模塊二項目三任務(wù)一 細(xì)菌的實驗室診斷技術(shù)

細(xì)菌的實驗室診斷技術(shù)一、病料的采集、保存及運(yùn)送（一）采集病料的原則無菌、適時、含病原多部位、適量（二）采集病料的方法液體材料的采集方法實質(zhì)臟器的采集方法腸道及其內(nèi)容物的采集方法皮膚及羽毛的采集方法胎兒（三）病料的保存與運(yùn)送低溫。有冰的保溫瓶或4-10℃冰箱滅菌液體石蠟或30%甘油鹽水緩沖保存液二、細(xì)菌的形態(tài)檢查直接采集病料做細(xì)菌涂片分離培養(yǎng)后做細(xì)菌涂片三、細(xì)菌的分離培養(yǎng)分離出目的病原菌培養(yǎng)基的選擇菌落形態(tài)的觀察涂片四、細(xì)菌的生化試驗指示劑PH敏感范圍顏色變化酚紅（P.R）6.8-8.4黃紅溴麝香草酚蘭（B.T.B）6.0-7.4黃蘭甲基紅（M.R）4.4-6.4紅黃溴酚蘭（B.P.B）3.0-4.6黃蘭中性紅（N.R）6.8-8.0紅黃細(xì)菌學(xué)中常用的幾種酸堿指示劑⊕+--+1、糖分解試驗Eg：E.coli能發(fā)酵乳糖和葡萄糖，而沙門氏菌、傷寒桿菌只能發(fā)酵葡萄糖。糖類

丙酮酸酶(E.coli)

CO2和H2O

（產(chǎn)酸產(chǎn)氣）⊕:產(chǎn)酸產(chǎn)氣+:產(chǎn)酸不產(chǎn)氣

-：不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣①糖發(fā)酵試驗⊕+--+GE.coli

丙酮酸（pH≤4.5）(+)(紅色)G產(chǎn)氣桿菌

2丙酮酸

1乙酰甲基甲醇（pH＞5.4(-)(桔黃色)②甲基紅試驗(M.R.)+－G產(chǎn)氣桿菌

丙酮酸

乙酰甲基甲醇+O2

二乙酰+胍基化合物

紅色化合物

VP（+）

E.coli不生成乙酰甲基甲醇，故Vp（-）③VP試驗：

（Voges和Proskauer）－+

產(chǎn)氣桿菌分解枸櫞酸鹽（唯一碳源）生成碳酸鹽，并分解培養(yǎng)基中的銨鹽生成NH3，使培養(yǎng)基由酸性變?yōu)閴A性，使培養(yǎng)基中的B.T.B.由淡綠色轉(zhuǎn)為深藍(lán)色，稱為“+”。④枸櫞酸鹽利用試驗+－大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌

有些細(xì)菌（E.coli）能分解色氨酸生成吲哚，再與二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，生成玫瑰吲哚（紅色），“+”。⑤吲哚試驗（Indoletest）Indoletest（吲哚實驗）MRtest（甲基紅實驗）VPtest(Vi)citrateutilizationtest（枸櫞酸實驗）IMViC試驗－－鑒定腸道桿菌IMViC試驗大腸桿菌

++--

產(chǎn)氣桿菌

--++有些細(xì)菌（變形桿菌）能分解含硫氨基酸，生成H2S，若與醋酸鉛或硫酸亞鐵反應(yīng)，則生成硫化鉛或硫化亞鐵（黑色）。⑥硫化氫試驗變形桿菌能分解尿素（尿素酶）產(chǎn)氨，使培養(yǎng)基堿性增加（酚紅由黃色變?yōu)榧t色），“+”。而沙門氏菌為陰性。左：+右：-⑦尿素酶/脲酶試驗

氧化型細(xì)菌：必須有分子氧參加。發(fā)酵型細(xì)菌(兼性厭氧菌)：可以進(jìn)行無氧降解，但在有氧或無氧環(huán)境中都能分解葡萄糖。

O/F試驗一般多用葡萄糖進(jìn)行。產(chǎn)堿型細(xì)菌：不分解葡萄糖。利用此試驗可區(qū)別細(xì)菌代謝類型。⑧氧化—發(fā)酵試驗（O/Ftest）⑧氧化—發(fā)酵試驗（O/Ftest）高層斜面（0.1%葡萄糖、1%乳糖、1%蔗糖，酚紅）

⑨三糖鐵試驗（TSItest）

反應(yīng)TSIAIK/A(斜面紅色/底黃色)僅發(fā)酵葡萄糖，利用蛋白胨A/A(黃/黃)發(fā)酵葡萄糖、乳糖+(或)蔗糖AIK/AIK(紅/紅)均不發(fā)酵