發(fā)育毒性與致畸作用專家講座

第九章發(fā)育毒性與致畸作用西安交通大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院雷榮輝leirh@發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第1頁[主要內(nèi)容]1.發(fā)育毒性和致畸作用基本概念2.發(fā)育毒性和致畸作用特點和影響原因3.發(fā)育毒性劑量-反應(yīng)模式4.母體毒性與發(fā)育毒性5.發(fā)育毒性和致畸作用慣用評價方法:動物發(fā)育毒性試驗、流行病學(xué)研究、替換試驗。

發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第2頁第一節(jié)概述

一、發(fā)育毒理學(xué)（developmentaltoxicology）：是毒理學(xué)主要分支學(xué)科，是研究發(fā)育生物體在受精卵、妊娠期、出生后、直到性成熟發(fā)育過程中，因為出生前暴露于環(huán)境有害因子造成異常發(fā)育結(jié)局及相關(guān)作用機制、發(fā)病原理、影響原因和毒物動力學(xué)等。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第3頁畸胎學(xué)（古代）當(dāng)代試驗畸胎學(xué)（19世紀(jì)）發(fā)育毒理學(xué)發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第4頁從畸胎學(xué)到發(fā)育毒理學(xué)

畸胎學(xué)(Teratology）作為一個描述性科學(xué)在有文字之前就已經(jīng)存在了。最早能夠追溯到6500D.B。雜交理論（Hybridetheory）認(rèn)為畸形是人和動物雜交結(jié)果而且這種雜交動物廣泛存在于神話傳說中，如人頭馬身怪物、人頭牛身等。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第5頁當(dāng)代試驗畸胎學(xué)：始于19世紀(jì)，研究者注意到作用時間在決定畸形類型方面比損傷性質(zhì)更主要。

從畸胎學(xué)到發(fā)育毒理學(xué)物理（震動、倒置、針刺）化學(xué)原因雞蛋畸形小雞神經(jīng)管缺點、無腦畸形、脊柱裂、獨眼畸形、心臟缺點、位置顛倒、聯(lián)體雙胞胎等。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第6頁年份原因或受試原因先天異常190519211928193519371942194419401952195219591961X射線照射哺乳動物脂肪缺乏飲食人孕期接收X線照射VitA缺乏飲食孕期給予一些激素孕婦感染風(fēng)疹病毒孕婦營養(yǎng)缺乏廣島、長崎原子彈輻射溴化鈉孕婦服用氨基喋呤孕婦食用甲基汞污染魚孕婦服用反應(yīng)停出生動物發(fā)育異常出生動物發(fā)育異常小頭圍和智力遲鈍出生豬眼缺點和其它畸形嚙齒動物性分化異常先天性白內(nèi)障,耳聾,心臟病各種發(fā)育異常唐氏綜合征(小頭伴智力不全)出生后行為功效異常(大鼠)胎兒嚴(yán)重畸形流產(chǎn)先天性水俁病(小頭,神經(jīng)缺點)造成“災(zāi)難”性事件致畸研究簡史發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第7頁

反應(yīng)停（thalidomide）事件孕婦理想選擇？1953年，聯(lián)邦德國一家名為ChemieGruenenthal制藥企業(yè)研究人員發(fā)覺，鎮(zhèn)靜安眠藥反應(yīng)停對孕婦懷孕早期妊娠嘔吐療效極佳。1957年10月1日該企業(yè)將反應(yīng)停正式推向市場。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第8頁

反應(yīng)停便成了“孕婦理想選擇”（當(dāng)初廣告用語），此藥在歐洲、亞洲、非洲、澳洲和南美洲被醫(yī)生量處方給孕婦以治妊娠嘔吐?？茖W(xué)家們在研制反應(yīng)停時并沒有料到這種藥品會產(chǎn)生如此可怕副作用。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第9頁令人恐怖副作用到了1960年，歐洲醫(yī)生們開始發(fā)覺，當(dāng)?shù)赜蚧螊雰撼錾曙@著上升。這些嬰兒有是四肢畸形（主要是雙上肢短肢畸形），還有是腭裂、盲兒、聾兒或內(nèi)臟畸形。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第10頁西德Lenz和澳大利亞McBride兩人同時于1961年分別獨立確認(rèn)反應(yīng)停為誘發(fā)短肢畸形病因。反應(yīng)停被迫從市場撤回，動物模型復(fù)制成功。其致畸劑量為1mg/(kg.d)，只要末次月經(jīng)后6~8周內(nèi)口服200mg反應(yīng)停便可引發(fā)嚴(yán)重短肢畸形；服藥婦女還有流產(chǎn)、早產(chǎn)和死胎等發(fā)生。(孕婦口服劑量是50-200mg/d)據(jù)推算，當(dāng)初全世界有7000~10000畸形兒是由反應(yīng)停所致。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第11頁服用過量維生素引發(fā)畸形維生素A每日服用5萬單位（相當(dāng)于濃縮A丸劑2丸、或濃縮魚肝油滴劑30滴），連續(xù)3個月，會使胎兒骨骼畸形、并指、腭裂、眼與腦畸形、腎及中樞神經(jīng)損害。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第12頁酒精胎兒綜合征發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第13頁上述事件讓人們逐步認(rèn)識到生物、物理、化學(xué)原因和不良生活癖好都可引發(fā)人類畸形；尤其是反應(yīng)停事件發(fā)生，大大推進了外源化學(xué)物致畸作用和發(fā)育毒性研究及新藥發(fā)育毒理學(xué)研究和管理法規(guī)建立。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第14頁悲劇帶來福音！1966年美國食品與藥品管理局（FDA）提出三段生殖毒性試驗指南，其中包含對致畸等發(fā)育毒性評價。1986年美國環(huán)境保護局（EPA）提出可疑發(fā)育毒物危險度評價指南，第一次明確提出要對化學(xué)物進行發(fā)育毒性評價。從20世紀(jì)70年代起，我國已開始了對藥品、農(nóng)藥、食品添加劑和環(huán)境污染物致畸研究，并把致畸試驗、生殖毒性試驗列為新藥、農(nóng)藥、食品及首次進口化學(xué)品安全性毒理學(xué)評價主要組成部分。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第15頁

第二節(jié)發(fā)育毒性與致畸性一、基本概念

畸形（malformation）：指發(fā)育生物體解剖學(xué)上形態(tài)結(jié)構(gòu)缺點。對外觀、生理功效和（或）壽命等可產(chǎn)生有害影響，能夠存活也可能死亡。

致畸物（teratogen）:

致畸作用（teratogeniceffect）:致畸性（teratogenicity）:發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第16頁發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第17頁發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第18頁發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第19頁發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第20頁發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第21頁是由遺傳和遺傳外原因控制外觀改變，或因為分化改變而引發(fā)差異。指在同一種屬子代與親代之間或子代個體之間，有時出現(xiàn)不完全相同現(xiàn)象。比如肋骨或椎骨數(shù)目多于或少于正常，甚至一些內(nèi)臟易位都屬于變異。

2.變異發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第22頁普通認(rèn)為變異不影響正常生理功效，更不危及生命。不過在動物致畸試驗中，假如某種變異出現(xiàn)較多，并呈一定劑量——效應(yīng)關(guān)系，應(yīng)該引發(fā)注意。2.變異發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第23頁廣義上包含孕體結(jié)構(gòu)和功效方面各種損害，狹義指孕體死亡和生長發(fā)育遲緩，不包含結(jié)構(gòu)畸形。區(qū)分胚體和胎體兩個階段；每個階段損害主要特點。3.胚體-胎體毒性(embryo-fetaltoxicity)發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第24頁指出生前后接觸有害原因，子代個體發(fā)育為成體之前誘發(fā)有害影響，主要表現(xiàn)為：發(fā)育生物體死亡生長改變結(jié)構(gòu)異常功效缺點

4.發(fā)育毒性（developmentaltoxicity）發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第25頁

發(fā)育毒性主要表現(xiàn)發(fā)育生物體死亡：包含受精卵未發(fā)育即死亡；胚泡未著床即死亡（早早孕丟失）；著床后發(fā)育到某一階段死亡。早期死亡被吸收或自子宮排出（自然流產(chǎn)）；晚期死亡成為死胎。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第26頁

發(fā)育毒性主要表現(xiàn)生長改變（alteredgrowth）:生長遲緩，生長發(fā)育指標(biāo)低于正常對照均值2個標(biāo)準(zhǔn)差。結(jié)構(gòu)異常（structuralabnormality）:指胎兒形態(tài)結(jié)構(gòu)異常，即畸形。功效缺點（functionaldeficiency）:即胎仔生化、生理、代謝、免疫、神經(jīng)活動及行為缺點或異常。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第27頁5.出生缺點（birthdefect):指嬰兒出生前即已形成發(fā)育障礙，包含畸形和功效缺點。如先天性心臟病、唇腭裂、神經(jīng)管畸形、尿道下裂、隱睪癥等。6.不良妊娠結(jié)局（adversepregnancyoutcomes)：指妊娠后不能產(chǎn)生外觀和功效正常子代。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第28頁二、發(fā)育毒性作用特點和影響原因與對其它器官系統(tǒng)毒性作用相比，外源化學(xué)物發(fā)育毒性作用有顯著特點:致畸作用受到各種原因影響，包含敏感期、遺傳類型、劑量、母體毒性等。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第29頁（一）發(fā)育各階段發(fā)育毒性作用特點和致畸敏感期卵子受精后一直發(fā)育直至出生為止，都稱為孕體。從受精到新生兒發(fā)育過程經(jīng)歷著:著床前期器官形成期

最輕易引發(fā)畸形階段胎兒期圍生期和出生后發(fā)育期發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第30頁1.著床前期又稱為分化前期，從受精時算起，到完成著床之前。該期限在人類為11-12天；嚙齒動物為前6天。這時受損傷胚泡輕易死亡，稱為著床前丟失。有些化學(xué)毒物作用于胚泡，使之死亡而丟失。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第31頁著床前期發(fā)育毒性

普通認(rèn)為，此時極少發(fā)生特異致畸效應(yīng)。也有著床前期接觸毒物造成胎兒畸形例子。如：

甲基亞硝脲

子代神經(jīng)管缺點小鼠妊娠第2.5天、3.5天和4.5天

腭

裂

發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第32頁孕體著床后直到硬腭閉合一段時間。是發(fā)生結(jié)構(gòu)畸形關(guān)鍵期(criticalperiod)，也稱致畸敏感期。在此期間，大多數(shù)器官對致畸作用有特殊敏感期，即所謂時間“靶窗”（targetwindow）。自受精之日計算：人是3-8周；大、小鼠是6~15天；家兔為6~18天。2.器官形成期發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第33頁發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第34頁同一劑量一個致畸物在敏感期與胚胎接觸，可因胚胎所處發(fā)育階段不一樣而出現(xiàn)不一樣畸形。Case1：大量維生素A在受精后第8天給予大鼠，主要出現(xiàn)骨骼畸形；在第12天給予，則誘發(fā)腭裂。case2：一樣劑量砷酸鈉在小鼠受精第7天和第9天分別給予，前者主要出現(xiàn)臍疝，后者主要為露腦。器官形成期發(fā)育毒性發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第35頁Rodentdevelopment發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第36頁在器官形成期，染毒除致畸外，也可能引發(fā)胚胎死亡。人和靈長類以流產(chǎn)告終，一胎多仔動物胚胎死亡后被吸收，稱為吸收胎。在這一時期，外源化學(xué)物表現(xiàn)出發(fā)育毒性，以結(jié)構(gòu)畸形最突出，也可有胚胎死亡、生長遲緩。器官形成期發(fā)育毒性發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第37頁

器官形成結(jié)束后（人類從第56-58天起）到分娩一段時間。

以組織分化，生長和生理學(xué)成熟為基本特征，接觸發(fā)育毒物很可能對生長和功效成熟產(chǎn)生效應(yīng)。

全身生長遲緩特異功效障礙經(jīng)胎盤致癌死胎3.胎兒期發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第38頁發(fā)育毒性主要表現(xiàn)：發(fā)育免疫毒性神經(jīng)行為發(fā)育異常兒童期腫瘤4.圍生期和出生后發(fā)育期發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第39頁圍生期和出生后發(fā)育毒性

發(fā)育免疫毒性二噁英、氯氰菊酯、乙醇等→影響出生后T細(xì)胞、B細(xì)胞和吞噬細(xì)胞發(fā)育、分化、遷移、歸巢和功能。最終暫時或永久性損害子代免疫系統(tǒng)。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第40頁圍生期和出生后發(fā)育毒性發(fā)育神經(jīng)毒性表現(xiàn)為對感覺、運動、自主和認(rèn)知影響。妊娠期飲酒→乙醇綜合征胎兒（FAS）。父母親吸煙（煙堿）可改變胎兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)煙堿受體發(fā)育，增加出生后學(xué)習(xí)、行為和注意力障礙。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第41頁圍生期和出生后發(fā)育毒性

兒童期腫瘤圍生期是一生中對致癌物最敏感時期，許多兒童期高發(fā)腫瘤（如急性淋巴細(xì)胞性白血病、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、骶骨前畸胎瘤等）都可能與出生前原因相關(guān)。因為這一時期細(xì)胞增殖快，藥品代謝酶個體發(fā)生不全，免疫監(jiān)視功效低。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第42頁

發(fā)育各階段發(fā)育毒性主要表現(xiàn)

發(fā)育階段

主要表現(xiàn)

著床前期胚胎死亡

器官形成期畸形、胚胎死亡胎兒期生長遲緩、功效不全、胎兒死亡、經(jīng)胎盤致癌新生兒期生長遲緩、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)功效不全、兒童期腫瘤發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第43頁（二）發(fā)育毒性劑量-反應(yīng)模式除了在較高劑量幾乎全窩胚胎死亡外，正常胎、生長遲緩解結(jié)構(gòu)畸形同時存在：這一類型較常見。在遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于胚胎致死劑量下即可出現(xiàn)致畸，甚至全窩致畸：這種模式表示受試物有高度致畸作用，較少見。只有生長遲緩解胚胎致死，但沒有畸形發(fā)生。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第44頁發(fā)育毒性閾值概念需要極大樣本數(shù)，難以用試驗找出一個發(fā)生率很低劑量-反應(yīng)關(guān)系；多數(shù)發(fā)育毒性機制還不清楚，或支持或不支持閾值存在；考慮個體閾值和群體閾值之間區(qū)分。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第45頁（三）發(fā)育毒性物種差異Species

Humans 0.5mg/kg/day

Mouse 30 60X

Rat 50 100X

Dog 100 200X

Hamster 350 700XDose

(LETD)FoldDifferencefromHumansCross-SpeciesDifferencesin

Response

toThalidomide

發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第46頁三、母體毒性與發(fā)育毒性

母體毒性（maternaltoxicity）：指外源化學(xué)物在一定劑量下，對受孕母體產(chǎn)生損害作用。詳細(xì)表現(xiàn)包含體重減輕、出現(xiàn)一些臨床癥狀、直至死亡。（一）母體原因?qū)Πl(fā)育毒性影響

遺傳學(xué)、疾病、營養(yǎng)、應(yīng)激、對胎盤毒性

發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第47頁（二）母體毒性與胚胎毒性關(guān)系1．含有發(fā)育毒性，但無母體毒性；2．同時出現(xiàn)發(fā)育毒性和母體毒性；3．含有母體毒性，但不含有致畸作用；4．在一定劑量下，既無母體毒性，也不表現(xiàn)發(fā)育毒性。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第48頁

第四節(jié)

發(fā)育毒性和致畸作用試驗與評價

外源化學(xué)物發(fā)育毒性評價動物發(fā)育毒性試驗人群流行病學(xué)調(diào)查發(fā)育毒性替換試驗發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第49頁動物發(fā)育毒性試驗優(yōu)點：

輕易控制接觸條件、接觸動物數(shù)量、年紀(jì)、狀態(tài)及選擇檢測效應(yīng)指標(biāo)（終點）。甚至一些輕微效應(yīng)對研究人體影響很有意義。缺點：試驗結(jié)果外推到人存在不必定性，預(yù)測對人致畸性特異性不夠高；從較高劑量暴露結(jié)果外推到人（暴露劑量較低）有一定困難，況且人與人之間個體差異要比動物更大。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第50頁一、動物發(fā)育毒性試驗主要試驗方案1.三段生殖毒性試驗主要用于評價藥品生殖發(fā)育毒性。2.一代和多代生殖毒性試驗主要用于評價食品添加劑、農(nóng)藥及其它化學(xué)物生殖發(fā)育毒性。3.改進大鼠發(fā)育神經(jīng)毒性試驗程序：1988年EPA公布。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第51頁最正確方案是對成年動物進行染毒并試驗，包

括子代從受精卵到性成熟全部生長發(fā)育階段；觀察期應(yīng)貫通一個完整生命周期。

設(shè)計關(guān)鍵在于試驗對生殖和生長發(fā)育各階段影響無間隔，并可直接或間接評價生殖循環(huán)全過程。最常選取方案為三段生殖毒性試驗。動物發(fā)育毒性試驗基本要求發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第52頁為了進行生殖發(fā)育毒性試驗設(shè)計方便，將連續(xù)、完整生殖發(fā)育過程細(xì)分為以下6個階段：交配性成熟發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第53頁三段生殖毒性試驗示意圖

I

生育力與早期胚胎發(fā)育毒性試驗;II胚體－胎體毒性試驗；III出生前和出生后發(fā)育毒性試驗。實線表示染毒期。處死懷孕前著床前器官形成期胎期新生兒期開始懷孕著床分娩斷乳I4周15天處死♂♀IIIII發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第54頁生育力與早期胚胎發(fā)育毒性試驗流程圖發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第55頁胚胎-胎仔發(fā)育毒性試驗流程圖發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第56頁圍產(chǎn)期毒性試驗流程圖發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第57頁致畸試驗致畸作用是發(fā)育毒性中最主要、最輕易觀察到一個表現(xiàn)，故化學(xué)物發(fā)育毒性評定主要經(jīng)過致畸試驗。在致畸試驗中除可觀察到出生幼仔畸形外，也可同

時發(fā)覺生長發(fā)育遲緩解胚胎致死。Ⅱ段試驗是評定化學(xué)物是否含有致畸作用標(biāo)準(zhǔn)方法。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第58頁動物選擇:普通要求選取兩種哺乳動物嚙齒類：首先考慮大鼠，也可采取小鼠。非嚙齒類：多項選擇家兔。致畸試驗發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第59頁劑量分組試驗劑量組最少應(yīng)設(shè)三個劑量組：高、中、低。每組劑量成等比級數(shù)關(guān)系。另設(shè)對照組。標(biāo)準(zhǔn)上高劑量組可引發(fā)母體輕度中毒；中劑量組可允許母體出現(xiàn)一些極輕微中毒癥狀；最低劑量組不應(yīng)觀察到任何中毒癥狀。致畸試驗發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第60頁動物交配將性成熟雌雄動物按雌雄1：1或2：1百分比同籠交配，每日經(jīng)過陰栓或陰道涂片精子檢驗，將已確定受孕雌鼠隨機分入各劑量組和對照組。出現(xiàn)陰栓或精子之日即為受孕第1天。致畸試驗發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第61頁動物染毒染毒時間：在器官形成期，即從著床期到硬腭閉合大、小鼠孕期第6~15天兔孕期6~18天。染毒方式與路徑應(yīng)與人體實際接觸情況一致普通多經(jīng)口給予。致畸試驗發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第62頁染毒期間觀察妊娠動物：體征和死亡（1次/日）;體重和體重改變（2次/日）；攝食量（1次/日）；其它毒性研究中已證實主要靶效應(yīng)。致畸試驗發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第63頁胎體檢驗：自然分娩前1~2天將受孕動物處死：普通大鼠在受孕后第19~20天；小鼠第18~19天；家兔在第29天。致畸試驗發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第64頁剖腹處死時對全部妊娠動物進行尸體解剖和肉眼檢驗。保留肉眼發(fā)覺有改變臟器，方便進行組織學(xué)評價。取出子宮及活產(chǎn)胎體，并另行統(tǒng)計死胎和吸收胎。活胎取出后，先檢驗性別，逐只稱重，并按窩計算平均體重，然后由以下幾方面進行畸形檢驗：外觀畸形內(nèi)臟及軟組織畸形骨骼畸形?；螜z驗只限活產(chǎn)胎體。致畸試驗發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第65頁以上檢驗只能檢出結(jié)構(gòu)與形態(tài)畸形，不能檢出可能發(fā)生生化功效或神經(jīng)行為缺點。故為了全方面了解可能存在先天缺點和生理功效異常，可將試驗雌鼠保留1/4左右待其自然分娩，喂養(yǎng)觀察出生幼仔方便檢驗。致畸試驗發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第66頁結(jié)果評定：對母體毒性評價指標(biāo)：體重、體重改變、食物和水消耗量、死亡率、交配率、受孕率、臟器重及母體畸胎出現(xiàn)率等。致畸試驗發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第67頁結(jié)果評定：對孕體影響評價指標(biāo)：著床數(shù)、黃體數(shù)、平均胎體體重/窩、活胎數(shù)/窩、吸收胎數(shù)/窩、畸胎數(shù)/窩等。致畸試驗發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第68頁結(jié)果評價發(fā)育毒性劑量-反應(yīng)關(guān)系比較復(fù)雜。伴隨劑量增加，先出現(xiàn)發(fā)育遲緩，然后胚胎-胎兒死亡和畸形發(fā)生，劑量很大時可致全部死亡。試驗最終應(yīng)能得出受試物對母體和胚胎-胎兒各自NOAEL和LOAEL。為了比較不一樣化學(xué)物致畸強度，可計算致畸指數(shù)：致畸試驗發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第69頁致畸指數(shù)=

評定標(biāo)準(zhǔn)：

致畸指數(shù)在10以下不致畸；10-100為致畸；100以上為強致畸。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第70頁動物試驗結(jié)果外推到人問題動物試驗中所見發(fā)育毒性類型，不一定與人所產(chǎn)生一樣；發(fā)育毒性全部表現(xiàn)（死亡、生長遲緩、結(jié)構(gòu)異常和功效缺點），與人都是相關(guān)系，不應(yīng)僅注意結(jié)構(gòu)異常；人在孕期中攝入量不太小物質(zhì)，只要對試驗動物產(chǎn)生發(fā)育毒性，就表示對人是一個潛在危害。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第71頁發(fā)育毒性和致畸作用試驗與評價（二）流行病學(xué)研究用流行病學(xué)方法研究環(huán)境中生殖毒物對人群生殖、發(fā)育影響情況，包含性質(zhì)，程度以及原因。環(huán)境流行病學(xué)研究必須配合以環(huán)境化學(xué)毒物檢測和人體生物標(biāo)志物檢測即分子流行病學(xué)研究。環(huán)境流行病學(xué)研究不是普通流行病學(xué)調(diào)查，須科學(xué)設(shè)計、嚴(yán)格選擇對象和對照，觀察指標(biāo)客觀量化。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第72頁

(1)在一些罕見病例中，可能不需要正式研究就能夠識別異常出生結(jié)局原因。

(2)對老污染物或老產(chǎn)品只能采取回顧性或橫斷面調(diào)查，這類調(diào)查較難取得明確結(jié)論。

需要足夠大效應(yīng)和研究人群。

在出生時異常結(jié)局發(fā)生率不能反應(yīng)異常真實比率。3.病例匯報和出生缺點監(jiān)測登記對取得人類發(fā)育毒性證據(jù)是有用。

流行病學(xué)研究發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第73頁確認(rèn)人類致畸物標(biāo)準(zhǔn)：一個特殊缺點或幾個缺點并發(fā)（綜合征）頻率突然增加。缺點增加與某種已知環(huán)境改變（如一個新藥廣泛使用）相關(guān)聯(lián)。在妊娠特殊階段已知暴露于某種環(huán)境改變，產(chǎn)生有特征性缺點綜合征。缺乏妊娠時引發(fā)特征性缺點嬰兒其它共同因子。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第74頁致畸化學(xué)物分類

國際生命科學(xué)研究所（InternationalLifeScienceInstitute,ILSI）：依據(jù)動物試驗中發(fā)育毒性類型、嚴(yán)重程度和發(fā)生率，分為4級ICH人類用藥危險性分類：分為5類，供臨床醫(yī)師參考美國FDA：依據(jù)藥品對人孕體造成危害證據(jù)，分為5類歐洲致畸物危險度分級分類標(biāo)準(zhǔn)，分5級WHO:全球化學(xué)品統(tǒng)一分類和標(biāo)簽制度（GHS）致畸指數(shù)＝母體LD50/胎體最小致畸劑量。<10普通不致畸,10~100為致畸,>100為強致畸發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第75頁致畸化學(xué)物分類（ILSI,1989）基準(zhǔn)A類B類C類D類1．最小母體中毒劑量與最小致畸劑量比值2．畸胎率3．較低劑量時畸形類型4．靶細(xì)胞5．安全系數(shù)范圍遠(yuǎn)大于1高，與劑量相關(guān)有特定器官系統(tǒng)特定細(xì)胞~400大于1或兩劑量間有很大重合高，與劑量相關(guān)普通為多發(fā)性，也可能有特定特點特定細(xì)胞~300小于1低，但與劑量相關(guān)無特異性，廣泛多發(fā)泛化、非特定細(xì)胞~250母體中毒時無致畸

—

—不詳~100

發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第76頁妊娠期用藥類型（ICH）

人群研究結(jié)果動物試驗結(jié)果＋－無可用資料＋－無可用資料X或DBC1X或DABX或DA或BC2A、B、C2：僅在顯著需要時，妊娠期間能夠使用C1：僅在假如證實可能效益與對胎兒可能危險比較可取時，妊娠期間能夠使用D：假如在妊娠期間使用，應(yīng)通知病人對胎兒可能危害X：在妊娠期間或可能妊娠婦女中禁止使用發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第77頁發(fā)育毒性初篩和替換試驗體外初篩試驗體內(nèi)初篩試驗發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第78頁體外初篩試驗伴隨細(xì)胞、組織和器官培養(yǎng)技術(shù)進步，發(fā)展了一些發(fā)育毒物體外初篩試驗，建立了全胚胎培養(yǎng)、器官培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)體外試驗法。這些試驗方法結(jié)果與沒有母體毒性整體動物致畸試驗有很好相關(guān)，且可嚴(yán)格控制試驗條件，故可用這些試驗作發(fā)育毒物初篩，預(yù)測對整體動物致畸性，發(fā)覺致畸作用靶器官，或說明致畸機制等。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第79頁常見體外初篩試驗有：大鼠全胚胎培養(yǎng)器官培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)法體外初篩試驗發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第80頁大鼠全胚胎培養(yǎng)自從１９７８年首次在體外進行嚙齒類動物全胚胎培養(yǎng)成功后，這一技術(shù)逐步被應(yīng)用于毒理學(xué)研究。用于著床后全胚胎培養(yǎng)胚體正處于器官發(fā)生期，是對有毒外源物高度敏感發(fā)育階段，能很好反應(yīng)化學(xué)物對胚體影響。該方法在毒理學(xué)、藥理學(xué)等領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用，但本法技術(shù)難度相對較大，費用高。發(fā)育毒性與致畸作用專家講座第81頁大鼠全胚胎培養(yǎng)詳細(xì)試驗方法；從孕期9～10天大鼠子宮取出胚體，剝?nèi)eichert膜，放入培養(yǎng)液中加入外源化學(xué)物，在孵箱中通氣旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)。觀察心臟搏動、卵黃囊直徑、胚芽、神經(jīng)管閉合、體節(jié)數(shù)目及體長等發(fā)育情況。依據(jù)Brow評分對器官形態(tài)分化做出評價?？珊Y選受試化學(xué)物發(fā)育毒性、