GB/T 41133-2022 番茄制品中番茄紅素、葉黃素、胡蘿卜素含量的測定 超高效液相色譜法（正式版）

ICS67.080胡蘿卜素含量的測定超高效液相色譜法Determinationoflycopen國家市場監(jiān)督管理總局國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)IGB/T41133—2022本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由全國質(zhì)量監(jiān)管重點(diǎn)產(chǎn)品檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC374)提出并歸口。通標(biāo)(北京)認(rèn)證有限公司。1GB/T41133—2022胡蘿卜素含量的測定超高效液相色譜法2規(guī)范性引用文件3術(shù)語和定義5.4正己烷(C?H?)。5.5無水乙醇(C?H?OH):分析純。5.6二丁基羥基甲苯(C??H?4O,BHT):分析純。5.8二氯甲烷(CH?Cl?)。GB/T41133—20225.100.1%BHT和二氯甲烷溶液：用分析天平(6.3)稱取1.0gBHT(5.6),加入1000mL二氯甲烷5.12番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(C??H??,CAS號(hào)：502-65-8):純度大于或等于98%。5.13葉黃素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(C??H??O?,CAS號(hào)：127-40-2):純度大于或等于98%。5.14α-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(C??H??,CAS號(hào)：7488-99-5):純度大于或等于98%。5.16番茄紅素儲(chǔ)備液(50μg/mL):用分析天平(6.3)準(zhǔn)確稱取5mg(精確至0.01mg)番茄紅素(5.12),以0.1%BHT和二氯甲烷溶液(5.10)溶解并定容至100mL。該標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液應(yīng)充氮避光置于-20℃或以下的冰箱中保存，有效期3個(gè)月。番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液使用前應(yīng)按附錄A的規(guī)定校正。0.1%BHT和二氯甲烷溶液(5.10)溶解并定容至100mL。該標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液應(yīng)充氮避光置于-20℃或以下的冰箱中保存，有效期6個(gè)月。葉黃素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液使用前應(yīng)按附錄A的規(guī)定校正。5.18α-胡蘿卜素儲(chǔ)備液(50μg/mL):用分析天平(6.3)準(zhǔn)確稱取5mg(精確至0.01mg)α-胡蘿卜素(5.14),以0.1%BHT和二氯甲烷溶液(5.10)溶解并定容至100mL。該標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液應(yīng)充氮避光置于-20℃或以下的冰箱中保存，有效期6個(gè)月。α-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液使用前應(yīng)按附錄A的規(guī)定5.19β-胡蘿卜素儲(chǔ)備液(50μg/mL):用分析天平(6.3)準(zhǔn)確稱取5mg(精確至0.01mg)β-胡蘿卜素(5.15),以0.1%BHT和二氯甲烷溶液(5.10)溶解并定容至100mL。該標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液應(yīng)充氮避光置于-20℃或以下的冰箱中保存，有效期6個(gè)月。β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液使用前應(yīng)按附錄A的規(guī)定校正。5個(gè)25mL棕色容量瓶中，用0.1%BHT、乙醇和二氯甲烷溶液(5.11)定容至刻度，得到質(zhì)量濃度為0.100μg/mL、0.200μg/mL、0.400μg/mL、0.800μg/mL、2.00μg/mL的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。臨用6.2紫外分光光度計(jì)。6.4組織搗碎機(jī)。6.5渦旋振蕩器。6.6減壓濃縮裝置。6.7固相萃取裝置。6.8離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于5000r/min。23GB/T41133—2022除非另行說明，所有試驗(yàn)操作應(yīng)在500nm以下紫外光的黃色品充分混勻后，儲(chǔ)存于樣品瓶中。制備好的試樣應(yīng)充氮密封后置于-20℃或以下的冰箱中保存。用分析天平(6.3)稱取5g(精確到0.01g)試樣(7.2.1)于50mL聚丙烯離心管中，加入10mL水(5.1),混勻，加入10mL無水乙醇(5.5),15mL萃取溶劑(5.9)于避光條件下用渦旋振蕩器(6.5)提取3min后，用離心機(jī)(6.8)5000r/min離心3min,吸取上清液于另一50mL聚丙烯離心管中，在原離心于固相萃取裝置(6.7)中將提取液(7.2.2)以約1mL/min的流速過已活化的中性氧化鋁固相萃取b)流動(dòng)相A:甲醇(5.7)十二氯甲烷(5.8)(97:3);流動(dòng)相B:水(5.1),洗脫梯度應(yīng)符合表1的時(shí)間min流速mL/min流動(dòng)相A%流動(dòng)相B%884GB/T41133—2022表1多環(huán)芳烴分析用C?色譜柱-超高效液相色譜法洗脫梯度條件(續(xù))時(shí)間min流速mL/min流動(dòng)相A%流動(dòng)相B%4.50022.5887.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作按照7.3測試條件，將混合標(biāo)準(zhǔn)工作液(5.20)注入超高效液相色譜儀(6.1)中進(jìn)行測試，測定相應(yīng)的峰面積，以混合標(biāo)準(zhǔn)工作液(5.20)的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。7.5試樣溶液的測定按照7.3測試條件，將待測樣品溶液(7.2.3)注入超高效液相色譜儀(6.1)中進(jìn)行測試。待測樣品溶液中目標(biāo)物質(zhì)的響應(yīng)值應(yīng)在儀器線性相應(yīng)范圍內(nèi)，否則應(yīng)適當(dāng)稀釋?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)工作液(5.20)與待測樣液等體積進(jìn)樣。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜峰的保留時(shí)間和峰面積，對(duì)試樣溶液的色譜峰根據(jù)保留時(shí)間進(jìn)行定性，外標(biāo)法定量。番茄紅素、葉黃素、α-胡蘿卜素和β-胡蘿卜素混合標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見附錄B。8結(jié)果計(jì)算試樣中組分(番茄紅素、葉黃素、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素)的含量X;的計(jì)算按式(1)進(jìn)行： (1)式中：X,——試樣中各組分的含量，單位為微克每百克(μg/100g);p;——從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的試樣溶液中各組分的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);V——樣品定容體積，單位為毫升(mL);f——稀釋倍數(shù)；m———試樣的取樣量，單位為克(g);100——換算系數(shù)。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留3位有效數(shù)字。9精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。10檢出限和定量限本文件的檢出限：當(dāng)取樣量為5g、定容體積為2mL時(shí)，葉黃素的檢出限為1μg/100g,番茄紅素、5GB/T41133—2022本文件的定量限：當(dāng)取樣量為5g、定容體積為2mL時(shí)，葉黃素的定量限為3μg/100g,番茄紅素、6(規(guī)范性)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的校正A.1試驗(yàn)步驟使用前，應(yīng)對(duì)番茄紅素、葉黃素、α-胡蘿卜素和β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度進(jìn)行校正。分別取番茄紅素、α-胡蘿卜素和β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液100μL于10mL棕色容量瓶中，用正己烷(5.4)定容至刻度，混勻，用1cm石英比色杯，以正己烷(5.4)為空白參比，用紫外分光光度計(jì)(6.2)按表A.1的測定波長測定其吸光度。取葉黃素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液100μL于10mL棕色容量瓶中，用乙醇(5.5)定容至刻度，混勻，用1cm石英比色杯，以乙醇(5.5)為空白參比，用紫外分光光度計(jì)(6.2)按表A.1的測定波長測定其吸光度。表A.1各類胡蘿卜素測定波長及百分吸光系數(shù)目標(biāo)物測定波長1%比色吸光系數(shù)E番茄紅素葉黃素α-胡蘿卜素β-胡蘿卜素A.2結(jié)果計(jì)算按式(A.1)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度：p——