實驗五 植物組織總糖和還原糖含量的測定

*1實(Shi)驗五植物組織總糖和還原糖含量的測定（3,5-二硝基水楊酸法）

第一頁，共十二頁。2（1）掌握還原糖和總糖測定的基本原理；（2）學(xué)(Xue)習(xí)用3,5-二硝基水楊酸法測定還原糖的方法。一、實驗?zāi)康牡诙?，共十二頁。二、實?Yan)原理

還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類，單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖，其中乳糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀粉是非還原糖。利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來，對沒有還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進(jìn)行測定。還原糖的測定是糖定量測定的基本方法，其基本原理是用比色法對還原性的單糖進(jìn)行測定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量。第三頁，共十二頁。二、實驗(Yan)原理在堿性條件下，還原糖與3,5-二硝基水楊酸（DNS）共熱，3,5-二硝基水楊酸被還原為3-氨基-5-硝基水楊酸（棕紅色物質(zhì)），還原糖則被氧化成糖酸及其他產(chǎn)物。在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色深淺的程度成一定的比例關(guān)系，在540nm波長下測定棕紅色物質(zhì)的吸光值，查對標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算，就可以分別求出樣品中還原糖和總糖的含量。NaOH黃色棕紅色加熱第四頁，共十二頁。5三、儀器和(He)試劑1、儀器：電子天平、恒溫水浴鍋、分光光度計（722型）。2、試劑：2mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液、蒸餾水、3,5-二硝基水楊酸、6mol/L鹽酸、碘-碘化鉀、6mol/L氫氧化鈉第五頁，共十二頁。6四、實驗步(Bu)驟1、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取6支試管，按表加入試劑。以葡萄糖含量（mg/mL）為橫坐標(biāo)，光吸收值（OD540）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。第六頁，共十二頁。7四(Si)、實驗步驟2、樣品中還原糖的提?。?）稱取5g煙草葉片放入研缽中，加入5mL蒸餾水研磨成勻漿液。將勻漿液全部轉(zhuǎn)移至錐形瓶里。（2）再用10mL蒸餾水沖洗研缽，并將沖洗液全部轉(zhuǎn)移至錐形瓶里。（3）往錐形瓶里加入20mL蒸餾水，搖勻，于50℃保溫20min，不時攪拌。（4）用漏斗過濾，將濾液全部收集到燒杯中，最終用50mL容量瓶加蒸餾水定容至50mL，即為還原糖提取液。第七頁，共十二頁。8四、實驗(Yan)步驟3、樣品中總糖的提?。?）稱取0.5g煙草葉片放入研缽中，加入5mL蒸餾水研磨成勻漿液。將勻漿液全部轉(zhuǎn)移至錐形瓶里。（2）再用10mL蒸餾水沖洗研缽，并將沖洗液全部轉(zhuǎn)移至錐形瓶里。（3）往錐形瓶里加入10mL6mol/L鹽酸，搖勻，于沸水浴中加熱30min，不時攪拌。（4）取出1-2滴置于白瓷板上，加1滴碘-碘化鉀溶液檢測水解是否完全。如水解完全，則不呈現(xiàn)藍(lán)色。第八頁，共十二頁。9四(Si)、實驗步驟3、樣品中總糖的提?。?）水解完畢后，用漏斗過濾，將濾液全部收集到燒杯中。冷卻至室溫后加入6mL6mol/L氫氧化鈉溶液。（6）最終用100mL容量瓶加蒸餾水定容至100mL，即為總糖提取液。第九頁，共十二頁。10四、實(Shi)驗步驟4、樣品中含糖量的測定取5支試管，按表加入試劑。第十頁，共十二頁。11五、實驗(Yan)結(jié)果與分析

按下式計算出樣品中還原糖和總糖的百分含量。

式中，C為還原糖和總糖提取液的濃度，mg/mL；V為還原糖和總糖提取液總體積，mL；m為樣品質(zhì)量，g。第十一頁，共十二頁。內(nèi)容(Rong)總結(jié)1。電子天平、恒溫水浴鍋、分光光度計（722型）。（2）再用10mL蒸餾水沖洗研缽，并將沖洗液全部轉(zhuǎn)移至錐形瓶里。（4）取出1-2滴置