《化妝品原料重組可溶性膠原蛋白》

T/GDCA009—2022

化妝品原料重組可溶性膠原蛋白

1范圍

本文件規(guī)定了重組可溶性膠原蛋白的質(zhì)量控制要求、檢測指標(biāo)與方法、穩(wěn)定性驗證、包裝儲運方法

等，并規(guī)定了一種重組可溶性膠原蛋白生物學(xué)活性的測定方法和定量標(biāo)準(zhǔn)。

本文件適用于作為化妝品原料的重組可溶性膠原蛋白的質(zhì)量控制與活性檢測。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T191包裝儲運圖示標(biāo)志

GB/T601化學(xué)試劑標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的制備

GB/T602化學(xué)試劑雜質(zhì)測定用標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

GB/T603化學(xué)試劑試驗方法中所用制劑及制品的制備

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

YY/T1849-2022重組膠原蛋白

T/SHRH031-2020化妝品緊致、抗皺功效測試-體外成纖維細胞Ⅰ型膠原蛋白含量測定

化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2015年版）（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2015年第268號）

重組膠原蛋白生物材料命名指導(dǎo)原則（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2021年第21號）

中華人民共和國藥典

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

膠原蛋白collagen

一類含有至少20種在遺傳學(xué)上不同類型的分泌蛋白質(zhì)家族，主要擔(dān)任機體的結(jié)構(gòu)支撐功能，具有

獨特的由三條多膚鏈(被稱為α鏈)組成的三螺旋構(gòu)型，并具有一定的生物學(xué)功能。

重組膠原蛋白recombinationsolublecollagen

采用重組DNA技術(shù)，對編碼所需人膠原蛋白質(zhì)的基因進行遺傳操作和(或)修飾，利用質(zhì)?；虿《据d

體將目的基因帶入適當(dāng)?shù)乃拗骷毎?細菌、酵母或其他真核細胞等)中，表達并翻譯成膠原蛋白(3.1)或

類似膠原蛋白(3.1)的多肽，經(jīng)過提取和純化等步驟制備而成。

可溶性膠原solublecollagen

用于化妝品原料的可溶于水的膠原蛋白(3.1)或類似膠原蛋白(3.1)的多肽。

4質(zhì)量控制

通則

重組可溶性膠原蛋白，由于不同膠原蛋白亞型、不同氨基酸序列、不同表達體系等差異，不具有統(tǒng)

一的產(chǎn)物。與天然膠原蛋白相比，氨基酸組成、分子量大小和(或)結(jié)構(gòu)可能差異很大，甚至是個全新的

蛋白質(zhì)，可以是單一亞型全長氨基酸序列的重組人膠原蛋白，也可以是將兩種或多種亞型嵌合的重組人

源化膠原蛋白，或者與天然膠原蛋白氨基酸序列同源性較低的重組類膠原蛋白。

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T/GDCA009—2022

重組膠原蛋白的質(zhì)量控制與分子量大小、結(jié)構(gòu)特性、質(zhì)量屬性復(fù)雜程度以及生產(chǎn)工藝相關(guān)。本文件

涉及到的質(zhì)量控制體系為化妝品原料成品檢測，在生產(chǎn)過程中的原輔料質(zhì)量控制、生產(chǎn)工藝和過程控制

應(yīng)確保各類雜質(zhì)已去除或降低至可接受水平。

分類與命名

參照《重組膠原蛋白生物材料命名指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2021年第21號），

將重組可溶性膠原蛋白分為重組人膠原蛋白、重組人源化膠原蛋白、重組類膠原蛋白三種。

劑型

根據(jù)重組可溶性膠原蛋白的形態(tài)，可分為溶液、凝膠、粉末與海綿狀固體等不同劑型。其中粉末與

海綿狀固體應(yīng)為溶液劑型經(jīng)冷凍干燥等工藝制得。

質(zhì)量要求

4.4.1感官評價

重組可溶性膠原蛋白的感官評價標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1感官評價指標(biāo)

檢測項目要求

外觀白色至淡黃色溶液、凝膠、粉末或海綿狀固體

氣味無或略有特征性氣味

雜質(zhì)無肉眼可見明顯異物

4.4.2理化性質(zhì)

重組可溶性膠原蛋白的理化性質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)見表2。

表2理化性質(zhì)指標(biāo)

檢測項目要求

純度≥85%

蛋白含量標(biāo)示量的90%～110%

分子量質(zhì)譜法為理論計算值±10%；電泳法為理論計算值±10kD

pH值5.0～8.0

4.4.3安全性

重組可溶性膠原蛋白的安全性標(biāo)準(zhǔn)見表3。

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T/GDCA009—2022

表3安全性指標(biāo)

檢測項目要求

菌落總數(shù)(CFU/mL或CFU/g)≤100

霉菌和酵母菌總數(shù)(CFU/mL或CFU/g)≤10

耐熱大腸菌群(mL或g)

銅綠假單胞菌(mL或g)不得檢出

金黃色葡萄球菌(mL或g)

鉛（mg/kg）≤10

汞（mg/kg）≤1

砷（mg/kg）≤2

鎘（mg/kg）≤5

4.4.4穩(wěn)定性

重組可溶性膠原蛋白的穩(wěn)定性受多種因素影響，包括純化工藝、微生物負載、包裝貯存條件等。重

組可溶性膠原蛋白原料的穩(wěn)定性主要受溫度影響，即熱穩(wěn)定性，其性質(zhì)可能會直接影響預(yù)期用于化妝品

的安全性和有效性，因此，應(yīng)對其熱穩(wěn)定性進行動態(tài)評價和分析。

重組可溶性膠原蛋白的穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)為，進行熱穩(wěn)定性檢測后，肉眼觀察無可見析出物或凝膠化。

4.4.5生物學(xué)活性

重組可溶性膠原蛋白的生物學(xué)活性是指與天然膠原蛋白功能相關(guān)的生物學(xué)作用。膠原蛋白是皮膚真

皮層細胞外基質(zhì)的主要成分，主要生物學(xué)功能是為細胞提供支架和良好的微環(huán)境，如促進細胞黏附、增

殖等，并能夠促進皮膚成纖維細胞合成分泌細胞外基質(zhì)蛋白。因此，可通過評價細胞-膠原蛋白相互作

用或成纖維細胞合成分泌細胞外基質(zhì)蛋白能力來評價重組可溶性膠原蛋白的生物學(xué)活性。

進行測定的任意一個或多個生物學(xué)活性指標(biāo)中，重組可溶性膠原蛋白處理組與未經(jīng)處理的對照組相

比，表現(xiàn)出具有統(tǒng)計學(xué)意義的提升效果，可表明重組可溶性膠原蛋白具有生物學(xué)活性。

5檢測方法

本文件所用試劑和水，在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和GB/T6682規(guī)定的一級水。實驗

中所用標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑及制品，參引《中華人民共和國藥典》2020版四部的，均按《中華人民共和國藥

典》2020版四部的規(guī)定制備?！吨腥A人民共和國藥典》2020版四部方法外的試劑配制方法參照GB/T601、

GB/T602、GB/T603方法配制標(biāo)定。

外觀與氣味

自然光下肉眼直接觀測，嗅聞氣味，應(yīng)符合表1要求。

雜質(zhì)

溶液樣品直接取樣，凝膠樣品可根據(jù)粘稠度加水稀釋后取樣，粉末與海綿狀固體樣品稱取適量加水

制成適當(dāng)濃度的待測溶液，將樣品置于比色管內(nèi)，自然光下肉眼直接觀察，應(yīng)無肉眼可見異物。

純度

3

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按照YY/T1849-20225.4中規(guī)定的方法進行測定。

蛋白含量

按照YY/T1849-20225.6中規(guī)定的方法進行測定。

分子量

按照《中華人民共和國藥典》2020年版四部通則0541電泳法第五法SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳

法（SDS法）或按照YY/T1849-2022中、描述的方法（高效液相色譜法、質(zhì)譜法）

進行檢測。

pH值

按《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015年版第四章1.1pH值中方法測試，溶液和凝膠樣品可采用直測法測

定，粉末與海綿狀固體樣品用水制成1mg/mL待測溶液進行測定。

菌落總數(shù)

參照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015版規(guī)定的方法檢驗。

霉菌和酵母菌總數(shù)

參照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015版規(guī)定的方法檢驗。

耐熱大腸菌群、銅綠假單胞菌與金黃色葡萄球菌

參照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015版規(guī)定的方法檢驗。

鉛、汞、砷、鎘的測定

參照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015版規(guī)定的方法檢驗。

穩(wěn)定性測定

將各劑型重組可溶性膠原蛋白以水配制成10mg/mL溶液，置于（60±0.5）℃水浴中保持4h，應(yīng)滿

足肉眼觀察無可見析出物或凝膠化。

與穩(wěn)定性相關(guān)的工藝驗證宜采用連續(xù)三批次重組可溶性膠原蛋白進行。在相關(guān)工藝條件無變化時，

每年宜進行至少一個批次產(chǎn)品的穩(wěn)定性檢驗。在工藝條件有變化時,應(yīng)考慮對重組可溶性膠原蛋白穩(wěn)定

性的影響，必要時進行再次驗證。

生物學(xué)活性測定

細胞增殖、黏附等細胞活性可按照YY/T1849-20225.4中規(guī)定的方法進行測定。成纖維細胞合成分

泌I型膠原蛋白能力可按照T/SHRH031-2020中方法進行測定。成纖維細胞合成分泌其他細胞外基質(zhì)蛋白

能力可以以熒光定量PCR法進行測定，具體實驗方法見附錄A。

6包裝、運輸和貯存

溫度

作為蛋白制品，重組可溶性膠原蛋白貯存和運輸過程中的溫度條件與劑型有關(guān)，溶液劑型貯存與運

輸環(huán)境為-20～-18℃，凝膠劑型貯存與運輸環(huán)境為4～8℃，粉末與海綿狀固體可在常溫下短時間貯存與

運輸，長時間貯存應(yīng)在4～8℃環(huán)境中。

標(biāo)志

產(chǎn)品銷售包裝圖示標(biāo)志應(yīng)按GB/T191執(zhí)行，標(biāo)注內(nèi)容為：產(chǎn)品名稱、商標(biāo)（如有）、保質(zhì)期（用生

產(chǎn)日期、保質(zhì)期或生產(chǎn)批號、限期使用日期等方式組合表示）、生產(chǎn)者名稱、地址、凈含量、執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)

號以及根據(jù)產(chǎn)品特點所應(yīng)標(biāo)注的其他內(nèi)容。

包裝

4

T/GDCA009—2022

產(chǎn)品采用適宜要求包裝，產(chǎn)品根據(jù)用戶要求包裝。

運輸

產(chǎn)品屬于非危險品，在運輸時應(yīng)防火、防熱、防雨淋、防受潮。

貯存

避光、密閉，避免陽光直射。

保質(zhì)期

在符合規(guī)定的運輸和貯存條件下，產(chǎn)品在包裝完整和未啟封的情況下，保質(zhì)期按銷售包裝標(biāo)注執(zhí)行。

5

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A

A

附錄A

（規(guī)范性）

生物學(xué)活性測定—熒光定量PCR法

熒光定量PCR法是對細胞中目的基因的mRNA水平實現(xiàn)定量檢測的方法。以mRNA反轉(zhuǎn)錄出的cDNA作為

模板，在含有特異性結(jié)合DNA雙鏈的熒光染料與目的基因的特異性引物的體系中進行PCR擴增，得到的CT

值與模板起始拷貝數(shù)的對數(shù)呈線性負相關(guān)，根據(jù)CT值結(jié)果，可以計算出模板DNA的起始拷貝數(shù)，實現(xiàn)對

目的基因的相對定量。

A.1材料與試劑

實驗中用到的細胞首選人皮膚成纖維細胞系（如BJ）或小鼠胚胎成纖維細胞系（如NIH/3T3）;其他

成纖維細胞或細胞系也可用于本試驗；但應(yīng)證明其等同性。

實驗中用到的試劑包括：TRIzol試劑、一步法反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBRGreen熒光定量PCR試劑盒、DEPC-

水、無水乙醇、氯仿、異丙醇。

實驗中用到的主要設(shè)備包括：高速冷凍離心機、全波長酶標(biāo)儀、熒光定量PCR儀。

A.2實驗方法

A.2.1細胞處理

A.2.1.1細胞在正常生長條件下培養(yǎng)至豐度約70%后，更換為不含血清的培養(yǎng)基，饑餓培養(yǎng)4小時。

A.2.1.2將配制好的膠原蛋白樣品以適當(dāng)濃度添加入細胞培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24小時。

A.2.2細胞內(nèi)總RNA提取純化

A.2.2.1取培養(yǎng)的細胞吸除培養(yǎng)基，使用預(yù)冷的PBS洗兩次，加入1mLTRIzol試劑，吹打收集到離

心管中，室溫放置5分鐘。

A.2.2.2向離心管中加入200μL氯仿，渦旋振蕩器震蕩離心管15秒，靜置10分鐘后，4℃下12000g

離心15分鐘。

A.2.2.3離心后液體分層，RNA存在于上層無色透明的水相層中，體積約600μL，轉(zhuǎn)移至新的離心管

后，加入500μL異丙醇，緩慢上下顛倒幾次混勻，靜置15分鐘后，4℃下12000g離心10分鐘。

A.2.2.4離心后RNA沉淀于離心管底部，面對光源可見為膠狀沉淀，吸除上清后，加入1mL75%乙醇

洗滌RNA，4℃下12000g離心5分鐘。

A.2.2.5吸除乙醇上清，靜置5分鐘干燥RNA，加入20μLDEPC-水溶解RNA。

A.2.2.6提取出的RNA在-80℃可以暫存1個月，需盡快完成以下2.3與2.4步驟。

A.2.3RNA濃度測定

A.2.3.1將提取的RNA取1μL，加入到99μLDEPC-水中，使總體積為100μL。將稀釋后的RNA溶液

加入到96孔UV紫外板中。

A.2.3.296孔版放入全波長酶標(biāo)儀中，選擇待測區(qū)域，設(shè)置程序為：震蕩10秒、測定260nm吸光值、

測定280nm吸光值，讀取數(shù)值。

A.2.3.3計算OD260/OD280比值，比值在1.8-2.0之間時表明提取的RNA質(zhì)量滿足后續(xù)需要。

A.2.3.4根據(jù)公式OD260×0.04×稀釋倍數(shù)，計算得到RNA溶液濃度，單位為μg/μL。以DEPC-水稀

釋調(diào)整RNA濃度至1μg/μL。

A.2.4反轉(zhuǎn)錄（注：試劑盒可能不同，按實際使用的試劑盒說明書配置反轉(zhuǎn)錄體系與反應(yīng)程序）

A.2.4.1使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒，在200μL的PCR管中配制反轉(zhuǎn)錄體系：

a)濃度為1μg/μL的RNA溶液，1μL；

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T/GDCA009—2022

b)5×qRTSuperMix，4μL；

c)預(yù)混酶溶液，1μL；

d)DEPC-水，14μL。

反轉(zhuǎn)錄體系終體積為20μL，使用移液器輕輕吹打混勻，掌上離心機短暫離心30秒。

A.2.4.2將反轉(zhuǎn)錄體系PCR管放入RCR儀中，設(shè)置反應(yīng)程序：

——50℃處理15分鐘；

——85℃處理10秒鐘。

體系中的mRNA被反轉(zhuǎn)錄為cDNA。

A.2.4.3反轉(zhuǎn)錄出的cDNA能夠作為后續(xù)熒光定量PCR反應(yīng)的模板，對目標(biāo)分子進行基因水平的檢測。

cDNA在-20℃可以保存6個月，在-80℃可以長期保存。

A.2.5引物設(shè)計與特異性驗證

A.2.5.1引物設(shè)計使用美國國家生物技術(shù)信息中心（NCBI）網(wǎng)站的Primer-BLAST功能在線完成

（/tools/primer-blast）。

A.2.5.2設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：

——目的產(chǎn)物的長度為150-250個堿基；

——引物長度范圍為18-25個堿基；

——退火溫度在58℃-62℃之間；

——GC含量在40%-60%之間；

——不含有連續(xù)的4個及以上相同的堿基；

——引物自身配對堿基少于3個。

A.2.5.3對于每個目標(biāo)分子，設(shè)計3對不同引物，由生物公司進行合成。

A.2.5.4收到合成好的引物后，需先按照下文2.5步驟進行引物特異性進行驗證，滿足擴增效率En

大于0.9，CT值在35以內(nèi)，熔解曲線峰型單一且峰值溫度在80℃以上的引物，可以用來進行熒光定量

PCR試驗。

本標(biāo)準(zhǔn)中用于生物學(xué)活性測定的已驗證引物信息如表A.1所示。其中全大寫斜體基因名代表人源基

因（如COL1A1），首字母大寫斜體基因名代表鼠源基因，并在前加注m標(biāo)示（如mCOL1A1）。引物名稱

后的F代表正向（Forward）引物，R代表反向（Reverse）引物。

表A.1已驗證的引物信息

引物名稱引物序列Tm（℃）目的片段長度(bp）

COL1A1-F5’-CCCCGAGGCTCTGAAGGT-3’60.0140

COL1A1-R5’-GCAATACCAGGAGCACCATTG-3’57.8

COL3A1-F5’-CCTCCAACTGCTCCTACTCG-3’62.0172

COL3A1-R5’-GACCAGTAGGGCATGATTCACA-3’59.1

ATCB-F5’-GAGAAAATCTGGCACCACACC-3’57.8176

ATCB-R5’-GATAGCACAGCCTGGATAGCA-3’57.8

mCol1a1-F5’-ATGCTTGATCTGTATCTGCCACA-3’56.6171

mCol1a1-R5’-CCCTTGGGTCCCTCGACT-3’60.0

mCol3a1-F5’-GAAAGAGGATCTGAGGGCTCG-3’59.8141

mCol3a1-R5’-GGGTGAAAAGCCACCAGACT-3’62.0

mActb-F5’-CGCTGCGCTGGTCGT-3’56.2123

mActb-R5’-CCCACCATCACACCCTGG-3’60.0

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T/GDCA009—2022

A.2.6熒光定量PCR（注：各單位使用試劑盒與儀器可能不同，按試劑盒說明書配置PCR體系，并根據(jù)

儀器設(shè)置合適的PCR程序）

A.2.6.1使用SYBRGreen熒光定量試劑盒中的試劑配制，配制反應(yīng)體系：

a)2×SYBRGreenPCR預(yù)混液，10μL；

b)正向與反向引物，各1.5μL；

c)濃度為1μg/μL的cDNA溶液，1μL；

d)滅菌一級水，6μL。

PCR體系終體積為20μL，使用掌上離心機短暫離心30秒。

A.2.6.2每個樣品的每個待測分子均需三個重復(fù)孔，設(shè)置不加入cDNA的空白對照；除待測分子外，還

需要β-肌動蛋白（ACTB）作為參考分子。

A.2.6.3將八聯(lián)PCR管放入熒光定量PCR儀中，設(shè)置反應(yīng)程序：

a)95℃處理2分鐘；

b)95℃處理5秒鐘；

c)60℃處理10秒鐘；

d)4℃恒溫保存。

其中b與c步驟重復(fù)40個循環(huán)。

A.2.6.4PCR程序結(jié)束后，軟件自動生成每個樣品的CT值。

A.3定量分析

將每個樣品三個重復(fù)的CT值取平均值，計算待測分子CT值減去參考分子（ACTB）CT值的差值，即

ΔCT。計算經(jīng)原料處理后細胞中待測分子的ΔCT值減去未經(jīng)處理細胞中待測分子的ΔCT值的差值，即

-ΔΔCT

ΔΔCT。計算以2為底數(shù)，（-ΔΔCT）為指數(shù)的指數(shù)值，即2，作為每個樣品中待測分子的定量結(jié)果，

實現(xiàn)基因水平的定量檢測。

8

T/GDCA009—2022

參考文獻

[1]YY/T1849-2022重組膠原蛋白。

9

ICS71.100.70

CCSY42

GDCA

廣東省化妝品學(xué)會團體標(biāo)準(zhǔn)

T/GDCA009—2022

化妝品原料重組可溶性膠原蛋白

CosmeticIngredientRecombinantSolubleCollagen

（征求意見稿）

在提交反饋意見時，請將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實施

廣東省化妝品學(xué)會??發(fā)布

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化妝品原料重組可溶性膠原蛋白

1范圍

本文件規(guī)定了重組可溶性膠原蛋白的質(zhì)量控制要求、檢測指標(biāo)與方法、穩(wěn)定性驗證、包裝儲運方法

等，并規(guī)定了一種重組可溶性膠原蛋白生物學(xué)活性的測定方法和定量標(biāo)準(zhǔn)。

本文件適用于作為化妝品原料的重組可溶性膠原蛋白的質(zhì)量控制與活性檢測。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T191包裝儲運圖示標(biāo)志

GB/T601化學(xué)試劑標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的制備

GB/T602化學(xué)試劑雜質(zhì)測定用標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

GB/T603化學(xué)試劑試驗方法中所用制劑及制品的制備

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

YY/T1849-2022重組膠原蛋白

T/SHRH031-2020化妝品緊致、抗皺功效測試-體外成纖維細胞Ⅰ型膠原蛋白含量測定

化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2015年版）（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2015年第268號）

重組膠原蛋白生物材料命名指導(dǎo)原則（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2021年第21號）

中華人民共和國藥典

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

膠原蛋白collagen

一類含有至少20種在遺傳學(xué)上不同類型的分泌蛋白質(zhì)家族，主要擔(dān)任機體的結(jié)構(gòu)支撐功能，具有

獨特的由三條多膚鏈(被稱為α鏈)組成的三螺旋構(gòu)型，并具有一定的生物學(xué)功能。

重組膠原蛋白recombinationsolublecollagen

采用重組DNA技術(shù)，對編碼所需人膠原蛋白質(zhì)的基因進行遺傳操作和(或)修飾，利用質(zhì)粒或病毒載

體將目的基因帶入適當(dāng)?shù)乃拗骷毎?細菌、酵母或其他真核細胞等)中，表達并翻譯成膠原蛋白(3.1)或

類似膠原蛋白(3.1)的多肽，經(jīng)過提取和純化等步驟制備而成。

可溶性膠原solublecollagen

用于化妝品原料的可溶于水的膠原蛋白(3.1)或類似膠原蛋白(3.1)的多肽。

4質(zhì)量控制

通則

重組可溶性膠原蛋白，由于不同膠原蛋白亞型、不同氨基酸序列、不同表達體系等差異，不具有統(tǒng)

一的產(chǎn)物。與天然膠原蛋白相比，氨基酸組成、分子量大小和(或)結(jié)構(gòu)可能差異很大，甚至是個全新的

蛋白質(zhì)，可以是單一亞型全長氨基酸序列的重組人膠原蛋白，也可以是將兩種或多種亞型嵌合的重組人

源化膠原蛋白，或者與天然膠原蛋白氨基酸序列同源性較低的重組類膠原蛋白。

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重組膠原蛋白的質(zhì)量控制與分子量大小、結(jié)構(gòu)特性、質(zhì)量屬性復(fù)雜程度以及生產(chǎn)工藝相關(guān)。本文件

涉及到的質(zhì)量控制體系為化妝品原料成品檢測，在生產(chǎn)過程中的原輔料質(zhì)量控制、生產(chǎn)工藝和過程控制

應(yīng)確保各類雜質(zhì)已去除或降低至可接受水平。

分類與命名

參照《重組膠原蛋白生物材料命名指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2021年第21號），

將重組可溶性膠原蛋白分為重組人膠原蛋白、重組人源化膠原蛋白、重組類膠原蛋白三種。

劑型

根據(jù)重組可溶性膠原蛋白的形態(tài)，可分為溶液、凝膠、粉末與海綿狀固體等不同劑型。其中粉末與

海綿狀固體應(yīng)為溶液劑型經(jīng)冷凍干燥等工藝制得。

質(zhì)量要求

4.4.1感官評價

重組可溶性膠原蛋白的感官評價標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1感官評價指標(biāo)

檢測項目要求

外觀白色至淡黃色溶液、凝膠、粉末或海綿狀固體

氣味無或略有特征性氣味

雜質(zhì)無肉眼可見明顯異物

4.4.2理化性質(zhì)

重組可溶性膠原蛋白的理化性質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)見表2。

表2理化性質(zhì)指標(biāo)

檢測項目要求

純度≥85%

蛋白含量標(biāo)示量的90%～110%

分子量質(zhì)譜法為理論計算值±10%；電泳法為理論計算值±10kD

pH值5.0～8.0

4.4.3安全性

重組可溶性膠原蛋白的安全性標(biāo)準(zhǔn)見表3。

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表3安全性指標(biāo)

檢測項目要求

菌落總數(shù)(CFU/mL或CFU/g)≤100

霉菌和酵母菌總數(shù)(CFU/mL或CFU/g)≤10

耐熱大腸菌群(mL或g)

銅綠假單胞菌(mL或g)不得檢出

金黃色葡萄球菌(mL或g)

鉛（mg/kg）≤10

汞（mg/kg）≤1

砷（mg/kg）≤2

鎘（mg/kg）≤5

4.4.4穩(wěn)定性

重組可溶性膠原蛋白的穩(wěn)定性受多種因素影響，包括純化工藝、微生物負載、包裝貯存條件等。重

組可溶性膠原蛋白原料的穩(wěn)定性主要受溫度影響，即熱穩(wěn)定性，其性質(zhì)可能會直接影響預(yù)期用于化妝品

的安全性和有效性，因此，應(yīng)對其熱穩(wěn)定性進行動態(tài)評價和分析。

重組可溶性膠原蛋白的穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)為，進行熱穩(wěn)定性檢測后，肉眼觀察無可見析出物或凝膠化。

4.4.5生物學(xué)活性

重組可溶性膠原蛋白的生物學(xué)活性是指與天然膠原蛋白功能相關(guān)的生物學(xué)作用。膠原蛋白是皮膚真

皮層細胞外基質(zhì)的主要成分，主要生物學(xué)功能是為細胞提供支架和良好的微環(huán)境，如促進細胞黏附、增

殖等，并能夠促進皮膚成纖維細胞合成分泌細胞外基質(zhì)蛋白。因此，可通過評價細胞-膠原蛋白相互作

用或成纖維細胞合成分泌細胞外基質(zhì)蛋白能力來評價重組可溶性膠原蛋白的生物學(xué)活性。

進行測定的任意一個或多個生物學(xué)活性指標(biāo)中，重組可溶性膠原蛋白處理組與未經(jīng)處理的對照組相

比，表現(xiàn)出具有統(tǒng)計學(xué)意義的提升效果，可表明重組可溶性膠原蛋白具有生物學(xué)活性。

5檢測方法

本文件所用試劑和水，在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和GB/T6682規(guī)