xué)決定水平值為2.8、6.7、8.9mmol/L。分析物濃度應(yīng)選擇醫(yī)學(xué)決定水平值才更具價值。

2.為了縮小測定值的離散程度，操作中必須準確加入標準液及標本量，并嚴格控制反應(yīng)時間，準確讀數(shù)。

3．計算批內(nèi)標準差(Sw)時不可誤用連續(xù)測定精密度的統(tǒng)計學(xué)公式。否則會使Sw的估計值明顯偏低。

5/8/202449臨床生化檢驗方法的選擇和評價【思考題】

1.重復(fù)性試驗依據(jù)時間間隔可分為幾種？哪種最符合臨床實際？

2.重復(fù)性試驗結(jié)果反映了什么誤差？

3.方法評價的批內(nèi)重復(fù)性試驗在標本濃度、樣本數(shù)、測試方法及統(tǒng)計方法方面有什么要求？5/8/202450臨床生化檢驗方法的選擇和評價二、回收試驗回收即分析方法正確測定加入常規(guī)分析樣品中的純分析物的能力。用于測定實驗方法的比例系統(tǒng)誤差。這種誤差常隨分析物的濃度增加而增加，常因樣品中其它物質(zhì)與分析物競爭分析試劑并與之發(fā)生反應(yīng)而引起。

5/8/202451臨床生化檢驗方法的選擇和評價【目的與要求】掌握方法學(xué)回收實驗的設(shè)計原理和基本方法及統(tǒng)計分析；熟悉回收實驗的注意事項和評價標準?？陀^評價GOD-POD法測血糖比例系統(tǒng)誤差的大小。

5/8/202452臨床生化檢驗方法的選擇和評價【原理】回收試驗是發(fā)現(xiàn)分析方法比例系統(tǒng)誤差的有效評價方法。通過測定GOD-POD法測血糖的回收率，能較確切地判斷該分析方法比例系統(tǒng)誤差的有無或大小，可以對方法的準確性作出可靠評價。

5/8/202453臨床生化檢驗方法的選擇和評價【操作步驟】1．樣品制備

基礎(chǔ)樣品：血清0.9ml+0.1ml生理鹽水。

回收樣品Ⅰ：血清0.9ml＋0.01ml80mmol/L葡萄糖標準液＋0.09ml生理鹽水。

回收樣品Ⅱ：血清0.9ml＋0.06ml80mmol/L葡萄糖標準液＋0.04ml生理鹽水。

回收樣品Ⅲ：血清0.9ml＋0.09ml80mmol/L葡萄糖標準液＋0.01生理鹽水。

2．血糖濃度測定按GOD-POD法測定各制備樣品的血糖濃度，每份樣品作雙份檢測，結(jié)果取平均值。5/8/202454臨床生化檢驗方法的選擇和評價【結(jié)果計算】5/8/202455臨床生化檢驗方法的選擇和評價5/8/202456臨床生化檢驗方法的選擇和評價【注意事項】1．分析物濃度應(yīng)選擇醫(yī)學(xué)決定水平，血糖測定的醫(yī)學(xué)決定水為平2.8、6.7、8.9mmol/L。

2．純標準品溶液的加入體積不得超過血清樣品的10%，避免將血清稀釋過度，引起誤差的改變或消失。

3．準確加量是最主要的技術(shù)關(guān)鍵。

5/8/202457臨床生化檢驗方法的選擇和評價【結(jié)果判斷】一般檢驗方法要求回收率在95%-105%之間，最為理想的回收率應(yīng)是100%。

【思考題】

1.什么叫回收試驗？在回收試驗的樣品制備中應(yīng)注意哪些事項？

2.回收試驗反映的是方法的哪種誤差？

3.回收率怎樣計算？

5/8/202458臨床生化檢驗方法的選擇和評價三、干擾試驗干擾試驗用于測定某物質(zhì)加到樣品中產(chǎn)生的系統(tǒng)誤差，干擾物濃度一定時，產(chǎn)生的誤差是恒定系統(tǒng)誤差，誤差的實際大小隨干擾物的濃度而異。干擾試驗既用于檢測某方法的特異性，也用于檢測干擾物質(zhì)對方法的干擾作用，以評價分析方法的準確性。

5/8/202459臨床生化檢驗方法的選擇和評價【目的與要求】掌握方法學(xué)干擾實驗的設(shè)計原理和基本方法及統(tǒng)計分析；熟悉干擾實驗的注意事項和評價標準?？陀^評價GOD-POD法測血糖恒定系統(tǒng)誤差的大小。

5/8/202460臨床生化檢驗方法的選擇和評價【原理】干擾試驗是測定特異性和干擾二者引起的誤差。在具體方法學(xué)評價實驗中，首先要確定被試可疑物質(zhì)是否引起誤差；若能引起誤差，再進一步探討其誤差的來源是因方法特異性差還是干擾，若加入的物質(zhì)本身和分析試劑反應(yīng)并產(chǎn)生讀數(shù)，這是特異性差，若加入物質(zhì)并不與分析試劑反應(yīng)，但它改變了分析物和分析試劑間的反應(yīng)，這是干擾。本實驗選用尿酸做GOD-POD法測血糖的干擾試驗，尿酸可以和GOD反應(yīng)生成的H2O2發(fā)生反應(yīng)，使部分H2O2不能參與第二步POD的偶聯(lián)反應(yīng)，從而降低顯色強度，產(chǎn)生負的測定誤差。因此，尿酸對該反應(yīng)有干擾，但不是尿酸被測定。5/8/202461臨床生化檢驗方法的選擇和評價【操作步驟】1．樣品制備

基礎(chǔ)樣品：血清0.9ml＋蒸餾水0.1ml。

干擾樣品Ⅰ：血清0.9ml＋9.0mmol/L尿酸標準液0.05ml+蒸餾水0.05ml。

干擾樣品Ⅱ：血清0.9ml＋9.0mmol/L尿酸標準液0.1ml。

尿酸樣品：蒸餾水0.9ml＋9.0mmol/L尿酸標準液0.1ml。

2．血糖值測定取各樣品按GOD-POD法操作。

5/8/202462臨床生化檢驗方法的選擇和評價【結(jié)果計算】5/8/202463臨床生化檢驗方法的選擇和評價5/8/202464臨床生化檢驗方法的選擇和評價【注意事項】1．可疑干擾物濃度加入可疑干擾物的濃度應(yīng)明顯高于通常所見濃度的上限，有可能時應(yīng)達到病理標本的最高值，尿酸升高的變動范圍在0.42-0.9mmol/L之間。

2．凡可疑干擾物都應(yīng)做，這里僅是舉例示范。

3．無論是方法特異性差或是受干擾，都影響到測定結(jié)果的正確性，影響的程度與分析物的濃度無關(guān)，但與非分析物的量有關(guān)，所以產(chǎn)生的誤差都是恒定系統(tǒng)誤差，常以偏差Bias作為統(tǒng)計量。Bias指所有測定值系統(tǒng)性的偏離真值，表示系統(tǒng)誤差的大小。在干擾試驗中，偏差等于干擾樣品測定值與基礎(chǔ)樣品測定值之差。

其它注意事項與回收試驗相同。5/8/202465臨床生化檢驗方法的選擇和評價【結(jié)果判斷】Bias＜允許誤差(EA)的臨界值，表明由干擾物引起的偏差對臨床診斷和治療不產(chǎn)生不良影響，可被接受。血糖2.8、6.7、8.9mmol/L時的EA為0.56mmol/L。

5/8/202466臨床生化檢驗方法的選擇和評價【思考題】1.請闡述干擾和特異的概念，怎樣用實驗來加以區(qū)分？

2.干擾試驗的樣品制備與回收試驗的樣品制備有何相同點和不同點？

3.干擾試驗反映的是何種誤差？干擾率怎樣計算？5/8/202467臨床生化檢驗方法的選擇和評價四、方法比較試驗方法比較試驗是用兩種方法同時測定一批標本計算出兩種方法間測定結(jié)果的差值，以此來估計被評價方法在實際測定病人標本時可能引入的總系統(tǒng)誤差的水平。

5/8/202468臨床生化檢驗方法的選擇和評價【目的與要求】掌握方法比較實驗的設(shè)計原理和基本方法及統(tǒng)計分析；熟悉方法比較實驗的注意事項和評價標準。客觀評價GOD-POD法測血糖系統(tǒng)誤差的大小。

5/8/202469臨床生化檢驗方法的選擇和評價【原理】方法比較試驗是將候選方法與準確度已知的方法(如參考方法)作對比分析，以評價候選方法的準確度，是考核候選方法是否可被采用的重要試驗。方法比較試驗是用于檢測候選方法系統(tǒng)誤差的大小包括恒定誤差和比例誤差，如對適當?shù)臄?shù)據(jù)進行分析，也可以提供誤差的性質(zhì)。本實驗以HK法測血糖的參考方法作對比來評價GOD-POD法測定血糖的總系統(tǒng)誤差。5/8/202470臨床生化檢驗方法的選擇和評價【數(shù)據(jù)處理】1．將對比試驗數(shù)據(jù)作散點圖，圖中以x軸代表對比方法的測定值，y軸代表被評價方法的測定數(shù)據(jù)，在方格紙上作圖應(yīng)散布于整個測定范圍之內(nèi)。

散點圖能夠提供初步的印象。如果所有測定值的對應(yīng)點在直角坐標圖中大致呈45°角的直線分布，提示被評價方法與對比方法的測定結(jié)果之間存在密切的相關(guān)關(guān)系；若呈明顯的曲線分布，雖然在統(tǒng)計學(xué)上可按照非線性資料處理，但在這種情況下，候選方法被采用的可能性極小。5/8/202471臨床生化檢驗方法的選擇和評價2．如果x、y之間呈直線關(guān)系,即可用經(jīng)典的直線回歸分析法作統(tǒng)計處理，其結(jié)果可以顯示候選方法的測定結(jié)果有無系統(tǒng)誤差存在，這種誤差可分為三類，即恒定系統(tǒng)誤差、比例系統(tǒng)誤差和(或)兼有兩種誤差。

5/8/202472臨床生化檢驗方法的選擇和評價在評價一個候選方法時，最理想的情況是回歸直線通過零點，呈45°角分布，這時a＝0，b(x/y比值)＝1.0，表明既無恒定誤差，又無比例誤差存在。但x和y都會有隨機誤差，a和b只是估計值，是會有所波動的。如果a≠0，b的數(shù)值稍偏離1.0，但只要這種偏離程度比較小(可以忽略不計)，據(jù)經(jīng)驗判斷這一候選方法可以被接受，就能適用于臨床檢驗的常規(guī)分析。假如要對回歸系數(shù)b作出較嚴密的統(tǒng)計判斷，就需要進一步作回歸系數(shù)的顯著性檢驗。5/8/202473臨床生化檢驗方法的選擇和評價3．根據(jù)計算出的回歸方程的a、b值，可以計算出候選方法系統(tǒng)誤差(SE)的大小，并與不同醫(yī)學(xué)決定水平(Xc)的允許誤差(EA)作比較，對被評價方法的系統(tǒng)誤差的可接受性作出判斷。

5/8/202474臨床生化檢驗方法的選擇和評價4．作相關(guān)分析在方法比較試驗中，相關(guān)系數(shù)(r)可作為被評價方法可否被接受的一項統(tǒng)計學(xué)指標。

相關(guān)系數(shù)(r)按下列公式計算：

5/8/202475臨床生化檢驗方法的選擇和評價【結(jié)果判斷】1.回歸方程計算出候選方法系統(tǒng)誤差(SE)的大小，與不同醫(yī)學(xué)決定水平(Xc)的允許誤差(EA)作比較，對被評價方法的系統(tǒng)誤差的可接受性作出判斷。

SE的可接受性判斷指標為：

2.試驗方法（Y）與比較方法（X）相關(guān)性，r≥0.975或r2≥0.95說明二法的相關(guān)良好。5/8/202476臨床生化檢驗方法的選擇和評價【注意事項】1．選擇試驗樣品一般作40-100例，包括常規(guī)工作中可能遇到的整個分析范圍，選擇合適的樣品分析范圍比增加樣品的數(shù)目更為重要。

2．試驗方法一般每個樣品用兩種方法各測一次，最好每個樣品用兩種方法各測定兩次，不是平行測定，而是分兩批進行，最好在4h內(nèi)進行。

3．對比方法對比方法的選擇十分重要，一般應(yīng)選參考方法或決定性方法，這樣方法間的任何分析誤差均可歸于被評價的候選方法。5/8/202477臨床生化檢驗方法的選擇和評價【思考題】

1.方法比較試驗反映的是何種誤差？比較方法為何要用參考方法？

2.方法比較試驗的樣本有何具體要求？

3.方法比較試驗后尚需做哪些統(tǒng)計分析？這些統(tǒng)計結(jié)果分別說明方法的哪些性能？

4.做方法比較試驗應(yīng)注意哪些事項？

5/8/202478臨床生化檢驗方法的選擇和評價分離純化小麥胚芽中酸性磷酸酶【原理】酸性磷酸酶(ACP)在自然界中廣泛分布于植物種子、霉菌、以及動物肝臟和前列腺中。植物種子中的ACP在發(fā)芽時含量最豐富。本實驗選用新鮮小麥胚芽作為原料來分離和純化ACP。ACP能溶解于稀緩沖液和水中；溶于35%飽和度的硫酸銨溶液中，在57%飽和度的硫酸銨溶液中可沉淀析出；在中性及高溫條件下不穩(wěn)定，在70℃時相對穩(wěn)定；pH小于6.5時穩(wěn)定性增加，枸櫞酸和乙酸可增加ACP酶溶液的穩(wěn)定性；Mg2+、Mn2+為ACP激活劑，而Cu2+、Hg2+、