培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法

WELCOME5/8/20241培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法培養(yǎng)細(xì)胞的觀察

檢測(cè)方法生物技術(shù)教研室李延蘭5/8/20242培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法活細(xì)胞的觀察檢測(cè)方法培養(yǎng)細(xì)胞常用的染色方法細(xì)胞生長(zhǎng)狀況有關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)方法細(xì)胞生物活性的有關(guān)化學(xué)檢測(cè)方法電子顯微鏡技術(shù)5/8/20243培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法

一、活細(xì)胞的觀察檢測(cè)方法肉眼觀察相差顯微鏡觀察

細(xì)胞在體外培養(yǎng)過(guò)程中需要每天觀察，以便及時(shí)了解細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)、數(shù)量改變、細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞有無(wú)移動(dòng)、有無(wú)污染、培養(yǎng)液pH是否變酸、變黃、是否更換等。

細(xì)胞常規(guī)檢查的方法為：5/8/20244培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法5/8/20245培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法肉眼觀察一般常規(guī)檢查用肉眼即可觀察，主要看培養(yǎng)液的顏色和透明度的變化。pH顏色透明度正常7.2～7.4桃紅色清亮、透明酸性產(chǎn)物↓↓變淺、變黃污染

混濁變黃←pH↓↓

pH

↑↑→變紅5/8/20246培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法大多數(shù)細(xì)胞適于在pH7.2～7.4條件下生長(zhǎng)，低于pH6.8或高于pH7.6對(duì)細(xì)胞有害，甚至造成細(xì)胞退化或死亡。細(xì)胞對(duì)堿性不如對(duì)酸性的變化耐受，偏酸的條件比偏堿的環(huán)境對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有利。隨細(xì)胞數(shù)量的增多、代謝加強(qiáng)，釋放CO2增多，使pH降低。為了維持培養(yǎng)基恒定的pH，多在培養(yǎng)基中加入磷酸鹽等緩沖劑。羥乙基哌嗪乙硫磺酸（Hepes）：對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性，也不起緩沖作用，主要作用是防止pH迅速變動(dòng)，在開瓶通氣培養(yǎng)或活細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的pH值。若培養(yǎng)瓶、瓶塞漏氣，使CO2溢出，或者由于洗刷不潔、殘留堿性物，使培養(yǎng)液變堿發(fā)紅，致使細(xì)胞難以生長(zhǎng)，甚至死亡。5/8/20247培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法玻璃器材常用的玻璃器材有各種規(guī)格的玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、吸管、離心管。首次使用：重復(fù)使用的處理步驟：自來(lái)水刷洗0.1％稀鹽酸浸泡過(guò)夜自來(lái)水沖洗自來(lái)水刷洗硫酸－重鉻酸鉀浸泡過(guò)夜自來(lái)水沖洗10次雙蒸水沖洗2次單蒸水沖洗3次晾干、包裝121℃高壓蒸汽滅菌20min5/8/20248培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法顯微鏡觀察

相差顯微鏡（phasecontrastmicroscope）活細(xì)胞對(duì)光線是透明的，光線通過(guò)活細(xì)胞時(shí)，波長(zhǎng)和振幅幾乎沒有改變，所以用普通光鏡無(wú)法看清未經(jīng)染色的活細(xì)胞。

20世紀(jì)30年代荷蘭Zernike

原理：利用光的衍射和干涉特性，把透過(guò)標(biāo)本不同區(qū)域的光波的光程差轉(zhuǎn)變成振幅差，使細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)之間呈現(xiàn)清晰可見的明暗對(duì)比，從而使標(biāo)本的各種結(jié)構(gòu)變得清晰。

5/8/20249培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法相差顯微鏡觀察活細(xì)胞的步驟如下：調(diào)整好相差顯微鏡

觀察瓶皿準(zhǔn)備調(diào)光調(diào)焦與攝影細(xì)胞觀察5/8/202410培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法5/8/202411培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法生長(zhǎng)良好的細(xì)胞，在顯微鏡下可觀察到細(xì)胞透明度大，折光性強(qiáng)，輪廓不清。若細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不良，可見細(xì)胞輪廓增強(qiáng)，細(xì)胞折光性變?nèi)?，?xì)胞胞質(zhì)中出現(xiàn)空泡、脂滴和其他顆粒狀物質(zhì)，細(xì)胞之間空隙增大，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，甚至失去原有細(xì)胞的特點(diǎn)，產(chǎn)生圓縮脫落，有時(shí)細(xì)胞表面及周圍出現(xiàn)絲絮狀物。顯微鏡觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)5/8/202412培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法BMSCs5/8/202413培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程5/8/202414培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法各種細(xì)胞及各代細(xì)胞增殖的時(shí)間不盡相同。原代細(xì)胞、成體組織的潛伏期較長(zhǎng)，24h后僅見到部分細(xì)胞開始貼壁，9～12d長(zhǎng)滿瓶底，細(xì)胞融合呈交叉重疊生長(zhǎng)。傳代細(xì)胞系、胚胎組織或幼體細(xì)胞潛伏期短，一般經(jīng)過(guò)懸浮、貼壁伸展很快進(jìn)入潛伏期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞大量繁殖，逐漸相連成片而長(zhǎng)滿瓶底。一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底80％就應(yīng)及時(shí)傳代，否則會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)甚至脫落。懸浮細(xì)胞當(dāng)發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)顯著、密度增大、分布稠密、培養(yǎng)液變黃時(shí)也應(yīng)及時(shí)傳代。5/8/202415培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法Anip9735/8/202416培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法注意事項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)的培養(yǎng)板、培養(yǎng)瓶或皿一般成像效果都較好，但反復(fù)刷洗過(guò)的玻璃或塑料器皿將嚴(yán)重影響分辨力。準(zhǔn)備觀察的瓶、皿要平坦，質(zhì)地均勻，透光度好，在觀察前將培養(yǎng)瓶、皿面擦凈。天氣較冷時(shí)，由于溫差使培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)壁形成霧滴而影響觀察的清晰度，可輕輕將瓶?jī)A斜使瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液浸潤(rùn)內(nèi)壁，以得到好的相差像。對(duì)原代細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行相差顯微照相，應(yīng)在換液后進(jìn)行，這樣可以去除漂浮的組織塊和死細(xì)胞，提高成像清晰度。觀察細(xì)胞時(shí)要有無(wú)菌概念，動(dòng)作要輕，避免猛烈震蕩；觀察時(shí)間不要太長(zhǎng)，觀察次數(shù)也不要太頻繁，以免影響細(xì)胞生長(zhǎng)。顯微鏡觀察5/8/202417培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法5/8/202418培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法活細(xì)胞的觀察檢測(cè)方法暗視野顯微鏡技術(shù)觀察活細(xì)胞縮時(shí)顯微鏡攝影觀察體外活細(xì)胞染色觀察5/8/202419培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法暗視野顯微鏡技術(shù)觀察活細(xì)胞（darkfieldmicroscope)原理：利用特殊聚光器使光線不能進(jìn)入物鏡，經(jīng)過(guò)標(biāo)本的散射光線使物鏡被放大，因此在黑暗背景中可呈現(xiàn)明亮的像。優(yōu)點(diǎn)：反差增大，分辨率提高，可觀察到5nm的微小質(zhì)點(diǎn)。應(yīng)用：觀察活細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞核、線粒體、細(xì)菌和霉菌等。縮時(shí)顯微攝影術(shù)觀察（time-lapsecinemicrophotagraphy，TLCM）優(yōu)點(diǎn)：可直接記錄活細(xì)胞的連續(xù)動(dòng)態(tài)變化過(guò)程，能非常直觀地展現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中的動(dòng)態(tài)變化，如細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞分裂、細(xì)胞膜變化、細(xì)胞死亡等過(guò)程。缺點(diǎn)：較昂貴5/8/202420培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法體外活細(xì)胞染色觀察體外活細(xì)胞染色就是在體外培養(yǎng)條件下，用某種染料對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色，而不影響活細(xì)胞生命活動(dòng)的一種方法。利用這種方法，可以對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行染色觀察，經(jīng)染色的培養(yǎng)物還可以繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。堿性染料酸性染料（臺(tái)盼藍(lán)、剛果紅、吡咯藍(lán)）活體染料噻嗪類（次甲基藍(lán)、甲苯胺藍(lán)）惡嗪類（亮焦油藍(lán)、亮焦油紫）丫嗪類（中性紅、詹納斯綠）三酚苯甲烷類（甲基紫、維克多利亞藍(lán)）5/8/202421培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法中性紅染色

常用活體染料，一般濃度為1：10000，用生理鹽水（或Hanks液）溶解后進(jìn)行高壓蒸汽滅菌暗處存放，可直接浸染活體細(xì)胞顯微鏡下觀察或用于細(xì)胞的病毒蝕斑，肉眼計(jì)數(shù)空斑數(shù)目。因其毒性大，染色后細(xì)胞不能再培養(yǎng)。結(jié)晶紫染色使用濃度為0.1％，可用生理鹽水配制，室溫保存。該染料對(duì)死、活細(xì)胞均著色，故只能測(cè)出細(xì)胞總數(shù)。臺(tái)盼藍(lán)染色用0.5％濃度的臺(tái)盼藍(lán)（trypanblue)，用PBS配制，室溫保存，該染料只對(duì)死細(xì)胞著色，可測(cè)定活細(xì)胞數(shù)和計(jì)算存活百分率。5/8/202422培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法E.coli以結(jié)晶紫(crystalviolet)染色5/8/202423培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法B.cereus以石炭酸復(fù)紅(carbolfuchsin)染色5/8/202424培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法aureus以甲烯藍(lán)(methyleneblue)染色5/8/202425培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法二、培養(yǎng)細(xì)胞常用的染色方法細(xì)胞固定的基本方法細(xì)胞常用的染色方法細(xì)胞特殊的染色方法5/8/202426培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法1、細(xì)胞固定的基本方法固定組織、細(xì)胞的目的：把組織和細(xì)胞的原有結(jié)構(gòu)盡可能完整地保存下來(lái)，避免組織和細(xì)胞發(fā)生降解、自溶、腐敗和變形等；同時(shí)，固定還可以使細(xì)胞的各部分易于著色，適于觀察、長(zhǎng)期保存和分析。固定組織、細(xì)胞的原則：盡可能選用新鮮培養(yǎng)物；根據(jù)檢測(cè)工具、對(duì)象、目的和要求選擇固定劑和固定方法。5/8/202427培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法固定前的準(zhǔn)備：

各種細(xì)胞培養(yǎng)物，如雙蓋片懸滴培養(yǎng)物、懸液培養(yǎng)物、單層培養(yǎng)物和蓋片單層培養(yǎng)物都可作固定材料。

懸浮細(xì)胞：離心（800～1000r/min）→PBS/Hanks漂洗2～3次

貼壁細(xì)胞：用鑷子輕輕取出蓋片→PBS/Hanks漂洗2～3次注：漂洗的目的是去除血清和附著于細(xì)胞表面的殘?jiān)乐蛊浞恋K染色。5/8/202428培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法5/8/202429培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法常用固定液簡(jiǎn)單固定液：甲醇、乙醇、甲醛、醋酸、戊二醛、苦味酸、重鉻酸鉀、鋨酸等混合固定液：甲醇/醋酸固定液、FAA固定液、Carnoy固定液、Bouin固定液、4％多聚甲醛-PBS固定液等甲醇/醋酸固定液：甲醇：冰醋酸為3：1，現(xiàn)用現(xiàn)配，適用于Giemsa染色。FAA固定液：90mL80％酒精＋5mL冰乙酸＋5mL40％甲醛，適用于蓋片單層培養(yǎng)的細(xì)胞，固定效果好。Carnoy固定液：較好的非水溶性固定液，60mL純酒精＋30mL氯仿＋10mL冰乙酸，適用于顯示細(xì)胞化學(xué)成分。5/8/202430培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法2、細(xì)胞常用的染色方法H.E（蘇木精-伊紅）染色法原理：堿性染料蘇木精和酸性染料伊紅分別與細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，使細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)通過(guò)顏色而改變它的折射率，從而在光鏡下能清晰地呈現(xiàn)出細(xì)胞的圖像，并能提供良好的核漿對(duì)比染色。染液配制：染色步驟：染色結(jié)果：細(xì)胞核染成紅色，細(xì)胞質(zhì)染成藍(lán)色。5/8/202431培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法5/8/202432培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法Giemsa（吉姆薩）染色法母液配制：Giemsa粉0.5g，甘油22mL，將Giemsa粉置于研缽內(nèi)先用少量甘油與之充分混合，研磨至無(wú)顆粒；然后將剩余甘油混在一起，56℃保溫2h后，加入33mL純甲醇，混勻，即為Giemsa母液，保存于棕色瓶?jī)?nèi)。染液配制：取9份pH6.8~7.38的Sorensen緩沖液和1份Giemsa母液混合即可。染色步驟：細(xì)胞標(biāo)本用甲醇/醋酸固定液固定30min后，用滴管把染液布滿玻片上，染色10~15min，用自來(lái)水沖去多余染液，空氣干燥，二甲苯同名，光學(xué)樹脂封固。染色結(jié)果：細(xì)胞核染成紅色，細(xì)胞質(zhì)染成藍(lán)色。注意事項(xiàng)：染液宜現(xiàn)配現(xiàn)用，保存時(shí)間最好不用超過(guò)48h，Giemsa對(duì)pH極敏感，緩沖液pH要調(diào)準(zhǔn)確。5/8/202433培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法5/8/202434培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法5/8/202435培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法3、細(xì)胞特殊的染色方法

Feulgen染色法

Coomassie染色法

PAS反應(yīng)法油紅O（oilredO）法免疫熒光染色法免疫酶染色法5/8/202436培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法Feulgen（福爾根）染色法原理：在60℃條件下，DNA分子中的嘌呤堿和脫氧核糖的連鍵可被1mol/L鹽酸水解打開，游離出的脫氧核糖醛基能與希夫（Schiff）試劑結(jié)合，形成紫紅色復(fù)合物。在此過(guò)程中，RNA不受影響，故染色具DNA特異性。準(zhǔn)確的溫度和鹽酸濃度，適宜的水溫、時(shí)間是成功的關(guān)鍵。水溫過(guò)度或不足均降低染色強(qiáng)度。

此法能對(duì)DNA進(jìn)行特異性染色試劑配制：

1mol/LHCL：濃HCL8.5ml＋蒸餾水91.5mlSchiff試劑：母液裝入棕色瓶，蓋緊，黑紙包裹置于暗處

染色過(guò)程：選用Carnoy固定液染色結(jié)果：細(xì)胞核染成粉紅色至紫紅色，胞質(zhì)為無(wú)色。5/8/202437培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法5/8/202438培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法考馬斯亮藍(lán)（Coomassie，BB）染色法原理：顯示細(xì)胞骨架、細(xì)胞內(nèi)微絲的染色方法試劑配制：固定液：0.1mol/LNaH2PO4·2H2O14.0mL＋0.1mol/LNa2HPO4·12H2O36.0mL＋蒸餾水50.9mL＋25％戊二醛50.0mL染色液：甲醇46.5mL＋冰醋酸7.0mL＋考馬斯亮藍(lán)0.02g染色過(guò)程：染色結(jié)構(gòu)：細(xì)胞內(nèi)的微絲呈現(xiàn)藍(lán)色。5/8/202439培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法5/8/202440培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法過(guò)碘酸席夫反應(yīng)法

（periodicacidSchiffreaction，PAS）

原理：過(guò)碘酸是一種強(qiáng)氧化劑，能將葡萄糖的乙二醇基（CHOH-CHOH）氧化成兩個(gè)游離的醛基，它們與Schiff試劑反應(yīng)生成紫紅色產(chǎn)物。

細(xì)胞內(nèi)糖類的染色方法試劑配制：染色過(guò)程：染色結(jié)果：細(xì)胞含糖原區(qū)呈紫紅色。5/8/202441培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法5/8/202442培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法細(xì)胞內(nèi)脂類的染色方法蘇丹（Sudan）Ⅲ/Ⅳ法蘇丹黑法

Lillie油紅O（oilredO）法

Cain硫酸尼羅藍(lán)（Nile）法鋨酸（osmicacid）法5/8/202443培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法5/8/202444培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法5/8/202445培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法油紅O（oilredO）法優(yōu)點(diǎn)：油紅O染色的脂肪比蘇丹Ⅲ法染的顏色要深，對(duì)微小的脂滴易于顯示，而且沉淀較少。

10％中性甲醛溶液的配制﹙pH7.0﹚：量取37％~40％甲醛20mL，蒸餾水180mL，加入0.8g磷酸二氫鈉﹙NaH2PO4·H2O﹚、1.3g磷酸氫二鈉﹙Na2HPO4﹚，配制成200mL10％中性甲醛溶液，密封備用。5/8/202446培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法5/8/202447培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法免疫熒光染色法原理：將已知抗體或抗原標(biāo)記熒光素，用此特異性試劑，浸染含有相應(yīng)抗原或抗體的組織細(xì)胞標(biāo)本，借助抗原抗體的特異性結(jié)合，于抗原或抗體的存在部位呈現(xiàn)熒光，從而可以定位標(biāo)本內(nèi)的抗原或抗體。免疫酶染色法

原理：ABC免疫酶染色法即卵白素-生物素-酶復(fù)合物法，是目前最敏感的免疫細(xì)胞化學(xué)染色法之一。其基本原理是將特異性第一抗體與組織細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合后，通過(guò)生物素化橋抗體與第一抗體結(jié)合，借助卵白素與生物素的天然親和性將生物素化辣根過(guò)氧化酶連接為復(fù)合物，通過(guò)酶促反應(yīng)，顯示組織細(xì)胞相應(yīng)的抗原。5/8/202448培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法5/8/202449培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法三、細(xì)胞生長(zhǎng)狀況有關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)方法細(xì)胞計(jì)數(shù)法細(xì)胞生長(zhǎng)曲線細(xì)胞分裂指數(shù)克隆形成率5/8/202450培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法1、細(xì)胞計(jì)數(shù)法細(xì)胞計(jì)數(shù)法是用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)目，以測(cè)定細(xì)胞增殖和調(diào)整細(xì)胞濃度。臺(tái)盼藍(lán)染色法用于檢測(cè)存活細(xì)胞數(shù)。

注：臺(tái)盼藍(lán)染色——排除檢測(cè)法，由于死細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性發(fā)生改變，染料可大量進(jìn)入?yún)s不能被排出，因而細(xì)胞被染色；而活細(xì)胞能排出細(xì)胞內(nèi)的染料，因而不易著色。5/8/202451培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法Trypanbluestainingofadultratcardiacmyocytesinprimaryculture.Livecellsexcludethebluedye,andsoappearclear.Deadcellstakeupthedyeandappearblue.5/8/202452培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法5/8/202453培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法5/8/202454培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法結(jié)果分析細(xì)胞密度

細(xì)胞數(shù)/ml＝（4大格細(xì)胞數(shù)之和/4）×104×稀釋倍數(shù)細(xì)胞存活百分率細(xì)胞活力（％）＝未著色細(xì)胞數(shù)÷總細(xì)胞數(shù)×100％5/8/202455培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法2、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線細(xì)胞生長(zhǎng)曲線是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中最基本的指標(biāo)，是觀察同一代細(xì)胞的增殖過(guò)程。根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線分析細(xì)胞增殖方法一：在同一規(guī)格的培養(yǎng)瓶中，接種同等量的同一代細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后每隔24h取出幾瓶細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，不同時(shí)刻的細(xì)胞數(shù)為縱坐標(biāo)，即為該細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。方法二：四氮唑鹽（MTT）比色法5/8/202456培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法3、細(xì)胞分裂指數(shù)細(xì)胞分裂指數(shù)是表示細(xì)胞增殖旺盛程度的指標(biāo)；以被測(cè)1000個(gè)細(xì)胞中的分裂細(xì)胞數(shù)來(lái)計(jì)算。方法：染色后血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)

細(xì)胞分裂指數(shù)＝細(xì)胞分裂相數(shù)/細(xì)胞總數(shù)（1000）×100％5/8/202457培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法4、克隆形成率克隆形成率所計(jì)數(shù)的細(xì)胞必為貼壁和有增殖能力的細(xì)胞，反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力。各種細(xì)胞克隆形成率差別很大，一般初代細(xì)胞克隆形成率弱，傳代細(xì)胞系強(qiáng)；二倍體細(xì)胞克隆形成率弱，轉(zhuǎn)化細(xì)胞系強(qiáng)；正常細(xì)胞克隆形成率弱，腫瘤細(xì)胞強(qiáng)。方法

克隆形成率＝克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)×100％注意：細(xì)胞要分散好，不能有細(xì)胞團(tuán)，接種密度不要過(guò)大。5/8/202458培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法5/8/202459培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法四、細(xì)胞生物活性的化學(xué)檢測(cè)法四氮唑鹽（MTT）比色法細(xì)胞蛋白質(zhì)含量測(cè)定法細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的3H-亮氨酸摻入試驗(yàn)細(xì)胞DNA合成的3H-TdR摻入試驗(yàn)5/8/202460培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測(cè)方法1、四氮唑鹽（MTT）比色法原理：活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能將MTT黃色溶液還原成不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物，并沉積于細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜（DMSO）和酸化的異丙醇或酸化的SDS等均能溶解細(xì)胞中的紫藍(lán)色結(jié)晶物，用