高中生物3.1重組DNA技術的基本工具知識梳理新人教版選擇性必修3

3.1重組DNA技術的基本工具知識梳理基因工程：指按照人們的愿望，通過______轉(zhuǎn)基因______等技術，賦予生物新的______遺傳特性______，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的______生物類型和生物制品______。從技術操作層面看，由于基因工程是在DNA分子水平上進行設計和施工的，因此又叫______重組DNA技術______。（1）手段：按照人們的愿望，通過轉(zhuǎn)基因等技術，賦予生物新的遺傳特性。（2）目的：創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。（3）水平：分子水平。由于在DNA分子水平上進行設計和施工，因此又叫作重組DNA技術。（4）操作對象：基因（5）操作原理：基因重組（6）操作環(huán)境：體外（7）基本過程：剪切→拼接→導入→表達（8）操作結(jié)果：定向地改造生物的遺傳性狀，獲得符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品（9）優(yōu)點：定向改造生物體的性狀，目的性強（與誘變育種相比）育種周期短，克服遠緣雜交不親和障礙（與雜交育種相比）一、分子手術刀—限制性內(nèi)切核酸酶1.全稱和簡稱全稱：______限制性內(nèi)切核酸酶______簡稱：____________限制酶______2.來源：主要是從______原核生物____________中分離純化出來的3.作用：①能夠識別______雙鏈______DNA分子的某種______特定核苷酸序列。②使______每一條______鏈中______特定部位______的______磷酸二酯鍵____________斷開。4.作用部位：______磷酸二酯鍵____________5.識別序列：大多數(shù)限制酶的識別序列由______6______個核苷酸組成，也有少數(shù)限制酶的識別序列由______4______個、______8______個或____________其他數(shù)量______的核苷酸組成。6.切割結(jié)果：DNA分子經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式___黏性末端____和____________平末端____________。（1）EcoRⅠ限制酶切割EcoRⅠ識別序列為GAATTCEcoRⅠ切割部位為______GA______之間的磷酸二酯鍵（2）SmaⅠ限制酶切割SmaⅠ識別序列為CCCGGGSmaⅠ切割部位為______CG______之間的磷酸二酯鍵二、分子縫合針—DNA連接酶1.功能：將____________兩個DNA片段連接起來______，恢復被限制酶切開的______磷酸二酯鍵____________。2.分類和對比種類E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶來源______大腸桿菌______T4噬菌體特點只縫合______黏性______末端縫合______黏性___末端___平__末端作用恢復被限制酶切開的兩個核苷酸之間的______磷酸二酯鍵______3.比較與DNA有關的六種酶名稱作用部位作用底物作用結(jié)果限制酶___磷酸二酯鍵____DNA將DNA切成兩個片段DNA連接酶磷酸二酯鍵______DNA片段______將兩個______DNA片段______連接為一個DNA分子DNA聚合酶或熱穩(wěn)定DNA聚合酶磷酸二酯鍵脫氧核苷酸將單個脫氧核苷酸依次連接到單鏈末端DNA（水解）酶磷酸二酯鍵DNA將DNA片段水解為______單個脫氧核苷酸______解旋酶堿基對之間的______氫鍵______DNA將雙鏈DNA分子局部解旋為______單鏈______，形成兩條長鏈RNA聚合酶磷酸二酯鍵______核糖核苷酸______將單個核糖核苷酸依次連接到單鏈末端三、分子運輸車——載體1.作用：攜帶外源DNA片段進入受體細胞。2.種類：______質(zhì)粒、噬菌體______的衍生物、______動植物病毒______等。3.作為載體需具備的條件①______有一個至多個限制酶切割位點，供外源DNA片段（基因）插入其中____________；②______能在細胞中進行自我復制或整合到受體DNA上，隨受體DNA同步復制______；③______常有特殊的標記基因，便于重組DNA分子的篩選______；④______對受體細胞無害______。探究.實踐：DNA的粗提取與鑒定1.提取思路：利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學性質(zhì)方面存在的差異，選用適當?shù)奈锢砘蚧瘜W方法對他們進行提取。2.提取原理：①DNA不溶于______酒精______，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精，利用這一原理，可以初步分離DNA與蛋白質(zhì)；②DNA在______不同濃度的NaCl溶液______中的溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液。3.鑒定原理：在一定溫度下（沸水?。?，DNA遇______二苯胺試劑______會呈現(xiàn)藍色，因此______二苯胺試劑______可以作為鑒定DNA的試劑。4.比較DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同溶解規(guī)律2mol/LNaCl溶液0.14mol/LNaCl溶液DNA______溶解____________析出______5.DNA粗提取中的注意事項（1）本實驗不能用哺乳動物成熟的紅細胞作實驗材料，原因是______哺乳動物成熟的紅細胞______無細胞核（無DNA）?？蛇x用雞血細胞作材料。（2）加入洗滌劑后，動作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生大量的泡沫。加入______酒精______和用玻璃棒攪拌時，動作要輕緩，以免加劇DNA分子的斷裂，導致DNA分子不能形成______絮狀沉淀______。（3）二苯胺試劑要______現(xiàn)配現(xiàn)用______，否則會影響鑒定的效果。（4）