原子吸取分光光度計(jì)的配置與選型 光度計(jì)操作規(guī)程

第第頁(yè)原子吸取分光光度計(jì)的配置與選型光度計(jì)操作規(guī)程原子吸取分光光度計(jì)的緊要分析方法有三種一，原子吸取火焰法原子吸取的火焰法作為一種常用的分析方法被廣泛的使用，對(duì)于一些常見的，含量在確定可測(cè)范圍內(nèi)金屬元素而言，火焰原子吸取法簡(jiǎn)單而快捷，結(jié)果原子吸取分光光度計(jì)的緊要分析方法有三種

一，原子吸取火焰法

原子吸取的火焰法作為一種常用的分析方法被廣泛的使用，對(duì)于一些常見的，含量在確定可測(cè)范圍內(nèi)金屬元素而言，火焰原子吸取法簡(jiǎn)單而快捷，結(jié)果的精準(zhǔn)度特別高。

二，原子吸取石墨爐法

原子吸取石墨爐法是原子吸取應(yīng)用中經(jīng)典的方法，一般的石墨爐可以瞬時(shí)升溫至3000℃，對(duì)于一些含量極低的或者一些高溫元素的定量檢測(cè)特別有效，甚至很多儀器和分析專家認(rèn)為，之所以原子吸取分光光度計(jì)沒有被淘汰至今還在廣泛的適用正是由于原子吸取的石墨爐法的精度及最小檢測(cè)極限是目前全部測(cè)試方法中幾乎無可替代的。

三，原子吸取氫化物法

也稱冷原子法，一般用于測(cè)定汞、砷之類的元素。

所以在原子吸取分光光度計(jì)的選擇上，我們首先要選定緊要是用哪一種方法去做金屬元素的含量測(cè)定，然后依據(jù)測(cè)定方法去確定原子吸取分光光度計(jì)的配置。

如何了解我們需要使用的方法是什么呢？有以下三點(diǎn)必需注意

一，測(cè)定的金屬元素種類

二，測(cè)定的金屬元素的大致含量范圍

三，測(cè)定的金屬元素的基體

了解了以上三點(diǎn)以后，我們就可以依據(jù)不同的元素，不同的含量，不同的基體去選擇不同的配置方案。

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相關(guān)熱詞：

等離子清洗機(jī),反應(yīng)釜,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,高精度溫濕度計(jì),露點(diǎn)儀,高效液相色譜儀價(jià)格,霉菌試驗(yàn)箱,跌落試驗(yàn)臺(tái),離子色譜儀價(jià)格,噪聲計(jì),高壓滅菌器,集菌儀,接地電阻測(cè)試儀型號(hào),柱溫箱,旋渦混合儀,電熱套,場(chǎng)強(qiáng)儀萬能材料試驗(yàn)機(jī)價(jià)格,洗瓶機(jī),勻漿機(jī),耐候試驗(yàn)箱,熔融指數(shù)儀,透射電子顯微鏡。事實(shí)上，分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)原理和工作原理，允許吸光值在確定范圍內(nèi)變化，即儀器有確定的精準(zhǔn)度和精準(zhǔn)明確度。如EppendorfBiophotometer的精準(zhǔn)度≤1.0%（1A）。這樣多次測(cè)試的結(jié)果在均值1.0%左右之間變動(dòng)，都是正常的。另外，還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值，離子濃度等：在測(cè)試時(shí)，離子濃度太高，也會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)漂移，因此建議使用pH值確定、離子濃度較低的緩沖液，如TE，可大大穩(wěn)定讀數(shù)。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避開存在一些細(xì)小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測(cè)試效果。為了最大程度削減顆粒對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值可以在0.1—1.5A。在此范圍內(nèi)，顆粒的干擾相對(duì)較小，結(jié)果穩(wěn)定。從而意味著樣品的濃度不能過低，或者過高（超過光度計(jì)的測(cè)試范圍）。最后是操作因素，如混合要充分，否則吸光值太低，甚至顯現(xiàn)負(fù)值；混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物，否則讀數(shù)漂移猛烈；必需使用相同的比色杯測(cè)試空白液和樣品，否則濃度差異太大；換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致；不能接受窗口磨損的比色杯；樣品的體積必需達(dá)到比色杯要求的最小體積等多個(gè)操作事項(xiàng)。

除了核酸濃度，分光光度計(jì)同時(shí)顯示幾個(gè)特別緊要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評(píng)估樣品的純度，由于蛋白的吸取峰是280nm。純潔的樣品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。假如比值低于1.8或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純潔的核酸A260/A230的比值大于2.0、A320檢測(cè)溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，A320一般是0、

蛋白質(zhì)的直接定量（UV法）

這種方法是在280nm波長(zhǎng)，直接測(cè)試蛋白。選擇Warburg公式，光度計(jì)可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應(yīng)的換算方法，將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。蛋白質(zhì)測(cè)定過程特別簡(jiǎn)單，先測(cè)試空白液，然后直接測(cè)試蛋白質(zhì)。由于緩沖液中存在一些雜質(zhì)，一般要除去320nm的“背景”信息，設(shè)定此功能“開”。與測(cè)試核酸仿佛，要求A280的吸光值至少大于0.1A，較佳的線性范圍在1.0—1.5之間。試驗(yàn)中選擇Warburg公式顯示樣品濃度時(shí)，發(fā)覺讀數(shù)“漂移”。這是一個(gè)正常的現(xiàn)象。事實(shí)上，只要察看A280的吸光值的變化范圍不超過1%，表明結(jié)果特別穩(wěn)定。漂移的原因是由于Warburg公式吸光值換算成濃度，乘以確定的系數(shù)，只要吸光值有少許更改，濃度就會(huì)被放大，從而顯得結(jié)果很不穩(wěn)定。蛋白質(zhì)直接定量方法，適合測(cè)試較純潔、成分相對(duì)單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對(duì)于比色法來說，速度快，操作簡(jiǎn)單；但是簡(jiǎn)單受到平行物質(zhì)的干擾，如DNA的干擾；另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。

比色法蛋白質(zhì)定量

蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的混合物，比色法測(cè)定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分：氨基酸（如酪氨酸，絲氨酸）與外加的顯色基團(tuán)或者染料反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān)，從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。帶您真正認(rèn)得原子吸取分光光度計(jì)

一、原子吸取分光光度計(jì)的工作原理：

元素在熱解石墨爐中被加熱原子化，成為基態(tài)原子蒸汽，對(duì)空心陰極燈發(fā)射的特征輻射進(jìn)行選擇性吸取。在確定濃度范圍內(nèi)，其吸取強(qiáng)度與試液中被的含量成正比。其定量關(guān)系可用郎伯—比耳定律，A=—lgI/Io=—lgT=KCL，式中I為透射光強(qiáng)度；I0為發(fā)射光強(qiáng)度；T為透射比；L為光通過原子化器光程（長(zhǎng)度），每臺(tái)儀器的L值是固定的；C是被測(cè)樣品濃度；所以A=KC。

利用待測(cè)元素的共振輻射，通過其原子蒸汽，測(cè)定其吸光度的裝置稱為原子吸取分光光光源，原子化器，光學(xué)系統(tǒng)和檢測(cè)系統(tǒng)。它緊要用于痕量元素雜質(zhì)的分析，具有靈敏度高、精準(zhǔn)明確度好和選擇性好三大緊要優(yōu)點(diǎn)。廣泛應(yīng)用于特種氣體，金屬有機(jī)化合物，金屬醇鹽中微量元素的分析。但是測(cè)定每種元素均需要相應(yīng)的空心陰極燈，這對(duì)檢測(cè)工作帶來不便。

二、原子吸取分光光度計(jì)的特點(diǎn)：

1、靈敏度高：原子吸取分光光度法測(cè)定大多數(shù)金屬元素的相對(duì)靈敏度為1.0×10—8～1.0×10—10g？mL—1,非火焰原子吸取分光光度法的確定靈敏度為1.0×10—12～1.0×10—14g。這是由于原子吸取分光光度法測(cè)定的是占原子總數(shù)99％以上的基態(tài)原子，而原子發(fā)射光譜測(cè)定的是占原子總數(shù)不到1％的激發(fā)態(tài)原子，所以前者的靈敏度和精準(zhǔn)度比后者高的多。

2、精密度好：由于溫度的變化對(duì)測(cè)定影響較小，該法具有良好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，精密度好。一般儀器的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1％～3％，性能好的儀器可達(dá)0.1％～0.5%。

3、選擇性強(qiáng)：由于原子吸取譜線僅發(fā)生在主線系，而且譜線很窄，線重疊幾率較發(fā)射光譜要小很多，多以光譜干擾較小選擇性強(qiáng)，而且光譜干擾簡(jiǎn)單克服。大多數(shù)情況下，共存元素不對(duì)原子吸取光譜產(chǎn)生干擾。由于選擇性強(qiáng)，使得分析精準(zhǔn)快速。分析一個(gè)元素只需數(shù)十秒至數(shù)分鐘。

缺點(diǎn)：每測(cè)驗(yàn)一種元素就要使用一種元素?zé)舳沟貌僮髀闊?。?duì)于某些多而雜的樣品分析，尚存某些干擾問題需要解決。如何進(jìn)一步提高靈敏度和降低干擾是當(dāng)前和今后原子吸取分析工討論的緊要課題。

三、原子吸取分光光度計(jì)的應(yīng)用：

原子吸取分光光度計(jì)現(xiàn)巳廣泛用于各個(gè)分析領(lǐng)域，緊要有四個(gè)方面：理論討論；元素分析；有機(jī)物分析；金屬化學(xué)形態(tài)分析

1、在理論討論中的應(yīng)用

原子吸取可作為物理和物理化學(xué)的一種試驗(yàn)手段，對(duì)物質(zhì)的一些基本性能進(jìn)行測(cè)定和討論。電熱原子化器簡(jiǎn)單做到掌控蒸發(fā)過程和原子化過程，所以用它測(cè)定一些基本參數(shù)有很多優(yōu)點(diǎn)。用電熱原子化器所測(cè)定的一些有元素離開機(jī)體的活化能、氣態(tài)原子擴(kuò)散系數(shù)、解離能、振子強(qiáng)度、光譜線輪廓的變寬、溶解度、蒸氣壓等。

2、在元素分析中應(yīng)用

原子吸取光譜分析，由于其靈敏度高、干擾少、分析復(fù)合快速，現(xiàn)巳廣泛地應(yīng)用于工業(yè)、農(nóng)業(yè)、生化、地質(zhì)、冶金、食品、環(huán)保等各個(gè)領(lǐng)域，目前原子吸取巳成為金屬元素分析的比較為有力工具之一，而且在很多領(lǐng)域巳作為標(biāo)準(zhǔn)分析方法。原子吸取光譜分析的特點(diǎn)決議了它在地質(zhì)和冶金分析中的緊要地位，它不僅取代了很多一般的濕法化學(xué)分析，而且還與X—射線熒光分析，甚至與中子活化分析有著同等的地位。目前原子吸取法巳用來測(cè)定地質(zhì)樣品中40多種元素，并且大部分能夠達(dá)到充分的靈敏度和很好的精密度。鋼鐵、合金和高純金屬中多種痕量元素的分析現(xiàn)在也多用原子吸取法。原子吸取在食品分析中越來越廣泛。食品和飲料中的20多種元素巳有充分的原子吸取分析方法。生化和臨床樣品中必需元素和有害元素的分析現(xiàn)巳接受原子吸取法。有關(guān)石油產(chǎn)品、陶瓷、農(nóng)業(yè)樣品、藥物和涂料中金屬元素的原子吸取分析的文獻(xiàn)報(bào)道近些年來越來越多。水體和大氣等環(huán)境樣品的微量金屬元素分析巳成為原子吸取分析的緊要領(lǐng)域之一、利用間接原子吸取法尚可測(cè)定某些非金屬元素。

3、在有機(jī)物分析中的應(yīng)用

利用間接法可以測(cè)定多種有機(jī)物。8—羥基喹啉（Cu）、醇類（Cr）、醛類（Ag）、酯類（Fe）、酚類（Fe）、聯(lián)乙酰（Ni）、酞酸（Cu）、脂肪胺（co）、氨基酸（Cu）、維生素C（Ni）、氨茴酸（Co）、雷米封（Cu）、甲酸奎寧（Zn）、有機(jī)酸酐（Fe）、苯甲基盤尼西林（Cu）、葡萄糖（Ca）、環(huán)氧化物水解酶（PbO、含鹵素的有機(jī)化合物（Ag）等多種有機(jī)物，均通過