臨床酶學檢驗技術課件

臨床酶學檢驗技術臨床生物化學檢驗5/8/20241臨床酶學檢驗技術課件第一節(jié)酶學基本知識●

酶的本質(zhì)---絕大部分的酶是蛋白質(zhì)，有些酶是核酸和酶蛋白組成的復合體，極少數(shù)酶的本質(zhì)是核酸?！?/p>

酶的特性---極高的催化效率、高度的特異性

(specificity)以及催化作用的可調(diào)節(jié)性●

酶的結(jié)構與功能

單純酶

酶蛋白(apoenzyme)

結(jié)合酶

輔酶(coenzyme)

輔因子(cofactor)

輔基(prostheticgroup)5/8/20242臨床酶學檢驗技術課件●

酶是蛋白質(zhì)，具有一、二、三級結(jié)構，有些酶還具有四級結(jié)構?！?/p>

單體酶(monomericenzyme)---只由一條多肽鏈構成●

寡聚酶(oligomericenzyme)---由多個相同或不同亞基以非共價鍵連接的酶●

多酶體系(multienzymesystem)---由幾種不同功能的酶彼此聚合而成的多酶復合物●

酶的必需基團(essentialgroup)---與酶的活性密切相關的基團●

酶的活性中心(activecenter)---組成具有能與底物結(jié)合并起催化反應的特定空間結(jié)構區(qū)域5/8/20243臨床酶學檢驗技術課件酶的命名、分類與編號●

酶的命名---習慣命名法、系統(tǒng)命名法●

酶的分類---可分為六大類氧化還原酶(oxido-reductases)、轉(zhuǎn)移酶(transferases)、水解酶(hydrolases)、裂解酶(或裂合酶)(lyases)、異構酶(isomerases)、合成酶(或連接酶)(synthetases或ligases)●

酶的編號---用4個數(shù)字加以系統(tǒng)編號第一個數(shù)字表示酶的類別，第二個表示亞類，第三個表示亞-亞類，第四個表示酶的編號序數(shù)。5/8/20244臨床酶學檢驗技術課件

習慣用名英文縮寫EC編號系統(tǒng)名乳酸脫氫酶LD（LDH）1.1.1.27L乳酸：NAD+氧化還原酶單胺氧化酶MAO1.4.3.4單胺：氧化還原酶γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶γ-GT/GGT2.3.2.2γ-谷氨酰肽：氨基酸γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST2.6.1.1L-門冬氨酸：α-酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷草轉(zhuǎn)氨酶）(GOT)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT2.6.1.2L-丙氨酸：α-酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）(GPT)肌酸激酶CK2.7.3.2三磷酸腺苷：肌酸轉(zhuǎn)磷酸酶堿性磷酸酶ALP(AKP)3.1.3.1正磷酸單酯磷酸水解酶臨床酶學分析中常用酶的名稱與編號5/8/20245臨床酶學檢驗技術課件5/8/20246臨床酶學檢驗技術課件三、酶促反應動力學（一）酶促反應

方程5/8/20247臨床酶學檢驗技術課件（二）酶促反應進程5/8/20248臨床酶學檢驗技術課件（三）酶動力學參數(shù)

1．反應速度2．米氏常數(shù)

(1)初速度指在反應最初階段底物的消耗量很小（一般在50%以內(nèi)）時的反應速度(2)最大反應速度指當酶的結(jié)合位點與底物結(jié)合飽和時的反應速度5/8/20249臨床酶學檢驗技術課件(四)酶偶聯(lián)反應

ABCD

酶學分析中作為試劑用于測定化合物濃度或酶活性濃度的酶

Ei——指示酶Ea——輔助酶ExEiEa工具酶5/8/202410臨床酶學檢驗技術課件5/8/202411臨床酶學檢驗技術課件第二節(jié)血清酶變化的生理病理機制一、血清酶的來源與去路

（一）血清酶的來源

1．血漿固有酶

2．非血漿固有酶①外分泌酶②細胞酶

（二）血清酶的去路

1．腎小球濾過從尿液中排出

2．網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)清除

3．血管內(nèi)失活或滅活5/8/202412臨床酶學檢驗技術課件二、血清酶變化的生理病理機制

（一）血清酶的生理差異

1．性別2．年齡3．飲食

4．運動5．妊娠（二）血清酶變化的病理機制

1．酶合成異常

2．細胞內(nèi)酶的滲漏

3．酶進入血液的方式

4．其他血管內(nèi)的抑制作用、清除速度5/8/202413臨床酶學檢驗技術課件

(一)酶活性單位

1．慣用單位

2．國際單位---在特定的條件下，一分鐘內(nèi)使底物轉(zhuǎn)變一微摩爾的酶量為一個國際單位。

3．Katal單位---在規(guī)定條件下，每秒鐘催化轉(zhuǎn)化一摩爾底物的酶量。1katal＝60×106U

第三節(jié)酶含量的表示方法

一、酶活性濃度表示法

5/8/202414臨床酶學檢驗技術課件（二）酶活性濃度指單位體積樣品中的酶活性單位（三）正常上限升高倍數(shù)（ULN)

是指用測得的酶活性結(jié)果除以參考范圍上限5/8/202415臨床酶學檢驗技術課件5/8/202416臨床酶學檢驗技術課件二、酶蛋白質(zhì)量濃度表示法

測定酶蛋白質(zhì)量濃度優(yōu)點：①靈敏度高②特異性高③可測定無活性的酶④與酶活性測定一起，計算免疫比活性⑤在同工酶測定中更有價值5/8/202417臨床酶學檢驗技術課件第四節(jié)酶催化活性濃度測定的理論基礎一、定時法二、連續(xù)監(jiān)測法

5/8/202418臨床酶學檢驗技術課件（三）連續(xù)監(jiān)測法的方法設計

1．以人工合成色素原做底物的連續(xù)監(jiān)測2．NAD(P)H的連續(xù)監(jiān)測3．以Trinder反應做指示反應的連續(xù)監(jiān)測4．特殊反應類型的連續(xù)監(jiān)測5/8/202419臨床酶學檢驗技術課件第五節(jié)酶活性測定的影響因素與最適條件的確定一、方法因素的影響（一）正向反應與逆向反應（二）檢測底物或檢測產(chǎn)物（三）底物啟動模式與樣品啟動模式5/8/202420臨床酶學檢驗技術課件二、測定條件的影響與最適條件的確定（一）底物種類和濃度（二）緩沖液種類、pH和離子強度（三）反應溫度（四）輔助因子和激活劑（五）抑制劑（六）酶偶聯(lián)法中的輔助酶和指示酶（七）延滯期與線性期的確定（八）樣品與試劑比例5/8/202421臨床酶學檢驗技術課件三、其他因素對測定結(jié)果的影響（一）儀器（二）校準物（三）實驗參數(shù)（四）副反應5/8/202422臨床酶學檢驗技術課件第六節(jié)同工酶檢測技術一、電泳法二、抑制法三、其他方法

（一）熱變性（二）親和層析法

5/8/202423臨床酶學檢驗技術課件

免疫抑制法

利用同工酶的一種亞基與相應的抗體結(jié)合后，酶活性受到抑制，測定加與不加抗體前后樣品中酶活性的變化，可以計算出該型同工酶的活性。不加抗CK-MM血清時樣品的CK活性：CK-MM和CK-MB活性；加入抗CK-MM血清時樣品的CK活性：50％CK-MB的活性；加入抗CK-MM血清時樣品的CK活性×2：CK-MB活性；所測CK-MM和CK-MB之總活性－CK-MB活性＝CK-MM活性。5/8/202424臨床酶學檢驗技術課件第七節(jié)目前常用診斷酶的酶活性測定一、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶與門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的測定

5/8/202425臨床酶學檢驗技術課件L-丙氨酸＋α-酮戊二酸α-丙酮酸＋L-谷氨酸丙酮酸＋NADH＋H+

乳酸＋NAD+ALT（樣品）LD（試劑）酶耦聯(lián)法測定ALT340nm－△A/minα-酮酸標本中GLDH標本中①②試劑1試劑25/8/202426臨床酶學檢驗技術課件5/8/202427臨床酶學檢驗技術課件二、肌酸激酶的測定三、堿性磷酸酶的測定5/8/202428臨床酶學檢驗技術課件四、γ-谷