羊地方性流產(chǎn)診斷技術(shù)-編制說明

注：提交時黑色和藍色字均不可刪減。沒有的應寫“無”。

一、工作簡況

（一）任務來源

本項目由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜牧獸醫(yī)局提出，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部列為2022年國家標準制

修訂項目計劃，任務編號20220275-T-326。

羊地方性流產(chǎn)又稱羊衣原體病，是由流產(chǎn)衣原體引起的一種傳染病，以發(fā)熱、

流產(chǎn)、死產(chǎn)和產(chǎn)下生命力不強的弱羔為主要特征。人可能通過接觸感染性流產(chǎn)物

或分娩物或在實驗室處理衣原體培養(yǎng)物時不小心受到感染，從而導致亞臨床感染，

甚至發(fā)生急性流感樣疾病。懷孕后期羊的地方性流產(chǎn)已在世界上許多養(yǎng)羊地區(qū)引

起嚴重的繁殖損失。

WOAH將該病列為法定報告疫病，我國將其列為三類動物疫病。我國還沒

有羊地方性流產(chǎn)診斷技術(shù)的相關標準。本標準的制定，將規(guī)范羊地方性流產(chǎn)的診

斷，及時確診羊地方性流產(chǎn)，提出人間流產(chǎn)衣原體的預警，抵制境外勢力生物武

器的襲擊，保障我國的國防安全。

（二）起草單位和主要起草人及其所做的工作

中國動物衛(wèi)生與流行病學中心接到此任務后，成立了項目組并開展國家標準

的制定工作，在項目實施過程中，山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院、安徽科技學院、

廣西壯族自治區(qū)動物疫病預防控制中心作為合作單位參與了標準的制定任務。參

與制定本標準的人員如下：

孫翔翔中國動物衛(wèi)生與流行病學中心項目主持、標準起草；

孫淑芳中國動物衛(wèi)生與流行病學中心技術(shù)指導、征求意見；

孫明軍中國動物衛(wèi)生與流行病學中心樣品檢測、方法復核；

樊曉旭中國動物衛(wèi)生與流行病學中心樣品檢測、方法復核；

劉蒙達中國動物衛(wèi)生與流行病學中心方法復核、征求意見；

張皓博中國動物衛(wèi)生與流行病學中心方法復核、征求意見；

焉鑫中國動物衛(wèi)生與流行病學中心方法復核、征求意見；

1

田莉莉中國動物衛(wèi)生與流行病學中心方法復核、征求意見；

孫世雄中國動物衛(wèi)生與流行病學中心方法復核、征求意見；

王金良山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院方法復核、征求意見；

張訓海安徽科技學院方法復核、征求意見；

熊毅廣西壯族自治區(qū)動物疫病預防控制中心方法復核、征求意見；

何奇松廣西壯族自治區(qū)動物疫病預防控制中心方法復核、征求意見；

邵衛(wèi)星中國動物衛(wèi)生與流行病學中心技術(shù)指導；

范偉興中國動物衛(wèi)生與流行病學中心技術(shù)指導。

（三）主要工作過程

1.起草階段

標準起草階段得到了國家重點研發(fā)計劃“重大動物源性病原體傳入風險

評估和預警技術(shù)研究(2017YFC1200500)”的支持，項目組在前期查閱資料的

基礎之上，啟動本標準的起草工作。編寫過程中主要參考了世界動物衛(wèi)生組

織（WOAH）發(fā)布的《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》關于羊地方性流產(chǎn)

（ManualofDiagnosticTestsandVaccineforTerrestrialAnimals，part3section

3.8chapter3.8.5ENZOOTICABORTIONOFEWES(OVINE

CHLAMYDIOSIS)(INFECTIONWITHCHLAMYDIOSISABORTUS）和中

國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所發(fā)布的《動物衣原體病診斷技術(shù)》（N/T

562-2015）等國內(nèi)外相關標準和技術(shù)法規(guī)。

起草人與德國細菌感染和人獸共患病研究所衣原體病實驗室負責人聯(lián)

系，就羊地方性流產(chǎn)的診斷技術(shù)征求意見，得到的反饋是德國的技術(shù)與

WOAH推薦的診斷技術(shù)基本一致，在實驗室中目前應用最多的方法是熒光

定量PCR方法和ELISA方法。結(jié)合國際專家的意見，同時綜合考慮WOAH

手冊規(guī)定和我國的實際情況，最終在標準的起草過程中，加入了常規(guī)PCR、

熒光定量PCR和ELISA等方法。

起草標準的同時，項目組就羊地方性流產(chǎn)試驗方法的適用性在實驗室內(nèi)

進行了重復性試驗，先后進行了常規(guī)PCR、熒光定量PCR和ELISA等診斷

方法的驗證工作，證實了這些試驗方法的準確性與可靠性。

2.征求意見階段

2

在上述資料收集分析、試驗研究、驗證試驗的基礎上形成了標準征求意

見稿。并于2020年在國內(nèi)單位征求意見。征求意見的單位包括中國動物衛(wèi)

生與流行病學中心、北京市農(nóng)林科學院畜牧獸醫(yī)研究所、中國動物疫病預防

控制中心和安徽科技學院等4家單位，這些單位包括了科研院所、大專院校

和疫病控制機構(gòu)等有關方面。4家單位返回意見的有4家單位，4家單位對

征求意見稿共提出27條修改建議。這些修改建議主要集中在以下幾個方面：:

一是格式方面的建議，如數(shù)字與單位之間的空格不規(guī)范等，起草者對這類建

議全部接受，并利用國家標準化委員會提供的軟件重新對標準征求意見稿進

行修改，徹底消除標準文本格式不規(guī)范的問題；二是文字方面的建議，這類

建議起草者大部分接受，使本標準的文字敘述更為準確和通俗易懂。

3.審查階段（此次不寫本部分）

4.報批階段（此次不寫本部分）

二、標準編制原則和確定標準主要內(nèi)容的依據(jù)

（一）標準的編寫原則

主要闡述標準制定或修訂過程遵循的基本原則。

本標準按照標準編制的有關要求，通過對大量臨床樣品的檢測應用，對

標準所述方法進行充分驗證，對試驗數(shù)據(jù)進行科學的統(tǒng)計分析，同時征求國

內(nèi)各行業(yè)相關專家意見，力求所修定的標準符合以下原則：（1）科學嚴謹、

符合行業(yè)實情和要求，比較成熟，便于應用；（2）可操作性強，檢測結(jié)果易

判斷，檢測效率較高；（3）易于實現(xiàn)標準化和規(guī)范化，便于推廣。（4）制定

的國家標準既與國際接軌，又符合我國農(nóng)業(yè)發(fā)展的實際情況。不強調(diào)所有檢

測方法一定是最先進的技術(shù)和最先進的方法。

（二）提出本標準主要內(nèi)容的依據(jù)

主要內(nèi)容包括技術(shù)指標、參數(shù)、公式、性能要求、試驗方法、檢驗規(guī)則等。

依據(jù)包括試驗和統(tǒng)計數(shù)據(jù)。尤其注意本條不要寫成任務來源。

本標準的提出是由于國際上擁有羊地方性流產(chǎn)診斷技術(shù)，我國農(nóng)業(yè)發(fā)展

現(xiàn)行的標準缺乏相關內(nèi)容。參考WOAH發(fā)布的《陸生動物診斷試驗和疫苗

手冊》和德國衣原體病參考實驗室操作SOP，中國動物衛(wèi)生與流行病學中心

提出制定本標準。

3

聚合酶鏈式反應（PCR）方法。由于PCR方法具有較高的敏感性和特

異性，利用PCR擴增衣原體DNA，是檢測生物樣品中衣原體的一種方法。

根據(jù)培養(yǎng)特性、流行病學特征和毒力，可將衣原體分為13個種，分別為流

產(chǎn)衣原體、鸚鵡熱衣原體、家畜衣原體、豚鼠衣原體、沙眼衣原體、肺炎衣

原體、貓屬衣原體、鼠衣原體、雞衣原體、豬衣原體和鳥衣原體等，其中能

引起羊地方性流產(chǎn)的主要是流產(chǎn)衣原體。該PCR主要應用CH1和CH2等2

條引物，其靶基因是衣原體外膜蛋白pmp基因特異性引物，能鑒定出流產(chǎn)

衣原體、鸚鵡熱衣原體和家畜衣原體。經(jīng)94℃5min的初變性，經(jīng)94℃30

sec、50℃60sec、72℃30sec的30個循環(huán)，經(jīng)72℃2min延伸后，所有

流產(chǎn)衣原體成員可擴增出約300bp片段。

熒光定量PCR方法。熒光定量PCR方法由于其高特異性、快速、高通

量和易于標準化，已成為診斷實驗室的首選方法熒光定量PCR是流產(chǎn)衣原

體定性的重要方法。該熒光定量PCR方法目標基因是流產(chǎn)衣原體外膜蛋白

ompA基因，引物為Cb上游和Cb下游，探針為Cb探針，經(jīng)50℃2min

的去污染、95℃2min的初變性，經(jīng)95℃15sec、60℃30sec的45個循

環(huán)，陽性樣品可見有正弦曲線形成。

ELISA方法。基于LPS或EB抗原的ELISA不能區(qū)分感染家畜衣原體

和流產(chǎn)衣原體的動物，但也是羊地方性流產(chǎn)更敏感的初步篩查工具，而基于

合成的MOMP肽、重組的MOMP的ELISA可用來特異性地檢測抗流產(chǎn)衣

原體抗體。該ELISA方法，用純化的流產(chǎn)衣原體Momp抗原包被酶標板，

制成固相抗原，與樣品中的流產(chǎn)衣原體抗體結(jié)合，洗滌后與辣根過氧化物酶

標記的抗原結(jié)核，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，加入底物和終止液后，

陽性樣品可見顏色反應。

（三）新舊標準對比（適用于修訂標準的情況）

三、主要試驗或驗證的分析、綜述報告，技術(shù)經(jīng)濟論證，預期的

經(jīng)濟效果

（一）主要試驗或驗證的分析

本次制定的羊地方性流產(chǎn)診斷技術(shù)的標準主要有兩大類，一類是基于病原的

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分子生物學檢測方法，另一類是基于抗原-抗體反應的免疫學方法。其中病原診

斷技術(shù)方面，聚合酶鏈式反應（PCR）和熒光定量PCR是除了病原分離以外，

應用最廣泛的方法，具有敏感性和特異性的特點，尤其適合低微含量樣品的快速

檢測；免疫學方法可以通過抗體的檢測，監(jiān)測病毒感染情況以及疾病在種群中的

流行趨勢。

1.基于病原的分子生物學檢測方法的建立

1.1主要試劑及耗材血液全核酸提取試劑含(HighPurePCRTemplate

PreparationKit，Roche公司，美國)；核酸提取試劑盒(QIAampDNAMini

Kit,Qiagen公司，美國)；探針（上海生工生物工程股份有限公司）；異丙醇（國

藥）；SuperRealPreMix(Probe)(天根生化科技（北京）有限公司)；2×PromixTaq

（帶染料）(Takara)；4SGreenNucleicAcidStain（上海生工生物工程股份有限公

司）；2000bpDNAMarker(Takara)；

1.2儀器設備水浴鍋、PCR儀、熒光定量PCR儀、移液器、離心機。

1.3DNA流產(chǎn)衣原體DNA由德國耶拿細菌感染和人獸共患病研究所提供

1.4引物由北京睿博興科生物有限公司合成，經(jīng)薄層層析純化。

表1合成的引物序列

名稱5'-3'序列片段長度（bp）特異性靶基因

CH1ATGTCCAAACTCATCAGACGAG

300衣原體科Pmp

CH2CCTTCTTTAAGAGGTTTTACC

Cb-上游GCAACTGACACTAAGTCGGCTACA

ACAAGCATGTTCAATCGATAAGAG

Cb-下游

A82流產(chǎn)衣原體ompA

FAM-TAAATACCACGAATGGCAAGT

Cb-探針

TGGTTTAGCG-TAMRA

1.5PCR反應

PCR反應體系如下：

2×PromixTaq（帶染料）12.5μl

DNA5μl

上下游引物（10pmol/μl）各1μl

ddH2O5.5μl

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總反應體系25μl

在PCR管中加入各組分，蓋緊蓋子，漩渦混勻，短暫離心。然后將PCR管

放入PCR儀中，按下列反應條件進行：

94℃5min

94℃30s

50℃60s30個循環(huán)

72℃30s

72℃2min

1.6熒光PCR反應體系

熒光PCR反應體系在PCR管中配制。如果有n個樣品，同時配制n＋1

個反應體系，然后分裝于各管。配制時，依次加入反應液12.5μL，引物，

（上游引物：0.5μL；下游引物0.5μL；探針0.25μL），加入DNA樣本3μL，

無菌水補足至25μL。充分混勻后，瞬時離心，確保所有反應成分混勻并集

于管底。

加樣后，置于熒光定量PCR儀內(nèi)進行反應。反應條件如下：50℃2min

預變性；95℃10min；95℃變性10s，60℃退火延伸60s），45個循環(huán)。

退火延伸步驟采集熒光。

1.7產(chǎn)物檢測

PCR產(chǎn)物檢測取10μL產(chǎn)物加入到2%瓊脂凝膠孔中，以80V電壓進行

電泳，電泳結(jié)束后，經(jīng)溴化乙錠(EB，終濃度為0.5μg/mL)染色后，在紫外

線臺上觀察并拍照，以標準分子質(zhì)量作參考，分析記錄結(jié)果。

熒光定量PCR產(chǎn)物用熒光定量PCR儀自帶分析軟件對擴增結(jié)果進行分

析。

1.8結(jié)果判定PCR擴增產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠電泳后，經(jīng)EB染色后，衣

原體在紫外線下均可見一條大小為300bp的特異性條帶（圖1）。

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說明：M——DL2000TMMarker，從上往下依次為2000bp、1000bp、750bp、

500bp、250bp、100bp；

1——條帶為陽性對照；3——陰性對照；

2——樣本陽性擴增結(jié)果；4——空白對照。

圖1PCR結(jié)果判定示意圖

熒光定量PCR產(chǎn)物陰性對照無擴增曲線，陽性對照Ct值應小于30.0，

并出現(xiàn)典型的擴增曲線則視為該實驗成立。否則此次試驗視為無效。在實驗

成立的前提下，若檢測樣品Ct值≤30，且出現(xiàn)典型的擴增曲線，則熒光PCR

結(jié)果為陽性；若檢測樣品無Ct值且無擴增曲線，則熒光PCR結(jié)果為陰性（圖

2）。

1、2—流產(chǎn)衣原體DNA；3—陰性對照

圖2熒光定量PCR結(jié)果判定示意圖

2.ELISA方法的建立

2.1抗原包被板和酶標抗原可購置。

2.22種ELISA方法的比較

2.2.1IDVET試劑盒ELISA操作方法：參照試劑盒操作方法進行。主要操作

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包括將待檢血清使用血清稀釋液進行稀釋，加入至酶標板中，室溫作用45分鐘，

洗滌后加入酶標抗體作用30分鐘；洗滌后加入TMB底物溶液，作用后終止反

應，判定結(jié)果。

2.2.2其他品牌試劑盒ELISA操作方法：參照試劑盒操作方法進行。主要操

作包括將待檢血清使用血清稀釋液進行稀釋，混勻后室溫作用1h；將處理后的

血清加入至酶標板中，室溫作用1h，洗滌后加入酶標抗體作用1h；洗滌后加入

TMB底物溶液，作用后終止反應，判定結(jié)果。

2.2.32種ELISA方法的比較結(jié)果

同時應用2種ELISA方法，檢測標準陽性血清和標準陰性血清，檢測標準

陽性血清和標準陰性血清，比較它們的P/N值，以P/N值的大小比較ELISA方

法的優(yōu)劣。結(jié)果IDVET試劑盒的P/N值最高達30.4，其他品牌P/N值小于IDVET

試劑盒（見表1）。

表1不同試劑盒比較表

標準陽性值（P）標準陰性值（N）P/N值

IDVET試劑盒1.460.04830.4

其他品牌試劑盒0.620.03418.2

2.2.42種ELISA方法檢測臨床樣品的比較

同時應用2種ELISA方法，檢測臨床樣品，比較其敏感性和特異性。結(jié)果

IDVET試劑盒的陽性率達4.41%，其他品牌檢測陽性率高于IDVET試劑盒（見

表2）。分析判斷其他商品試劑盒適用于衣原體屬的檢測，敏感性較高；而IDVET

公司的試劑盒特異性較高，適用于篩選陽性個體。

表2不同試劑盒檢測臨床樣品表

檢測數(shù)（份）陽性數(shù)（份）陽性率（%）

IDVET試劑盒6834.41

其他品牌試劑盒685377.9

2.2.5IDVET公司流產(chǎn)衣原體ELISA試劑盒的初步應用

應用IDvet公司試劑盒對中國動物衛(wèi)生與流行病學中心儲備的部分臨床血清

進行檢測。2020年從全國15個省份65個養(yǎng)殖場采集1784份血清，血清陽性52

份，個體陽性率2.9%，群體陽性率32.3%；2021年從全國12個省份76個養(yǎng)殖

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場采集2084份血清，血清陽性75份，個體陽性率3.6%，群體陽性率32.9%。

2.3關于標準中ELISA結(jié)果的判定。不同的試劑盒，其判定標準是不一致的。

IDVET試劑盒為當陽性對照OD值＞0.35且P/N值（陽性對照OD值/陰性對照

OD值）＞3時，計算樣品OD值/陽性對照OD值（S/P），當S/P≥0.6時判為陽

性，0.5＜S/P＜0.6時判為可疑，S/P≤0.5時判為陰性。這種使用P/N值作為對照

成立的判定條件較少。但通過大量應用證實ELISA的P/N值比單純的P值和N

值更為穩(wěn)定，因此最終在標準中應用P/N值作為對照成立的判定依據(jù)。

（二）綜述報告

衣原體（Chlamydiae）是一類嚴格真核細胞內(nèi)寄生細菌，具有獨特的發(fā)育周

期可觀察到兩種不同的形態(tài)：一種是原體（EB），具有較強感染力，無繁殖能力；

另一種是網(wǎng)狀體（亦稱為始體）（RB），RB不具有感染性，在空泡內(nèi)以二分裂方

式增殖成許多代EB。衣原體屬（Chlamydia）包含至少13個種：沙眼衣原體

（C.trachomatis）、肺炎衣原體（C.pneumoniae）、鸚鵡熱衣原體（C.psittaci）、

鼠衣原體（C.muridarum）、家畜衣原體（C.pecorum）、豬衣原體（C.suis）、鳥

衣原體（C.avium）、禽衣原體（C.gallinacea）、流產(chǎn)衣原體（C.abortus）、豚鼠

衣原體（C.caviae）、貓衣原體（C.felis）和其他未命名衣原體。

流產(chǎn)衣原體是小型反芻動物（綿羊、山羊）地方性流產(chǎn)常見的病原，亦能引

起牛、豬等家畜流產(chǎn)。流產(chǎn)衣原體是一種重要人獸共患病的病原體，可以感染孕

婦，使其發(fā)生流產(chǎn)或其他疾病。全世界許多國家都有關于流產(chǎn)衣原體感染牛的報

道，如德國、埃及、中國、瑞典等，它也是衣原體中造成經(jīng)濟損失最大的種型。

目前，中國關于衣原體的血清學調(diào)查大多使用間接血凝試驗（IHA），且有些血

清學調(diào)查樣本量太少，從而使這些研究所獲得的結(jié)果經(jīng)常有較大的偏差。

（三）技術(shù)經(jīng)濟論證

為了提高實驗室對羊地方性流產(chǎn)診斷的水平，通過對各種引物條件和試劑的

優(yōu)化，先后建立了PCR和熒光定量PCR檢測方法，以滿足不同實驗室試驗條件

的需要。針對目前衣原體屬有至少13個種的情況，常規(guī)的流產(chǎn)衣原體DNA的

PCR檢測方法是以基因序列保守區(qū)域為靶點，可以結(jié)合限制性片段長度多態(tài)性

分析來鑒別擴增的DNA序列；熒光定量PCR方法由于其具高特異性、快速、高

通量和易于標準化等優(yōu)點，已成為診斷實驗室的首選方法，建議首先針對流產(chǎn)衣

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原體屬進行PCR篩查，在陽性病例中再采用基于外膜蛋白序列的流產(chǎn)衣原體特

異性篩選引物。根據(jù)以上思路，設計、篩選并優(yōu)化了1對能特異性鑒定衣原體屬

的PCR引物和1對特異性鑒定流產(chǎn)衣原體的熒光定量PCR引物。特異性上與其

它臨床癥狀類似的疾病病原無交叉、無假陽性擴增結(jié)果。PCR檢測出的陽性樣

品在瓊脂糖凝膠電泳300bp處可見明顯條帶，非常容易判定結(jié)果；熒光定量PCR

檢測到的陽性樣品在2個小時內(nèi)可見明顯熒光值，迅速、準確。經(jīng)大量臨床試驗

檢測，建立的常規(guī)PCR和熒光定量PCR方法，可以檢測包括綿羊流產(chǎn)胎兒脾臟、

胃液、胎衣和拭子樣品等材料，比涂片鏡檢和細菌培養(yǎng)檢測方便、快捷。應用建

立的方法對新疆、廣西和山東等地采集的樣品進行檢測，兩種方法檢測結(jié)果一致，

共檢測樣品168份，其中5份陽性，陽性率為2.98%。

羊地方性流產(chǎn)的血清學抗體檢測通常是用補體結(jié)合方法（CFT）或ELISA

試驗，兩種方法的原理都是基于抗原-抗體反應，當這些檢測方法采用LPS或全

菌作為抗原時，對抗體水平的檢測往往出現(xiàn)較低的特異性和敏感性。根據(jù)以上思

路，考慮采取針對外膜蛋白（Momp）的ELISA抗體檢測。應用IDvet公司試劑

盒對中國動物衛(wèi)生與流行病學中心儲備的部分臨床血清進行檢測。2020年從全

國15個省份65個養(yǎng)殖場采集1784份血清，血清陽性52份，個體陽性率2.9%，

群體陽性率32.3%；2021年從全國12個省份76個養(yǎng)殖場采集2084份血清，血

清陽性75份，個體陽性率3.6%，群體陽性率32.9%。2021年用其他商品試劑盒

與IDVET公司生產(chǎn)的羊地方性流產(chǎn)診斷試劑盒進行血清檢測，用已知陽性血清

和已知陰性血清比較不同試劑盒檢測的差異，共檢測血清68份，初步分析判斷

其他商品試劑盒適用于衣原體屬的檢測，敏感性較高；而IDVET公司的試劑盒

敏感性與其他試劑盒差別不大，但特異性較高，適用于篩選陽性個體?；谝陨?/p>

研究進展，我們推薦采用這種ELISA方法，為我國羊地方性流產(chǎn)的診斷防控提

供技術(shù)支持。

（四）預期的經(jīng)濟效果

羊地方性流產(chǎn)常規(guī)PCR、熒光定量PCR和ELISA等方法的應用，將為羊地

方性流產(chǎn)的診斷提供科學的方法，有效監(jiān)測疫病的流行形勢，并通過流行病學調(diào)

查、監(jiān)測與淘汰病畜等綜合防治措施，防止羊地方性流產(chǎn)在我國的蔓延。本標準

涉及的試驗必將為有效剔除病畜、減少繁殖損失提供技術(shù)支持，從而產(chǎn)生巨大的

經(jīng)濟效益。

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四、采用國際標準和國外先進標準的程度，以及與國際、國內(nèi)同

類標準水平的對比情況，或與測試的國外樣品有關數(shù)據(jù)對比情況

本標準基本采用了國際標準。WOAH在線網(wǎng)站發(fā)布的《陸生動物診斷試驗

和疫苗手冊》中，羊地方性流產(chǎn)的診斷方法包括病原分離、PCR、熒光定量PCR

等病原學檢測方法以及ELISA等免疫學檢測方法，本項目使用的方法，即是根

據(jù)WOAH陸生動物診斷試驗與疫苗手冊，參考引進的德國耶拿細菌感染和人獸

共患病研究所國家衣原體病引進的PCR方法、熒光定量PCR方法以及商品化的

ELISA診斷方法，在實驗室建立了可以快速確診篩查衣原體科的PCR方法、可

以快速鑒定流產(chǎn)衣原體的熒光定量PCR方法以及用于流行病學監(jiān)測的ELISA試

驗方法。這些方法經(jīng)過了多年的應用和實踐驗證確實有效。本標準起草人員在廣

泛征求意見、充分吸收國內(nèi)外經(jīng)驗的基礎之上，本標準最終確定將PCR、熒光

定量PCR和ELISA試驗列入標準，由項目參加單位開展了大量的檢測復核試驗，

對其參數(shù)進行了進一步的修正后引入到本標準中來。

五、與現(xiàn)行的法律、法規(guī)和強制性國家標準的關系

主要說明標準與相應法律法規(guī)和強制性標準之間的銜接、協(xié)調(diào)情況。列出與

標標準密切相關的法律法規(guī)、強制性標準的名稱和編號。

我國尚未出臺用于羊地方性流產(chǎn)診斷的法律、法規(guī)和強制性國家標準，本標

準的制定遵循GB/T1.1-2009、《中華人民共和國動物防疫法》、《GB/T18088-2000》、

《國家動物疫情測報體系管理規(guī)范》、《病原微生物實驗室生物安全管理條例》、

《動物檢疫管理辦法》、《農(nóng)業(yè)部國家（行業(yè)）標準的計劃編制、制定和審查管理

辦法》等相關法律、法規(guī)規(guī)定。

六、重大分歧意見的處理經(jīng)過和依據(jù)

說明各方面專家對標準主要內(nèi)容（如參數(shù)、指標、試驗方法）有哪些重大分

歧，以及標準起草單位在修改完善標準過程中，對專家分歧意見的處理主要依據(jù)

和處理結(jié)果。對同一方法或問題有不同解決方案的應討論出最佳方案。

無。

七、標準性質(zhì)（強制性，推薦性）的建議，特別是對建議批為強

制性標準的理由應充分說明

嚴格按照立項下達的性質(zhì)編寫。無需增加解釋文字。建議將本修訂標準批準

11

為推薦性標準。

本標準批為推薦性標準。

八、貫徹標準的要求和建議措施（組織實施、技術(shù)措施、過渡辦

法等）

標準發(fā)布后，為了有效貫徹實施之，建議農(nóng)業(yè)農(nóng)村部有關部門確定培訓

對象，委托標準起草單位舉辦全國技術(shù)培訓班，對有關技術(shù)人員進行相關技

術(shù)強化操作培訓，培訓效果要達到：懂原理、操作熟練、判定準確，回單位

基本能獨立工作。

九、廢止現(xiàn)行有關標準的建議；

無。

十、其他應予說明的事項。

主要包括標準項目任務完成中有關標準名稱變更、對有爭議問題、遺留問題

處理、尚需探討的問題和制定或修訂配套標準的說明等。

無。

12

注：提交時黑色和藍色字均不可刪減。沒有的應寫“無”。

一、工作簡況

（一）任務來源

本項目由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜牧獸醫(yī)局提出，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部列為2022年國家標準制

修訂項目計劃，任務編號20220275-T-326。

羊地方性流產(chǎn)又稱羊衣原體病，是由流產(chǎn)衣原體引起的一種傳染病，以發(fā)熱、

流產(chǎn)、死產(chǎn)和產(chǎn)下生命力不強的弱羔為主要特征。人可能通過接觸感染性流產(chǎn)物

或分娩物或在實驗室處理衣原體培養(yǎng)物時不小心受到感染，從而導致亞臨床感染，

甚至發(fā)生急性流感樣疾病。懷孕后期羊的地方性流產(chǎn)已在世界上許多養(yǎng)羊地區(qū)引

起嚴重的繁殖損失。

WOAH將該病列為法定報告疫病，我國將其列為三類動物疫病。我國還沒

有羊地方性流產(chǎn)診斷技術(shù)的相關標準。本標準的制定，將規(guī)范羊地方性流產(chǎn)的診

斷，及時確診羊地方性流產(chǎn)，提出人間流產(chǎn)衣原體的預警，抵制境外勢力生物武

器的襲擊，保障我國的國防安全。

（二）起草單位和主要起草人及其所做的工作

中國動物衛(wèi)生與流行病學中心接到此任務后，成立了項目組并開展國家標準

的制定工作，在項目實施過程中，山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院、安徽科技學院、

廣西壯族自治區(qū)動物疫病預防控制中心作為合作單位參與了標準的制定任務。參

與制定本標準的人員如下：

孫翔翔中國動物衛(wèi)生與流行病學中心項目主持、標準起草；

孫淑芳中國動物衛(wèi)生與流行病學中心技術(shù)指導、征求意見；

孫明軍中國動物衛(wèi)生與流行病學中心樣品檢測、方法復核；

樊曉旭中國動物衛(wèi)生與流行病學中心樣品檢測、方法復核；

劉蒙達中國動物衛(wèi)生與流行病學中心方法復核、征求意見；

張皓博中國動物衛(wèi)生與流行病學中心方法復核、征求意見；

焉鑫中國動物衛(wèi)生與流行病學中心方法復核、征求意見；

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田莉莉中國動物衛(wèi)生與流行病學中心方法復核、征求意見；

孫世雄中國動物衛(wèi)生與流行病學中心方法復核、征求意見；

王金良山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院方法復核、征求意見；

張訓海安徽科技學院方法復核、征求意見；

熊毅廣西壯族自治區(qū)動物疫病預防控制中心方法復核、征求意見；

何奇松廣西壯族自治區(qū)動物疫病預防控制中心方法復核、征求意見；

邵衛(wèi)星中國動物衛(wèi)生與流行病學中心技術(shù)指導；

范偉興中國動物衛(wèi)生與流行病學中心技術(shù)指導。

（三）主要工作過程

1.起草階段

標準起草階段得到了國家重點研發(fā)計劃“重大動物源性病原體傳入風險

評估和預警技術(shù)研究(2017YFC1200500)”的支持，項目組在前期查閱資料的

基礎之上，啟動本標準的起草工作。編寫過程中主要參考了世界動物衛(wèi)生組

織（WOAH）發(fā)布的《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》關于羊地方性流產(chǎn)

（ManualofDiagnosticTestsandVaccineforTerrestrialAnimals，part3section

3.8chapter3.8.5ENZOOTICABORTIONOFEWES(OVINE

CHLAMYDIOSIS)(INFECTIONWITHCHLAMYDIOSISABORTUS）和中

國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所發(fā)布的《動物衣原體病診斷技術(shù)》（N/T

562-2015）等國內(nèi)外相關標準和技術(shù)法規(guī)。

起草人與德國細菌感染和人獸共患病研究所衣原體病實驗室負責人聯(lián)

系，就羊地方性流產(chǎn)的診斷技術(shù)征求意見，得到的反饋是德國的技術(shù)與

WOAH推薦的診斷技術(shù)基本一致，在實驗室中目前應用最多的方法是熒光

定量PCR方法和ELISA方法。結(jié)合國際專家的意見，同時綜合考慮WOAH

手冊規(guī)定和我國的實際情況，最終在標準的起草過程中，加入了常規(guī)PCR、

熒光定量PCR和ELISA等方法。

起草標準的同時，項目組就羊地方性流產(chǎn)試驗方法的適用性在實驗室內(nèi)

進行了重復性試驗，先后進行了常規(guī)PCR、熒光定量PCR和ELISA等診斷

方法的驗證工作，證實了這些試驗方法的準確性與可靠性。

2.征求意見階段

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在上述資料收集分析、試驗研究、驗證試驗的基礎上形成了標準征求意

見稿。并于2020年在國內(nèi)單位征求意見。征求意見的單位包括中國動物衛(wèi)

生與流行病學中心、北京市農(nóng)林科學院畜牧獸醫(yī)研究所、中國動物疫病預防

控制中心和安徽科技學院等4家單位，這些單位包括了科研院所、大專院校

和疫病控制機構(gòu)等有關方面。4家單位返回意見的有4家單位，4家單位對

征求意見稿共提出27條修改建議。這些修改建議主要集中在以下幾個方面：:

一是格式方面的建議，如數(shù)字與單位之間的空格不規(guī)范等，起草者對這類建

議全部接受，并利用國家標準化委員會提供的軟件重新對標準征求意見稿進

行修改，徹底消除標準文本格式不規(guī)范的問題；二是文字方面的建議，這類

建議起草者大部分接受，使本標準的文字敘述更為準確和通俗易懂。

3.審查階段（此次不寫本部分）

4.報批階段（此次不寫本部分）

二、標準編制原則和確定標準主要內(nèi)容的依據(jù)

（一）標準的編寫原則

主要闡述標準制定或修訂過程遵循的基本原則。

本標準按照標準編制的有關要求，通過對大量臨床樣品的檢測應用，對

標準所述方法進行充分驗證，對試驗數(shù)據(jù)