2.2.1-動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)課件

生活聯(lián)系：生活聯(lián)系：

燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植，但對(duì)于大面積燒傷病人來(lái)講，健康皮膚很有限，請(qǐng)同學(xué)們想一想如何來(lái)治療該病人？最基礎(chǔ)的是

——?jiǎng)游锛?xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體等2.2.1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)學(xué)習(xí)目標(biāo)：1、簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程、條件。2、了解動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用。3、對(duì)比說(shuō)出動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)原理、條件、結(jié)果、培養(yǎng)目的自主閱讀P44第5段，思考下列問(wèn)題：1、什么叫動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（animalcellculture)？2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理是什么？一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1、概念：從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它們分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。原理：細(xì)胞增殖如何進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)?放入二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程示意圖

結(jié)合問(wèn)題，閱讀書(shū)本，四人一組，討論寫(xiě)出動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程圖。學(xué)習(xí)活動(dòng)一：合作學(xué)習(xí)（結(jié)合問(wèn)題思考流程）1、為何動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞呢？2、如何將動(dòng)物組織分散成單個(gè)的細(xì)胞？3、胰蛋白酶的作用是什么？由此可說(shuō)明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是什么成分？4、培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面為何要光滑、無(wú)毒？5、培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)到什么時(shí)候就不再分裂、增殖？細(xì)胞貼壁接觸抑制

(contactinhibition)原代培養(yǎng)：通常將直接從動(dòng)物體內(nèi)取出的動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)接觸抑制后，貼滿瓶壁的細(xì)胞需要重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細(xì)胞增殖。這樣即為傳代培養(yǎng)。分類：10代內(nèi)的細(xì)胞；10-50代；50代以后。有關(guān)概念：1、選用組織時(shí)，一般用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做培養(yǎng)材料，而不用老齡動(dòng)物的，這是為什么？

因?yàn)橛g組織或器官上的細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，有絲分裂旺盛，容易培養(yǎng)。老齡動(dòng)物的細(xì)胞則相反。學(xué)習(xí)活動(dòng)二：尋根問(wèn)底，加深鞏固2、胰蛋白酶處理組織時(shí)要注意什么問(wèn)題？能夠用胃蛋白酶代替嗎？

控制好消化時(shí)間，太長(zhǎng)會(huì)消化細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)

不能，因?yàn)閮烧叩淖钸mPH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近.學(xué)習(xí)活動(dòng)二：尋根問(wèn)底，加深鞏固3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否最終培養(yǎng)成新個(gè)體？

不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動(dòng)物個(gè)體學(xué)習(xí)活動(dòng)二：尋根問(wèn)底，加深鞏固動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液原代培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞增殖部分細(xì)胞無(wú)限傳代去掉組織間蛋白動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體傳代培養(yǎng)多細(xì)胞動(dòng)物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的知識(shí)，認(rèn)為體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞應(yīng)該模擬內(nèi)環(huán)境的哪些條件呢？問(wèn)題探討：無(wú)菌、無(wú)毒全部的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)適宜的溫度和PH值必要的氣體條件3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件：1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清等。）3、溫度和PH36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、氣體環(huán)境：

O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）保證細(xì)胞順利的生長(zhǎng)增殖①生物制品的生產(chǎn)②用于基因工程③用于檢測(cè)有毒物質(zhì)④細(xì)胞的生理、病理、藥理研究4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用獲得細(xì)胞細(xì)胞的全能性植物體培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育無(wú)病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動(dòng)物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較細(xì)胞群體1．動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段中，最基礎(chǔ)的是

A.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)B.動(dòng)物細(xì)胞融合

C.單克隆抗體D.胚胎核移植

練一練~~~Let'stry!2．貼壁細(xì)胞的分裂方式具體是

A.無(wú)絲分裂B.有絲分裂

C.減數(shù)分裂D.增殖3．關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，不正確的是

A.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散開(kāi)來(lái)

B.通常將動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)

C.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培育的細(xì)胞全部衰老死亡

D.用于培養(yǎng)的細(xì)胞大都取自胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織

練一練~~~Let'stry!

根據(jù)動(dòng)物細(xì)胞核仍具有全能性的特點(diǎn),怎樣將動(dòng)物細(xì)胞的全能性表達(dá)?

再想一想利用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過(guò)程融合后的卵細(xì)胞二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)

1、理解核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物概念。2、掌握用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動(dòng)物過(guò)程

3、了解體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景及存在的問(wèn)題學(xué)習(xí)目標(biāo)：核移植技術(shù)1、細(xì)胞核移植技術(shù)概念？2、利用原理？3、什么叫做克隆動(dòng)物？由多利的誕生小組討論歸納：

1、概念：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。

原理：動(dòng)物細(xì)胞核的全能性。

用核移植的方法得到的動(dòng)物稱克隆動(dòng)物二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)2、核移植的種類胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（易）（難）學(xué)習(xí)活動(dòng)三：思考探究1997年，美國(guó)威斯康星州的一個(gè)奶牛場(chǎng)有一頭名叫盧辛達(dá)的奶牛，年產(chǎn)奶量為30.8t，創(chuàng)造了世界奶牛產(chǎn)奶量的最高記錄。目前世界各國(guó)高產(chǎn)牛奶場(chǎng)的奶牛，平均每年產(chǎn)量為十幾噸，而我國(guó)平均水平僅有3－4噸。

你能想辦法繁殖盧辛達(dá)的后代，使年產(chǎn)奶量為30.8t嗎？供體細(xì)胞培養(yǎng)（MⅡ卵母細(xì)胞）減數(shù)第二次分裂中期去核的卵母細(xì)胞供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞激活受體細(xì)胞，完成分裂、發(fā)育胚胎移植代孕牛子宮克隆牛3、過(guò)程：供體細(xì)胞（供核）細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞（MⅡ中期：供質(zhì)）去核無(wú)核卵母細(xì)胞注入細(xì)胞融合重組細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳基礎(chǔ)相同的犢牛歸納:1.共分成兩大階段：核移植和胚胎移植2.取卵細(xì)胞作受體細(xì)胞的原因是:它是最大的細(xì)胞,易操作,它發(fā)育可直接表達(dá)性狀核移植過(guò)程完成P49 討論：①加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育②保護(hù)瀕危物種，增加存活數(shù)量③克隆動(dòng)物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白④可以作為異種移植的供體4、應(yīng)用前景：⑤可以用于組織器官的移植5、存在問(wèn)題：①成功率低②克隆動(dòng)物存在健康問(wèn)題③克隆動(dòng)物食品的安全性問(wèn)題存有爭(zhēng)議小結(jié)：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

（概念、原理、過(guò)程、條件）

動(dòng)物體細(xì)胞核移植

（概念、原理、過(guò)程）從母羊甲的體細(xì)胞中取出細(xì)胞核，注入到母羊乙的去核卵母細(xì)胞中，融合后的細(xì)胞經(jīng)卵裂形成早期胚胎，再將胚胎移到另一只母羊丙的子宮內(nèi)，出生的小羊大多數(shù)性狀

A.難以預(yù)測(cè) B.像甲

C.像乙D.像丙

練一練~~~Let'stry!2.下列有關(guān)克隆的敘述，不正確的是

A.生物體通過(guò)體細(xì)胞進(jìn)行的無(wú)性繁殖B.將某種瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)繁殖成大量細(xì)胞C.扦插和嫁接實(shí)質(zhì)上也是克隆

D.將雞的某個(gè)DNA片段整合到小鼠的DNA中練一練~~~Let'stry!1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程：幼齡動(dòng)物取動(dòng)物器官和組織剪碎組織胰蛋白酶處理細(xì)胞培養(yǎng)單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液細(xì)胞懸液10代細(xì)胞原代培養(yǎng)50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無(wú)限傳代遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程：?jiǎn)栴}1、植物組織培養(yǎng)過(guò)程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的嗎？２、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的嗎？３、為何動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的呢？４、如何將動(dòng)物組織分散成單個(gè)的細(xì)胞呢？５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說(shuō)明細(xì)胞間的物質(zhì)是什么成份？沒(méi)有是成塊的組織細(xì)胞靠在一起,彼此限制了細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖先用剪刀剪碎,后用蛋白酶處理胰蛋白酶水解蛋白質(zhì)細(xì)胞間的成份是蛋白質(zhì)(膠原蛋白等)思考題６、細(xì)胞膜的主要成份是什么？７、胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？８、既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉，那將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞要注意什么問(wèn)題呢？９、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？10、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)取材時(shí)，一般是取胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官，請(qǐng)解釋原因？蛋白質(zhì)和磷脂能注意時(shí)間的控制

不能，因?yàn)閮烧叩淖钸mPH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官分裂、增殖旺盛11、貼附性細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)表面為何要光滑、無(wú)毒？12、培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)到什么時(shí)候就不再分裂、增殖？13、如果此時(shí)細(xì)胞數(shù)量并未達(dá)到人們的需求，應(yīng)該怎樣辦？細(xì)胞株和細(xì)胞系通常是培養(yǎng)多少代的細(xì)胞?易于培養(yǎng)細(xì)胞貼壁，進(jìn)行生長(zhǎng)增殖

當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞分裂就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象叫接觸抑制。

將貼滿瓶壁的細(xì)胞用胰蛋白酶處理，然后繼續(xù)增殖。這樣的過(guò)程叫做傳代培養(yǎng)思考題14、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？15、傳代培養(yǎng)的細(xì)胞能一直傳代下去嗎？16、有些為何能一直傳下去嗎？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是為了得到這些細(xì)胞嗎？17、人類一般保存的是哪類細(xì)胞呢？為什么？用于植皮的細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)該不多于多少代？

上述過(guò)程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是原代培養(yǎng)，之后轉(zhuǎn)移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)不是都能發(fā)生突變，朝著癌細(xì)胞方向發(fā)展不是保存10代以內(nèi)的細(xì)胞；因?yàn)?0－50部分細(xì)胞的細(xì)胞核型可能發(fā)生變化，有少部分還發(fā)生突變向癌細(xì)胞方向發(fā)展；10代思考題

體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆牛是對(duì)盧辛達(dá)進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？不是，克隆動(dòng)物絕大部分DNA來(lái)自供體細(xì)胞核，但核外還有少部分DNA（如線粒體DNA）來(lái)自受體卵母細(xì)胞。此外，還會(huì)受到不同環(huán)境的影響思考：長(zhǎng)風(fēng)破浪會(huì)有時(shí)，直掛云帆濟(jì)滄海。努力，終會(huì)有所收獲，功夫不負(fù)有心人。以銅為鏡，可以正衣冠；以古為鏡，可以知興替；以人為鏡，可以明得失。前進(jìn)的路上，要不斷反思、關(guān)照自己的不足，學(xué)習(xí)更多東西，更進(jìn)一步。窮則獨(dú)善其身，達(dá)則兼濟(jì)天下?，F(xiàn)代社會(huì)，有很多人，鉆進(jìn)錢(qián)眼，不惜違法亂紀(jì)；做人，窮，也要窮的有骨氣！古之立大事者，不惟有超世之才，亦必有堅(jiān)忍不拔之志。想干成大事，除了勤于修煉才華和能力，更重要的是要能堅(jiān)持下來(lái)。士不可以不弘毅，任重而道遠(yuǎn)。仁以為己任，不亦重乎?死而后已，不亦遠(yuǎn)乎?心中有理想，腳下的路再遠(yuǎn)，也不會(huì)迷失方向。太上有立德，其次有立功，其次有立言，雖久不廢，此謂不朽。任何事業(yè)，學(xué)業(yè)的基礎(chǔ)，都要以自身品德的修煉為根基。飯疏食，飲水，曲肱而枕之，樂(lè)亦在其中矣。不義而富且貴，于我如浮云。財(cái)富如浮云，生不帶來(lái)，死不帶去，真正留下的，是我們對(duì)這個(gè)世界的貢獻(xiàn)。英雄者，胸懷大志，腹有良策，有包藏宇宙之機(jī)，吞吐天地之志者也英雄氣概，威壓八萬(wàn)里，體恤弱小，善德加身。老當(dāng)益壯，寧移白首之心；窮且益堅(jiān)，不墜青云之志老去的只是身體，心靈可以永遠(yuǎn)保持豐盛。樂(lè)民之樂(lè)者，民亦樂(lè)其樂(lè)；憂民之憂者，民亦憂其憂。做領(lǐng)導(dǎo)，要能體恤下屬，一味打壓，盡失民心。勿以惡小而為之，勿以善小而不為。越是微小的事情，越見(jiàn)品質(zhì)。學(xué)而不知道，與不學(xué)同；知而不能行，與不知同。知行合一，方可成就事業(yè)。以家為家，以鄉(xiāng)為鄉(xiāng)，以國(guó)為國(guó)，以天下為天下。若是天下人都能互相體諒，紛擾世事可以停歇。志不強(qiáng)者智不達(dá)，言不信者行不果。立志越高，所需要的能力越強(qiáng)，相應(yīng)的，逼迫自己所學(xué)的，也就越多。臣心一片磁針石，不指南方不肯休。忠心，也是很多現(xiàn)代人缺乏的精神。吾日三省乎吾身。為人謀而不忠乎?與朋友交而不信乎?傳不習(xí)乎?若人人皆每日反省自身，世間又會(huì)多出多少君子。人人好公，則天下太平；人人營(yíng)私，則天下大亂。給世界和身邊人，多一點(diǎn)寬容，多一份擔(dān)當(dāng)。為天地立心，為生民立命，為往圣繼絕學(xué)，為萬(wàn)世開(kāi)太平。立千古大志，乃是圣人也。丹青不知老將至，貧賤于我如浮云。淡看世間事，心情如浮云天行健，君子以自強(qiáng)不息。地勢(shì)坤，君子以厚德載物。君子，生在世間，當(dāng)靠自己拼搏奮斗。博學(xué)之，審問(wèn)之，慎思之，明辨之，篤行之。進(jìn)學(xué)之道，一步步逼近真相，逼近更高。百學(xué)須先立志。天下大事，不立志，難成！海納百川，有容乃大；壁立千仞，無(wú)欲則剛做人，心胸要寬廣。其身正，不令而行；其身不正，雖令不從。身心端正，方可知行合一。子曰:“知者不惑，仁者不憂，勇者不懼?！闭嬲M(jìn)者，不會(huì)把時(shí)間耗費(fèi)在負(fù)性情緒上。好學(xué)近乎知，力行近乎仁，知恥近乎勇。力行善事，有羞恥之心，方可成君子。操千曲爾后曉聲，觀千劍爾后識(shí)器做學(xué)問(wèn)和學(xué)技術(shù)，都需要無(wú)數(shù)次的練習(xí)。第一個(gè)青春是上帝給的；第二個(gè)的青春是靠自己努力當(dāng)眼淚流盡的時(shí)候，留下的應(yīng)該是堅(jiān)強(qiáng)。人總是珍惜未得到的，而遺忘了所擁有的。誰(shuí)傷害過(guò)你，誰(shuí)擊潰過(guò)你，都不重要。重要的是誰(shuí)讓你重現(xiàn)笑容。幸運(yùn)并非沒(méi)有恐懼和煩惱；厄運(yùn)并非沒(méi)有安慰與希望。你不要一直不滿人家，你應(yīng)該一直檢討自己才對(duì)。不滿人家，是苦了你自己。最深的孤獨(dú)不是長(zhǎng)久的一個(gè)人，而是心里沒(méi)有了任何期望。要銘記在心；每一天都是一年中最完美的日子。只因幸福只是一個(gè)過(guò)往，沉溺在幸福中的人；一直不知道幸福卻很短暫。一個(gè)人的價(jià)值，應(yīng)該看他貢獻(xiàn)什么，而不應(yīng)當(dāng)看他取得什么。做個(gè)明媚的女子。不傾國(guó)，不傾城，只傾其所有過(guò)的生活。生活就是生下來(lái)，活下去。人生最美的是過(guò)程，最難的是相知，最苦的是等待，最幸福的是真愛(ài)，最后悔的是錯(cuò)過(guò)。兩個(gè)人在一起能過(guò)就好好過(guò)！不能過(guò)就麻利點(diǎn)分開(kāi)。當(dāng)一個(gè)人真正覺(jué)悟的一刻，他放下追尋外在世界的財(cái)富，而開(kāi)始追尋他內(nèi)心世界的真正財(cái)富。人若軟弱就是自己最大的敵人。日出東海落西山，愁也一天，喜也一天。遇事不轉(zhuǎn)牛角尖，人也舒坦，心也舒坦。烏云總會(huì)被驅(qū)散的，即使它籠罩了整個(gè)地球。心態(tài)便是黑暗中的那一盞明燈，可以照亮整個(gè)世界。生活不是單行線，一條路走不通，你可以轉(zhuǎn)彎。給我一場(chǎng)車(chē)禍。要么失憶。要么死。有些人說(shuō)：我愛(ài)你、又不是說(shuō)我只愛(ài)你一個(gè)。生命太過(guò)短暫，今天放棄了明天不一定能得到。刪掉了關(guān)于你的一切，唯獨(dú)刪不掉關(guān)于你的回憶。任何事都是有可能的。所以別放棄，相信自己，你可以做到的。、相信自己，堅(jiān)信自己的目標(biāo)，去承受常人承受不了的磨難與挫折，不斷去努力、去奮斗，成功最終就會(huì)是你的！既然愛(ài)，為什么不說(shuō)出口，有些東西失去了，就在也回不來(lái)了！對(duì)于人來(lái)說(shuō)，問(wèn)心無(wú)愧是最舒服的枕頭。嫉妒他人，表明他人的成功，被人嫉妒，表明自己成功。在人之上，要把人當(dāng)人；在人之下，要把自己當(dāng)人。人不怕卑微，就怕失去希望，期待明天，期待陽(yáng)光，人就會(huì)從卑微中站起來(lái)，帶著封存夢(mèng)想去擁抱藍(lán)天。成功需要成本，時(shí)間也是一種成本，對(duì)時(shí)間的珍惜就是對(duì)成本的節(jié)約。人只要不失去方向，就不會(huì)失去自己。過(guò)去的習(xí)慣，決定今天的你，所以，過(guò)去的懶惰，決定你今天的一敗涂地。讓我記起容易，但讓我忘記我怕我是做不到。不要跟