第十六章 臨床電泳分析儀器課件

第十六章臨床電泳分析儀器第十六章臨床電泳分析儀器最常見(jiàn)的電泳儀第十六章臨床電泳分析儀器第十六章臨床電泳分析儀器

該儀器開展的主要項(xiàng)目有:

1、血清蛋白電泳

2、CK同功酶

3、CK同功酶亞型

4、LDH同功酶

5、AKP同功酶

6、r-GT同功酶

7、脂蛋白電泳

8、血紅蛋白電泳

9、膽固醇電泳

10、結(jié)合珠蛋白電泳

11、免疫固定電泳

12、腦脊液蛋白電泳

13、尿液蛋白電泳

第十六章臨床電泳分析儀器

蛋白電泳氨基黑染色第十六章臨床電泳分析儀器

胃腸道的蛋白丟失

各區(qū)帶含量均減少，在各種胃腸道功能紊亂時(shí)，Alb丟失的同時(shí)也伴有球蛋白的丟失。常繼發(fā)于狹窄性心包炎，先天性腸道林巴管擴(kuò)張，腸道炎癥等。第十六章臨床電泳分析儀器

蛋白電泳麗春紅染色第十六章臨床電泳分析儀器急性燒傷病人的電泳圖譜

大面積燒傷病人,其圖譜顯示Alb、α1、γ顯著減少而α2明顯增加.臨床上產(chǎn)生低蛋白血癥,其原因:一是血清滲出,二是皮膚丟失

第十六章臨床電泳分析儀器

急性肝臟疾病第十六章臨床電泳分析儀器電泳技術(shù)用途-分離、鑒定、純化

在臨床診斷中：血清蛋白，血紅蛋白糖蛋白、脂蛋白的分離鑒定和含量的測(cè)定，還有血清酶以及免疫化學(xué)的檢驗(yàn)。它為醫(yī)生提供了診斷某些疾病的依據(jù)如肝炎，腎病等在科研工作中主要用來(lái)提純蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)分析。電泳技術(shù)已廣泛用于蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、核苷酸、無(wú)機(jī)離子等成分的分離和鑒定，甚至還用于細(xì)胞和病毒的研究。第十六章臨床電泳分析儀器電泳儀的定義

電泳（electrophoresis）是指帶電荷的溶質(zhì)或粒子在電場(chǎng)中向著與其本身所帶電荷相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。利用電泳現(xiàn)象將多組分物質(zhì)分離、分析的技術(shù)叫做電泳技術(shù)（electrophoresis-technique）?？梢詫?shí)現(xiàn)電泳分離技術(shù)的儀器稱之為電泳儀（electrophoresister)

；第十六章臨床電泳分析儀器第一節(jié)電泳原理一、電泳的基本原理

物質(zhì)分子在正常情況下一般不帶電，即所帶正負(fù)電荷量相等，故不顯示帶電性。但是在一定的物理作用或化學(xué)反應(yīng)條件下，某些物質(zhì)分子會(huì)成為帶電的離子（或粒子），不同的物質(zhì)，由于其帶電性質(zhì)、顆粒形狀和大小不同，因而在一定的電場(chǎng)中它們的移動(dòng)方向和移動(dòng)速度也不同，因此可使它們分離。第十六章臨床電泳分析儀器蛋白質(zhì)電泳動(dòng)畫.swf第十六章臨床電泳分析儀器若溶液里一電量為q的帶電粒子，在場(chǎng)強(qiáng)為E的電場(chǎng)中以速度v移動(dòng)，則它所受到的電場(chǎng)力F1應(yīng)為：

F1=QE根據(jù)斯托克司定律，在液體中泳動(dòng)的球狀粒子所受到的阻力F2

，為：

F2=6πηRV

式中η為介質(zhì)的粘度系數(shù)，R為粒子半徑。當(dāng)二力平衡，即F1=F2時(shí)，粒子作勻速運(yùn)動(dòng)。且有

V=QE/6πrη從上式可以看出移動(dòng)速度不僅與本身性質(zhì)有關(guān)，還受到外界因素的影響第十六章臨床電泳分析儀器影響電泳的因素

（一）電場(chǎng)強(qiáng)度

（二）溶液的pH值（三）溶液的離子強(qiáng)度（四）電滲作用（五）粒子的遷移率（六）吸附作用第十六章臨床電泳分析儀器一般來(lái)說(shuō)，不同成分的物質(zhì)，其顆粒本身所帶的電量以及顆粒的半徑(或摩擦系數(shù))都是不同的，所以它們的遷移率各不相同。利用這一原理即可把物質(zhì)中各種不同的成分分離開來(lái)。例如，血清蛋白中含有各種蛋白質(zhì)(清蛋白、α1,α2,β,γ球蛋白等)，第十六章臨床電泳分析儀器電泳分析技術(shù)的分類1、根據(jù)電泳電壓的高低常壓電泳高壓電泳2、根據(jù)電泳中是否使用支持物自由電泳:在自由溶液中進(jìn)行的電泳方法區(qū)帶電泳:更常用的電泳是將試樣放在支持介質(zhì)（載體）上進(jìn)行泳動(dòng)，并在支持介質(zhì)上形成一個(gè)個(gè)區(qū)帶第十六章臨床電泳分析儀器3、按支持物的物理性狀不同

①紙電泳②纖維薄膜電泳如醋酸纖維素電泳③凝膠電泳如瓊脂糖、聚丙烯酰胺凝膠電泳第十六章臨床電泳分析儀器4、按支持物的裝置形式不同：

①平板式電泳②垂直板式電泳③垂直柱式電泳第十六章臨床電泳分析儀器電泳分析儀可分為兩大類:臨床實(shí)驗(yàn)室常規(guī)類,如全自動(dòng)熒光/可見(jiàn)光雙系統(tǒng)電泳儀、全自動(dòng)醋纖膜電泳儀、全自動(dòng)瓊脂糖電泳儀;科研為主兼做臨床樣本類,如雙向電泳及雙向電泳,液相色譜--質(zhì)譜聯(lián)用、高效毛細(xì)管電泳及高效毛細(xì)管電泳--質(zhì)譜聯(lián)用、高效毛細(xì)管芯片電泳、DNA測(cè)序系統(tǒng)。第十六章臨床電泳分析儀器從目前臨床實(shí)驗(yàn)室的要求來(lái)看電泳儀必須具有下列功能：

1.全自動(dòng)，必須達(dá)到人員離機(jī)作業(yè)，由點(diǎn)樣到出報(bào)告沒(méi)有人工動(dòng)作。

2.速度快，所有項(xiàng)目應(yīng)在60min內(nèi)完成，同時(shí)具備急診項(xiàng)目，如CK、LD等同工酶及亞型項(xiàng)目。

3.項(xiàng)目全，除了血清蛋白、脂蛋白、血紅蛋白、CK、LD同工酶等傳統(tǒng)項(xiàng)目外，必須還能完成尿蛋白、腦脊液蛋白、免疫固定(單克隆抗體)，堿性磷酸酶(ALP)和s—谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)同工酶、膽固醇(高密度、極低密度／低密度脂蛋白)、脂蛋白(a)等最新檢驗(yàn)項(xiàng)目。

4.靈敏度高，必須采用敏感度高的電泳片，如瓊脂糖凝膠系統(tǒng)，才能得到準(zhǔn)確度高、分辨率高的電泳結(jié)果第十六章臨床電泳分析儀器第二節(jié)常用電泳技術(shù)和電泳方法

一、電泳方法簡(jiǎn)介

（一）紙電泳指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是最早使用的區(qū)帶電泳。

06-02平臥式電泳槽裝置示意圖

將濾紙條水平地架設(shè)在兩個(gè)裝有緩沖溶液的容器之間，樣品點(diǎn)于濾紙中央。當(dāng)濾紙條被緩沖液潤(rùn)濕后，再蓋上絕緣密封罩，即可由電泳電源輸入直流電壓（100V～1000V）進(jìn)行電泳。

第十六章臨床電泳分析儀器（二）醋酸纖維素薄膜電泳電泳時(shí)經(jīng)過(guò)膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點(diǎn)是分離速度快、電泳時(shí)間短、樣品用量少。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測(cè)。

06-03血清蛋白的電泳圖譜

第十六章臨床電泳分析儀器醋酸纖維素薄膜電泳分離血清清蛋白第十六章臨床電泳分析儀器

（三）凝膠電泳

由區(qū)帶電泳中派生出一種用凝膠物質(zhì)作支持物進(jìn)行電泳的方式，被稱為凝膠電泳。普通的凝膠電泳在板上進(jìn)行，以凝膠作為介質(zhì)。電泳中常用的凝膠為葡聚糖、交聯(lián)聚丙烯酰胺和瓊脂糖。它具有機(jī)械強(qiáng)度好、彈性大、透明、化學(xué)穩(wěn)定性高、無(wú)電滲作用、設(shè)備簡(jiǎn)單、樣品量小(1～100μg）、分辨率高等優(yōu)點(diǎn)。這種介質(zhì)具有分子篩的作用

06-04凝膠電泳圖`第十六章臨床電泳分析儀器第十六章臨床電泳分析儀器第十六章臨床電泳分析儀器瓊脂糖電泳檢測(cè)第十六章臨床電泳分析儀器聚丙烯酰胺凝膠電泳的應(yīng)用

聚丙烯酰胺具有許多優(yōu)點(diǎn):如具有化學(xué)惰性；不與試樣或其他化學(xué)成分起反應(yīng)；在電泳過(guò)程中沒(méi)有電滲作用和吸附作用；彈性強(qiáng)，機(jī)械強(qiáng)度高；便于操作；透明，便于肉眼觀察和用儀器測(cè)定；重復(fù)性好等。因此聚丙烯酰胺凝膠電泳目前得到廣泛應(yīng)用，如用于蛋白質(zhì)、核酸等不同大小分子物質(zhì)的分離和分析。也可測(cè)定蛋白質(zhì)亞基的摩爾質(zhì)量?？芍苯討?yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中，如測(cè)定腦脊液、血、尿、痰和其他體液中的痕量成分。目前多用于離血清蛋白、病毒、酶蛋白等。還可用于分離痕量的蛋白質(zhì)，第十六章臨床電泳分析儀器尿蛋白電泳及圖譜第十六章臨床電泳分析儀器（四）等電聚焦電泳

1．等電聚焦電泳過(guò)程

一種利用有pH值梯度的介質(zhì)，分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。

將等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)混合物加入有pH值梯度的凝膠介質(zhì)中，在電場(chǎng)內(nèi)經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，各組分將分別聚焦在各自等電點(diǎn)相應(yīng)的pH值位置上，最后，樣品的各組分在各自的等電點(diǎn)聚焦成一條清晰而穩(wěn)定的窄帶。

06-05凈電荷與PH的關(guān)系曲線

第十六章臨床電泳分析儀器等電聚焦的特點(diǎn)就在于它利用了一種稱為兩性電解質(zhì)載體的物質(zhì)在電場(chǎng)中構(gòu)成連續(xù)的pH梯度，使蛋白質(zhì)或其他具有兩性電解質(zhì)性質(zhì)的樣品進(jìn)行聚焦，從而達(dá)到分離、測(cè)定和鑒定的目的。第十六章臨床電泳分析儀器第十六章臨床電泳分析儀器

2．等電聚焦電泳的特點(diǎn)①使用兩性載體電解質(zhì)，在電極之間形成穩(wěn)定、連續(xù)、線性的pH梯度；②由于“聚焦效應(yīng)”，即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區(qū)帶界面；③電泳速度快;④分辨率高;⑤加入樣品的位置可任意選擇；⑥可用于測(cè)定蛋白質(zhì)類物質(zhì)的等電點(diǎn);⑦適用于中、大分子量（如蛋白質(zhì)、肽類、同工酶等）生物組分的分離分析。第十六章臨床電泳分析儀器（五）等速電泳采用兩種不同濃度的電解質(zhì)組成，一種為前導(dǎo)電解質(zhì)，充滿整個(gè)毛細(xì)管柱；另一種為尾隨電解質(zhì)，置于一端的電泳槽中。前導(dǎo)電解質(zhì)的遷移率高于任何樣品組分，后者則低于任何樣品組分，被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間，在強(qiáng)電場(chǎng)的作用下，各被分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨電解質(zhì)之間的空隙中移動(dòng)，實(shí)現(xiàn)分離。06-06

等速電泳示意圖

第十六章臨床電泳分析儀器（六）雙向凝膠電泳（二維電泳）第一向采用等電聚焦根據(jù)復(fù)雜的蛋白質(zhì)成分中各個(gè)蛋白質(zhì)的PI的不同，將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離。第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS）就是按蛋白質(zhì)分子量的大小使其在垂直方向進(jìn)行分離。其結(jié)果不再是條帶狀，而是呈現(xiàn)為斑點(diǎn)狀。第十六章臨床電泳分析儀器膠性PH9中電加解入質(zhì)了溶雙液

PH3加上電場(chǎng)后建立穩(wěn)定PH梯度蛋白質(zhì)溶液加入，建立電場(chǎng)染色后，蛋白質(zhì)因PI值不同，沿PH梯度分離開第一向等電聚焦PI逐漸降低等電聚焦膠放在SDS－聚丙烯酰胺凝膠上

第二向SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳分子量逐漸降低PI逐漸降低

06-07雙向凝膠電泳示意圖第十六章臨床電泳分析儀器第十六章臨床電泳分析儀器第十六章臨床電泳分析儀器第十六章臨床電泳分析儀器(七）免疫電泳

免疫電泳是瓊脂平板電泳和雙相免疫擴(kuò)散兩種方法的結(jié)合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進(jìn)行電泳，使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開，然后加入抗體做雙相免疫擴(kuò)散，把已分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴(kuò)散而相遇，在二者比例適當(dāng)?shù)牡胤?，形成肉眼可?jiàn)的沉淀弧。第十六章臨床電泳分析儀器臨床上常用的電泳方法有哪些？p212第十六章臨床電泳分析儀器第三節(jié)常用電泳設(shè)備的基本結(jié)構(gòu)及技術(shù)指標(biāo)一、常用電泳設(shè)備的基本結(jié)構(gòu)（一）電泳電源（二）電泳槽（三）附加裝置06-08平臥式電泳槽裝置示意圖第十六章臨床電泳分析儀器電源第十六章臨床電泳分析儀器各種電泳槽第十六章臨床電泳分析儀器附加裝置電泳條帶的分析裝備第十六章臨床電泳分析儀器電泳條帶的分析裝備

習(xí)慣上，電泳分離后每一片段結(jié)果以百分率報(bào)告；假如已知總含量，還可以報(bào)告計(jì)算得到的定量結(jié)果?？蓪㈦娪酒蜗疵摵?，用分光光度計(jì)測(cè)定洗脫液；也可用其他分析裝備直接對(duì)電泳結(jié)果進(jìn)行掃描分析。

1．光密度掃描儀光密度掃描儀可對(duì)電泳結(jié)果直接進(jìn)行掃描，從而得出相對(duì)百分比甚至可以繪制出曲線圖，計(jì)算出相對(duì)面積。光密度掃描儀的主要特性有：①可掃描的電泳支持物長(zhǎng)度為25—150mm。②可按指令設(shè)置對(duì)照。③可自動(dòng)去除一定程度的背景色(設(shè)置“基線”)。④有多個(gè)波長(zhǎng)可選擇用于測(cè)定(分光計(jì)或?yàn)V光片)第十六章臨床電泳分析儀器⑤分辨率高⑥有匯集、處理數(shù)據(jù)的功能。由計(jì)算機(jī)控制的先進(jìn)的自動(dòng)電泳儀器所配備的光密度掃描儀可以分析多達(dá)約30種不同的電泳條帶，有的還可采用熒光法分析電泳條帶，，這在分析某些同工酶(如CK同工酶等)時(shí)十分有用。此外，先進(jìn)的光密度掃描儀還設(shè)計(jì)有可供選用的包括自動(dòng)掃描在內(nèi)的多種掃描方式和打印裝置等，并有質(zhì)量控制和統(tǒng)計(jì)功能，結(jié)果可儲(chǔ)存和傳輸。第十六章臨床電泳分析儀器2．其他常用的電泳圖譜分析設(shè)備

①紫外透射反射儀：需在暗室內(nèi)使用。用于對(duì)核酸片段進(jìn)行觀察。一般入射光為300nm，反射光為254nm和365nm。還有使用方便的手提式紫外反射儀。②雙光觀察照相儀：可毋需在暗室內(nèi)操作，對(duì)核酸、同工酶和蛋白質(zhì)的電泳片段進(jìn)行觀察分析和照相記錄；254nm、300nm和365nm3個(gè)波長(zhǎng)可任意選擇和組合，使用方便。③照相設(shè)備：要求使用分辨力高的照相機(jī)和膠卷，并使用聚焦鏡頭或近拍器。有時(shí)還需根據(jù)電泳凝膠的顏色，加用不同的濾光片。第十六章臨床電泳分析儀器3、電泳所需的常用材料

(一)電泳支持物電泳支持物可分為兩類。一類支持物包括濾紙、醋酸纖維素膜、瓊脂、瓊脂糖等(二)緩沖液電泳緩沖液中的離子有兩個(gè)作用：一是使電流得以流動(dòng)，二是維持一定的pH(三)加樣器電泳時(shí)加入的樣品量應(yīng)能滿足電泳分離要求(四)染料電泳后可用某種染料對(duì)已分離的蛋白質(zhì)組分進(jìn)行染色，使之固定并成為肉眼可見(jiàn)的條帶。根據(jù)支持物或檢測(cè)需要不同可選擇不同染料。常用于蛋白質(zhì)染色的染料有氨基黑，麗春紅，或溴酚藍(lán)。第十六章臨床電泳分析儀器二、電泳儀的主要技術(shù)指標(biāo)

1．輸出電壓8．連續(xù)工作時(shí)間

2．輸出電流9．保護(hù)措施

3．輸出功率10．顯示方式

4．電壓穩(wěn)定度11．定時(shí)方式

5．電流穩(wěn)定度12．電源電壓

6．功率穩(wěn)定度13．電源頻率

7．輸出組數(shù)14．功耗

第十六章臨床電泳分析儀器使用方法及注意事項(xiàng)

1，使用前應(yīng)首先閱讀儀器說(shuō)明書，熟悉該機(jī)面板上的各旋鈕的功能。

2．連接好電泳槽與電泳儀的連接導(dǎo)線，電源開關(guān)置于關(guān)閉狀態(tài)，將調(diào)節(jié)旋鈕逆時(shí)針旋到最小值處；穩(wěn)壓穩(wěn)流選擇開關(guān)放置在所需要的工作位置。

3．該機(jī)的輸出電壓和電流均分為兩檔，選擇好檔位后，輸出范圍和電表指示同時(shí)轉(zhuǎn)換。

4．開機(jī)后旋轉(zhuǎn)輸出調(diào)節(jié)旋鈕，將電壓或電流調(diào)至所需要的數(shù)值。。第十六章臨床電泳分析儀器5．當(dāng)使用兩個(gè)電泳槽時(shí)，電壓表顯示的是加在每個(gè)電泳梢兩端的電壓，電流表指示的是兩電泳槽電流之和。

6．該機(jī)設(shè)有自動(dòng)短路保護(hù)裝置，當(dāng)輸出發(fā)生短路時(shí)，儀器停止工作3s，然后會(huì)自動(dòng)啟動(dòng)7．不應(yīng)將電泳槽放在電源裝置上進(jìn)行電泳。開機(jī)后人體不能與電泳槽中的溶液接觸；維護(hù)、檢修時(shí)，應(yīng)先切斷電源，以確保安全。

第十六章臨床電泳分析儀器電泳儀的維護(hù)與保養(yǎng)

(1)變換極性應(yīng)在關(guān)機(jī)條件下進(jìn)行。

(2)儀器處于穩(wěn)流工作狀態(tài)時(shí)，勿使輸出開路(即不接電泳槽或?qū)Ь€松脫)，穩(wěn)流工作輸出開路的特征是電流表指示為零而電壓表指示超出刻度范圍。短時(shí)間輸出開路儀器不會(huì)損壞，但長(zhǎng)時(shí)間開路會(huì)使電壓表發(fā)熱過(guò)度。

(3)儀器在使用中嚴(yán)禁濺人電解質(zhì)溶液，不得將電泳槽放在電泳儀上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)工作。

第十六章臨床電泳分析儀器如溶液已進(jìn)入電泳儀，切勿接通電源，以免造成事故。同時(shí)應(yīng)由專業(yè)人員修理后才可使用。(4)儀器工作時(shí)，因電壓較高，開機(jī)后人體不宜與電泳槽中溶液接觸，最好關(guān)機(jī)后再看樣品，以免觸電。

(5)切勿在空載情況下開機(jī)，否則會(huì)造成人為故障。

(6)使用中發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象時(shí)應(yīng)立即切斷電源，進(jìn)行檢修。

第十六章臨床電泳分析儀器第五節(jié)毛細(xì)管電泳一、毛細(xì)管電泳的基本工作原理溶液中的帶電粒子以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，沿毛細(xì)管通道，以不同速度向與其所帶電荷相反的電極方向遷移，并依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離。第十六章臨床電泳分析儀器毛細(xì)管電泳的基本結(jié)構(gòu)和分離模式06-09毛細(xì)管電泳儀裝置示意圖

第十六章臨床電泳分析儀器二、毛細(xì)管電泳的特點(diǎn)

1.高靈敏度2.高速度3.高分辨率

4.樣品少5.自動(dòng)化程度高

6.應(yīng)用范圍廣

06-10

英特雷勃——全自動(dòng)電泳儀第十六章臨床電泳分析儀器三、毛細(xì)管電泳的分離模式（一）毛細(xì)管區(qū)帶電泳

它是通過(guò)在充滿電解質(zhì)溶液的毛細(xì)管中，不同質(zhì)荷比大小的組分在電場(chǎng)的作用下，依遷移速度的不同而進(jìn)行分離的。根據(jù)組分的遷移時(shí)間進(jìn)行定性，根據(jù)電泳峰的峰面積或峰高進(jìn)行定量分析。

06-11毛細(xì)血管區(qū)帶電泳原理圖

第十六章臨床電泳分析儀器（二）毛細(xì)管凝膠電泳將板上的凝膠移到毛細(xì)管中作支持物進(jìn)行的電泳。凝膠具有多孔性，起類似分子篩的作用，能根據(jù)待測(cè)組分的質(zhì)荷比和分子體積的不同而進(jìn)行分離。適用于分離、測(cè)定肽類、蛋白質(zhì)、DNA類物質(zhì)的分離。

第十六章臨床電泳分析儀器（三）毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜(MECC)

使MECC系統(tǒng)中存在兩個(gè)相：流動(dòng)的水相和起到固定相作用的膠束相。在含有膠束的流動(dòng)相中，溶質(zhì)在“水相”和“膠束相”(準(zhǔn)固定相)之間進(jìn)行分配，即使是中性溶質(zhì)，因其本身疏水性不同，在二者之間的分配也會(huì)有差異，疏水性強(qiáng)的溶質(zhì)在“膠束相”中停留時(shí)間長(zhǎng)，遷移速度就慢。反之，親水性強(qiáng)的溶質(zhì)遷移速度就快，最終中性溶質(zhì)將依其疏水性不同而得以分離。

第十六章臨床電泳分析儀器（四）毛細(xì)管等電聚焦電泳不同等電點(diǎn)的分子分別聚集在不同的位置上，不作遷移而彼此分離，這就是等電聚焦分離過(guò)程。毛細(xì)管的等電聚焦是在毛細(xì)管內(nèi)實(shí)現(xiàn)的等電聚焦過(guò)程，具有極高的分辨率，通?？梢苑蛛x等電點(diǎn)差異小于0.01pH單位的兩種蛋白質(zhì)，例如肽類、蛋白質(zhì)的分離。第十六章臨床電泳分析儀器（五）毛細(xì)管等速電泳毛細(xì)管內(nèi)首先導(dǎo)入具有比被分離各組分高電泳淌度的前導(dǎo)電解質(zhì)，然后進(jìn)樣，隨后再導(dǎo)入比各分離組份低電泳淌度的尾隨電解質(zhì)，在強(qiáng)電場(chǎng)的作用下，各被分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨電解質(zhì)之間的空隙中發(fā)生分離。

第十六章臨床電泳分析儀器

（六）毛細(xì)管電色譜它包含了電泳和色譜兩種機(jī)制，是在毛細(xì)管中填充或在毛細(xì)管壁上鍵合（或涂壁）固定相，從而構(gòu)成毛細(xì)管色譜柱，依靠電滲流推動(dòng)流動(dòng)相，攜帶樣品遷移，根據(jù)樣品分子的質(zhì)荷比、分子尺寸及分配系數(shù)的差別而分離。

06-13

CEC-加壓毛細(xì)管電色譜儀第十六章臨床電泳分析儀器四、毛細(xì)管電泳儀的基本結(jié)構(gòu)毛細(xì)管電泳儀的結(jié)構(gòu)并不復(fù)雜，主要有高壓源、毛細(xì)管柱、檢測(cè)器，以及兩個(gè)供毛細(xì)管兩端插入而又可和電源相連的緩沖液槽。

（一）毛細(xì)管柱（二）檢測(cè)器（三）毛細(xì)管電泳法的進(jìn)樣技術(shù)

06-14毛細(xì)管電泳儀第十六章臨床電泳分析儀器

六、常用各種電泳儀簡(jiǎn)介（一）穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀是中壓電泳儀。其輸出電壓的調(diào)節(jié)范圍為0V～600V、輸出電流為0mA～100mA。該機(jī)工作穩(wěn)定性好、調(diào)節(jié)范圍寬，并設(shè)有完善的短路保護(hù)電路和過(guò)流保護(hù)電路，是目前國(guó)內(nèi)中、低壓電泳實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用最廣泛的電泳儀之一。

06-15穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀第十六章臨床電泳分析儀器（二）全自動(dòng)醋纖膜電泳儀全自動(dòng)醋纖膜電泳儀為全自動(dòng)電泳儀，有可見(jiàn)光單系統(tǒng)，使用醋酸纖維薄膜電泳片，優(yōu)點(diǎn)為自動(dòng)化程度高。只需將樣品、試劑、電泳片放好，人員可離機(jī)完成實(shí)驗(yàn)并得到結(jié)果。（三）全自動(dòng)熒光/可見(jiàn)光雙系統(tǒng)電泳儀全自動(dòng)熒光/可見(jiàn)光雙系統(tǒng)電泳儀為全自動(dòng)電泳儀，具有熒光/可見(jiàn)光雙系統(tǒng)，在使用熒光試劑項(xiàng)目如CK、LD同工酶時(shí)為全自動(dòng)。只需將樣品、試劑、瓊脂糖凝膠電泳膠片放好后，操作人員可離機(jī)完成實(shí)驗(yàn)并得到結(jié)果第十六章臨床電泳分析儀器（四）全自動(dòng)瓊脂糖電泳儀全自動(dòng)電泳儀，有可見(jiàn)光單系統(tǒng)，使用瓊脂糖凝膠電泳膠片，優(yōu)點(diǎn)為靈敏度高，可適用于低濃度蛋白檢驗(yàn)。該儀器自動(dòng)化程度較差，當(dāng)電泳結(jié)束和染色脫色完成后，工作人員必須將電泳片由機(jī)器中取出。

第十六章臨床電泳分析儀器（五）雙向電泳及雙向電泳-液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用雙向電泳是將樣品進(jìn)行電泳后，在它的直角方向再進(jìn)行一次電泳。雙向電泳第一向?yàn)榈入娋劢?，第二向?yàn)樘荻萐DS電泳。樣品經(jīng)過(guò)電荷與質(zhì)量?jī)纱畏蛛x后可得到分子的等電點(diǎn)、分子量等信息。這是目前所有電泳技術(shù)中分辨率最高，信息量最多的技術(shù)，已成為分析復(fù)雜蛋白混合物的基本工具。

第十六章臨床電泳分析儀器（六）高效毛細(xì)管電泳及高效毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜聯(lián)用高效毛細(xì)管電泳是以彈性石英毛細(xì)管為分離通道，以高壓直流電場(chǎng)為推動(dòng)力，依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的電泳分離分析方法。高效毛細(xì)管電泳是一種迅速發(fā)展的分離技術(shù)，儀器簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、分析速度快、分離效率高、操作模式多、開發(fā)分析方法容易、實(shí)驗(yàn)成本低、消耗少、應(yīng)用范圍極廣。

第十六章臨床電泳分析儀器（七）毛細(xì)管電泳芯片利用毛細(xì)管電泳芯片可以進(jìn)行DNA長(zhǎng)度分析、序列分析和基因分型等研究。是利用芯片分離熒光標(biāo)記的寡核苷酸，整個(gè)分離過(guò)程在45s之內(nèi)，而芯片的長(zhǎng)度僅為3.8cm。因?yàn)槠淇沙休d高電壓（2300V/cm）并具有較小的樣品體積，故有利于得到較好的分離效果。

第十六章臨床電泳分析儀器（八）DNA測(cè)序系統(tǒng)

該系統(tǒng)利用凝膠毛細(xì)管的原理，將多道毛細(xì)管陣列設(shè)計(jì)，用四種不同的熒光染色標(biāo)記4種核苷酸，在模板上合成DNA單鏈，然后在DNA外切酶的作用下進(jìn)行堿基的連續(xù)水解和釋放，用激光識(shí)別和記錄釋放的堿基。

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DNA測(cè)序系統(tǒng)第十六章臨床電泳分析儀器第五節(jié)電泳儀的臨床應(yīng)用

一、血清蛋白電泳

新鮮血清經(jīng)醋酸纖維薄膜或瓊脂糖電泳、染色后，通?？梢?jiàn)5條帶，