高效液相色譜分析原理 液相色譜工作原理

第第頁(yè)高效液相色譜分析原理液相色譜工作原理高效液相色譜和氣相色譜在基本理論方面沒有顯著不同，它們之間的重點(diǎn)差別在于作為流動(dòng)相的液體與氣體之間的性質(zhì)的差別。高效液相色譜分析原理：一、高效液相色譜分析的流程：由泵將儲(chǔ)液瓶中的溶劑吸入色譜系統(tǒng)，然后輸出，經(jīng)流量與壓力測(cè)量之后，導(dǎo)入進(jìn)樣器。被測(cè)物由進(jìn)樣器注入，并隨流動(dòng)相通過色譜柱，在柱上進(jìn)行分別后進(jìn)入檢測(cè)器，檢測(cè)信號(hào)由數(shù)據(jù)處理設(shè)備采集與處理，并記錄色譜圖。廢液流入廢液瓶。碰到多而雜的混合物分別極性范圍比較寬、還可用梯度掌控器作梯度洗脫。這和氣相色譜的程序升溫仿佛，不同的是氣相色譜更改溫度，而HPLC更改的是流動(dòng)相極性，使樣品各組分在較佳條件下得以分別。二、高效液相色譜的分別過程：同其他色譜過程一樣，HPLC也是溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行的一種連續(xù)多次交換過程。它借溶質(zhì)在兩相間調(diào)配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分別。二、高效液相色譜的分別過程：同其他色譜過程一樣，HPLC也是溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行的一種連續(xù)多次交換過程。它借溶質(zhì)在兩相間調(diào)配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分別。開始樣品加在柱頭上，假設(shè)樣品中含有3個(gè)組分，A、B和C，隨流動(dòng)相一起進(jìn)入色譜柱，開始在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行調(diào)配。調(diào)配系數(shù)小的組分A不易被固定相阻留，較早地流杰出譜柱。調(diào)配系數(shù)大的組分C在固定相上滯留時(shí)間長(zhǎng)，較晚流杰出譜柱。組分B的調(diào)配系數(shù)介于A，C之間，第二個(gè)流杰出譜柱。若一個(gè)含有多個(gè)組分的混合物進(jìn)入系統(tǒng)，則混合物中各組分按其在兩相間調(diào)配系數(shù)的不同先后流杰出譜柱，達(dá)到分別之目的。不同組分在色譜過程中的分別情況，首先取決于各組分在兩相間的調(diào)配系數(shù)、吸附本領(lǐng)、親和力等是否有差異，這是熱力學(xué)平衡問題，也是分別的首要條件。其次，當(dāng)不同組分在色譜柱中運(yùn)動(dòng)時(shí)，譜帶隨柱長(zhǎng)展寬，分別情況與兩相之間的擴(kuò)散系數(shù)、固定相粒度的大小、柱的填充情況以及流動(dòng)相的流速等有關(guān)。所以分別最后效果則是熱力學(xué)與動(dòng)力學(xué)兩方面的綜合效益。高效液相色譜之色譜柱的清洗方法

高效液相色譜是20世紀(jì)60時(shí)代后期進(jìn)展起來的分別分析技術(shù)，是現(xiàn)代分別測(cè)定的緊要手段。問世以來，因其具有分別效能高、分析速度快、檢測(cè)靈敏度好、能分析高沸點(diǎn)但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、藥物及臨床分析。高效液相色譜柱是消耗品，會(huì)隨使用時(shí)間或進(jìn)樣的次數(shù)加添，顯現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或顯現(xiàn)肩峰，柱效下降。需要定期進(jìn)行徹底清洗和再生，不同的色譜柱清洗方法各不相同比如：

1、反相柱

分別用甲醇:水=90:10，純甲醇（HPLC級(jí)），異丙醇（HPLC級(jí)），二氯甲烷（HPLC級(jí)）等溶劑作為流動(dòng)相，依次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。

2、正相柱

分別用正己烷（HPLC級(jí)），異丙醇（HPLC級(jí)），二氯甲烷（HPLC級(jí)），甲醇（HPLC級(jí)）等溶劑做流動(dòng)相，順次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積（異丙醇粘度大，可降低流速，避開壓力過高）.注意使用溶劑的次序不要顛倒，用甲醇沖洗完后，再以相反的次序沖洗至正己烷，全部的流動(dòng)相必需嚴(yán)格脫水。

3、離子交換柱

長(zhǎng)時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣，將導(dǎo)致色譜柱離子交換本領(lǐng)下降，用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽(yáng)離子柱再生，反之，用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。

另外，還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動(dòng)相做正方向