發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座

第九章發(fā)育毒性與致畸作用西安交通大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院雷榮輝leirh@發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第1頁(yè)[主要內(nèi)容]1.發(fā)育毒性和致畸作用基本概念2.發(fā)育毒性和致畸作用特點(diǎn)和影響原因3.發(fā)育毒性劑量-反應(yīng)模式4.母體毒性與發(fā)育毒性5.發(fā)育毒性和致畸作用慣用評(píng)價(jià)方法:動(dòng)物發(fā)育毒性試驗(yàn)、流行病學(xué)研究、替換試驗(yàn)。

發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第2頁(yè)第一節(jié)概述

一、發(fā)育毒理學(xué)（developmentaltoxicology）：是毒理學(xué)主要分支學(xué)科，是研究發(fā)育生物體在受精卵、妊娠期、出生后、直到性成熟發(fā)育過(guò)程中，因?yàn)槌錾氨┞队诃h(huán)境有害因子造成異常發(fā)育結(jié)局及相關(guān)作用機(jī)制、發(fā)病原理、影響原因和毒物動(dòng)力學(xué)等。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第3頁(yè)畸胎學(xué)（古代）當(dāng)代試驗(yàn)畸胎學(xué)（19世紀(jì)）發(fā)育毒理學(xué)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第4頁(yè)從畸胎學(xué)到發(fā)育毒理學(xué)

畸胎學(xué)(Teratology）作為一個(gè)描述性科學(xué)在有文字之前就已經(jīng)存在了。最早能夠追溯到6500D.B。雜交理論（Hybridetheory）認(rèn)為畸形是人和動(dòng)物雜交結(jié)果而且這種雜交動(dòng)物廣泛存在于神話(huà)傳說(shuō)中，如人頭馬身怪物、人頭牛身等。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第5頁(yè)當(dāng)代試驗(yàn)畸胎學(xué)：始于19世紀(jì)，研究者注意到作用時(shí)間在決定畸形類(lèi)型方面比損傷性質(zhì)更主要。

從畸胎學(xué)到發(fā)育毒理學(xué)物理（震動(dòng)、倒置、針刺）化學(xué)原因雞蛋畸形小雞神經(jīng)管缺點(diǎn)、無(wú)腦畸形、脊柱裂、獨(dú)眼畸形、心臟缺點(diǎn)、位置顛倒、聯(lián)體雙胞胎等。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第6頁(yè)年份原因或受試原因先天異常190519211928193519371942194419401952195219591961X射線(xiàn)照射哺乳動(dòng)物脂肪缺乏飲食人孕期接收X線(xiàn)照射VitA缺乏飲食孕期給予一些激素孕婦感染風(fēng)疹病毒孕婦營(yíng)養(yǎng)缺乏廣島、長(zhǎng)崎原子彈輻射溴化鈉孕婦服用氨基喋呤孕婦食用甲基汞污染魚(yú)孕婦服用反應(yīng)停出生動(dòng)物發(fā)育異常出生動(dòng)物發(fā)育異常小頭圍和智力遲鈍出生豬眼缺點(diǎn)和其它畸形嚙齒動(dòng)物性分化異常先天性白內(nèi)障,耳聾,心臟病各種發(fā)育異常唐氏綜合征(小頭伴智力不全)出生后行為功效異常(大鼠)胎兒嚴(yán)重畸形流產(chǎn)先天性水俁病(小頭,神經(jīng)缺點(diǎn))造成“災(zāi)難”性事件致畸研究簡(jiǎn)史發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第7頁(yè)

反應(yīng)停（thalidomide）事件孕婦理想選擇？1953年，聯(lián)邦德國(guó)一家名為ChemieGruenenthal制藥企業(yè)研究人員發(fā)覺(jué)，鎮(zhèn)靜安眠藥反應(yīng)停對(duì)孕婦懷孕早期妊娠嘔吐療效極佳。1957年10月1日該企業(yè)將反應(yīng)停正式推向市場(chǎng)。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第8頁(yè)

反應(yīng)停便成了“孕婦理想選擇”（當(dāng)初廣告用語(yǔ)），此藥在歐洲、亞洲、非洲、澳洲和南美洲被醫(yī)生量處方給孕婦以治妊娠嘔吐?？茖W(xué)家們?cè)谘兄品磻?yīng)停時(shí)并沒(méi)有料到這種藥品會(huì)產(chǎn)生如此可怕副作用。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第9頁(yè)令人恐怖副作用到了1960年，歐洲醫(yī)生們開(kāi)始發(fā)覺(jué)，當(dāng)?shù)赜蚧螊雰撼錾曙@著上升。這些嬰兒有是四肢畸形（主要是雙上肢短肢畸形），還有是腭裂、盲兒、聾兒或內(nèi)臟畸形。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第10頁(yè)西德Lenz和澳大利亞McBride兩人同時(shí)于1961年分別獨(dú)立確認(rèn)反應(yīng)停為誘發(fā)短肢畸形病因。反應(yīng)停被迫從市場(chǎng)撤回，動(dòng)物模型復(fù)制成功。其致畸劑量為1mg/(kg.d)，只要末次月經(jīng)后6~8周內(nèi)口服200mg反應(yīng)停便可引發(fā)嚴(yán)重短肢畸形；服藥婦女還有流產(chǎn)、早產(chǎn)和死胎等發(fā)生。(孕婦口服劑量是50-200mg/d)據(jù)推算，當(dāng)初全世界有7000~10000畸形兒是由反應(yīng)停所致。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第11頁(yè)服用過(guò)量維生素引發(fā)畸形維生素A每日服用5萬(wàn)單位（相當(dāng)于濃縮A丸劑2丸、或濃縮魚(yú)肝油滴劑30滴），連續(xù)3個(gè)月，會(huì)使胎兒骨骼畸形、并指、腭裂、眼與腦畸形、腎及中樞神經(jīng)損害。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第12頁(yè)酒精胎兒綜合征發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第13頁(yè)上述事件讓人們逐步認(rèn)識(shí)到生物、物理、化學(xué)原因和不良生活癖好都可引發(fā)人類(lèi)畸形；尤其是反應(yīng)停事件發(fā)生，大大推進(jìn)了外源化學(xué)物致畸作用和發(fā)育毒性研究及新藥發(fā)育毒理學(xué)研究和管理法規(guī)建立。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第14頁(yè)悲劇帶來(lái)福音！1966年美國(guó)食品與藥品管理局（FDA）提出三段生殖毒性試驗(yàn)指南，其中包含對(duì)致畸等發(fā)育毒性評(píng)價(jià)。1986年美國(guó)環(huán)境保護(hù)局（EPA）提出可疑發(fā)育毒物危險(xiǎn)度評(píng)價(jià)指南，第一次明確提出要對(duì)化學(xué)物進(jìn)行發(fā)育毒性評(píng)價(jià)。從20世紀(jì)70年代起，我國(guó)已開(kāi)始了對(duì)藥品、農(nóng)藥、食品添加劑和環(huán)境污染物致畸研究，并把致畸試驗(yàn)、生殖毒性試驗(yàn)列為新藥、農(nóng)藥、食品及首次進(jìn)口化學(xué)品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)主要組成部分。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第15頁(yè)

第二節(jié)發(fā)育毒性與致畸性一、基本概念

畸形（malformation）：指發(fā)育生物體解剖學(xué)上形態(tài)結(jié)構(gòu)缺點(diǎn)。對(duì)外觀、生理功效和（或）壽命等可產(chǎn)生有害影響，能夠存活也可能死亡。

致畸物（teratogen）:

致畸作用（teratogeniceffect）:致畸性（teratogenicity）:發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第16頁(yè)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第17頁(yè)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第18頁(yè)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第19頁(yè)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第20頁(yè)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第21頁(yè)是由遺傳和遺傳外原因控制外觀改變，或因?yàn)榉只淖兌l(fā)差異。指在同一種屬子代與親代之間或子代個(gè)體之間，有時(shí)出現(xiàn)不完全相同現(xiàn)象。比如肋骨或椎骨數(shù)目多于或少于正常，甚至一些內(nèi)臟易位都屬于變異。

2.變異發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第22頁(yè)普通認(rèn)為變異不影響正常生理功效，更不危及生命。不過(guò)在動(dòng)物致畸試驗(yàn)中，假如某種變異出現(xiàn)較多，并呈一定劑量——效應(yīng)關(guān)系，應(yīng)該引發(fā)注意。2.變異發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第23頁(yè)廣義上包含孕體結(jié)構(gòu)和功效方面各種損害，狹義指孕體死亡和生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，不包含結(jié)構(gòu)畸形。區(qū)分胚體和胎體兩個(gè)階段；每個(gè)階段損害主要特點(diǎn)。3.胚體-胎體毒性(embryo-fetaltoxicity)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第24頁(yè)指出生前后接觸有害原因，子代個(gè)體發(fā)育為成體之前誘發(fā)有害影響，主要表現(xiàn)為：發(fā)育生物體死亡生長(zhǎng)改變結(jié)構(gòu)異常功效缺點(diǎn)

4.發(fā)育毒性（developmentaltoxicity）發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第25頁(yè)

發(fā)育毒性主要表現(xiàn)發(fā)育生物體死亡：包含受精卵未發(fā)育即死亡；胚泡未著床即死亡（早早孕丟失）；著床后發(fā)育到某一階段死亡。早期死亡被吸收或自子宮排出（自然流產(chǎn)）；晚期死亡成為死胎。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第26頁(yè)

發(fā)育毒性主要表現(xiàn)生長(zhǎng)改變（alteredgrowth）:生長(zhǎng)遲緩，生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)低于正常對(duì)照均值2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差。結(jié)構(gòu)異常（structuralabnormality）:指胎兒形態(tài)結(jié)構(gòu)異常，即畸形。功效缺點(diǎn)（functionaldeficiency）:即胎仔生化、生理、代謝、免疫、神經(jīng)活動(dòng)及行為缺點(diǎn)或異常。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第27頁(yè)5.出生缺點(diǎn)（birthdefect):指嬰兒出生前即已形成發(fā)育障礙，包含畸形和功效缺點(diǎn)。如先天性心臟病、唇腭裂、神經(jīng)管畸形、尿道下裂、隱睪癥等。6.不良妊娠結(jié)局（adversepregnancyoutcomes)：指妊娠后不能產(chǎn)生外觀和功效正常子代。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第28頁(yè)二、發(fā)育毒性作用特點(diǎn)和影響原因與對(duì)其它器官系統(tǒng)毒性作用相比，外源化學(xué)物發(fā)育毒性作用有顯著特點(diǎn):致畸作用受到各種原因影響，包含敏感期、遺傳類(lèi)型、劑量、母體毒性等。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第29頁(yè)（一）發(fā)育各階段發(fā)育毒性作用特點(diǎn)和致畸敏感期卵子受精后一直發(fā)育直至出生為止，都稱(chēng)為孕體。從受精到新生兒發(fā)育過(guò)程經(jīng)歷著:著床前期器官形成期

最輕易引發(fā)畸形階段胎兒期圍生期和出生后發(fā)育期發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第30頁(yè)1.著床前期又稱(chēng)為分化前期，從受精時(shí)算起，到完成著床之前。該期限在人類(lèi)為11-12天；嚙齒動(dòng)物為前6天。這時(shí)受損傷胚泡輕易死亡，稱(chēng)為著床前丟失。有些化學(xué)毒物作用于胚泡，使之死亡而丟失。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第31頁(yè)著床前期發(fā)育毒性

普通認(rèn)為，此時(shí)極少發(fā)生特異致畸效應(yīng)。也有著床前期接觸毒物造成胎兒畸形例子。如：

甲基亞硝脲

子代神經(jīng)管缺點(diǎn)小鼠妊娠第2.5天、3.5天和4.5天

腭

裂

發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第32頁(yè)孕體著床后直到硬腭閉合一段時(shí)間。是發(fā)生結(jié)構(gòu)畸形關(guān)鍵期(criticalperiod)，也稱(chēng)致畸敏感期。在此期間，大多數(shù)器官對(duì)致畸作用有特殊敏感期，即所謂時(shí)間“靶窗”（targetwindow）。自受精之日計(jì)算：人是3-8周；大、小鼠是6~15天；家兔為6~18天。2.器官形成期發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第33頁(yè)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第34頁(yè)同一劑量一個(gè)致畸物在敏感期與胚胎接觸，可因胚胎所處發(fā)育階段不一樣而出現(xiàn)不一樣畸形。Case1：大量維生素A在受精后第8天給予大鼠，主要出現(xiàn)骨骼畸形；在第12天給予，則誘發(fā)腭裂。case2：一樣劑量砷酸鈉在小鼠受精第7天和第9天分別給予，前者主要出現(xiàn)臍疝，后者主要為露腦。器官形成期發(fā)育毒性發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第35頁(yè)Rodentdevelopment發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第36頁(yè)在器官形成期，染毒除致畸外，也可能引發(fā)胚胎死亡。人和靈長(zhǎng)類(lèi)以流產(chǎn)告終，一胎多仔動(dòng)物胚胎死亡后被吸收，稱(chēng)為吸收胎。在這一時(shí)期，外源化學(xué)物表現(xiàn)出發(fā)育毒性，以結(jié)構(gòu)畸形最突出，也可有胚胎死亡、生長(zhǎng)遲緩。器官形成期發(fā)育毒性發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第37頁(yè)

器官形成結(jié)束后（人類(lèi)從第56-58天起）到分娩一段時(shí)間。

以組織分化，生長(zhǎng)和生理學(xué)成熟為基本特征，接觸發(fā)育毒物很可能對(duì)生長(zhǎng)和功效成熟產(chǎn)生效應(yīng)。

全身生長(zhǎng)遲緩特異功效障礙經(jīng)胎盤(pán)致癌死胎3.胎兒期發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第38頁(yè)發(fā)育毒性主要表現(xiàn)：發(fā)育免疫毒性神經(jīng)行為發(fā)育異常兒童期腫瘤4.圍生期和出生后發(fā)育期發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第39頁(yè)圍生期和出生后發(fā)育毒性

發(fā)育免疫毒性二噁英、氯氰菊酯、乙醇等→影響出生后T細(xì)胞、B細(xì)胞和吞噬細(xì)胞發(fā)育、分化、遷移、歸巢和功能。最終暫時(shí)或永久性損害子代免疫系統(tǒng)。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第40頁(yè)圍生期和出生后發(fā)育毒性發(fā)育神經(jīng)毒性表現(xiàn)為對(duì)感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)、自主和認(rèn)知影響。妊娠期飲酒→乙醇綜合征胎兒（FAS）。父母親吸煙（煙堿）可改變胎兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)煙堿受體發(fā)育，增加出生后學(xué)習(xí)、行為和注意力障礙。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第41頁(yè)圍生期和出生后發(fā)育毒性

兒童期腫瘤圍生期是一生中對(duì)致癌物最敏感時(shí)期，許多兒童期高發(fā)腫瘤（如急性淋巴細(xì)胞性白血病、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、骶骨前畸胎瘤等）都可能與出生前原因相關(guān)。因?yàn)檫@一時(shí)期細(xì)胞增殖快，藥品代謝酶?jìng)€(gè)體發(fā)生不全，免疫監(jiān)視功效低。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第42頁(yè)

發(fā)育各階段發(fā)育毒性主要表現(xiàn)

發(fā)育階段

主要表現(xiàn)

著床前期胚胎死亡

器官形成期畸形、胚胎死亡胎兒期生長(zhǎng)遲緩、功效不全、胎兒死亡、經(jīng)胎盤(pán)致癌新生兒期生長(zhǎng)遲緩、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)功效不全、兒童期腫瘤發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第43頁(yè)（二）發(fā)育毒性劑量-反應(yīng)模式除了在較高劑量幾乎全窩胚胎死亡外，正常胎、生長(zhǎng)遲緩解結(jié)構(gòu)畸形同時(shí)存在：這一類(lèi)型較常見(jiàn)。在遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于胚胎致死劑量下即可出現(xiàn)致畸，甚至全窩致畸：這種模式表示受試物有高度致畸作用，較少見(jiàn)。只有生長(zhǎng)遲緩解胚胎致死，但沒(méi)有畸形發(fā)生。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第44頁(yè)發(fā)育毒性閾值概念需要極大樣本數(shù)，難以用試驗(yàn)找出一個(gè)發(fā)生率很低劑量-反應(yīng)關(guān)系；多數(shù)發(fā)育毒性機(jī)制還不清楚，或支持或不支持閾值存在；考慮個(gè)體閾值和群體閾值之間區(qū)分。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第45頁(yè)（三）發(fā)育毒性物種差異Species

Humans 0.5mg/kg/day

Mouse 30 60X

Rat 50 100X

Dog 100 200X

Hamster 350 700XDose

(LETD)FoldDifferencefromHumansCross-SpeciesDifferencesin

Response

toThalidomide

發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第46頁(yè)三、母體毒性與發(fā)育毒性

母體毒性（maternaltoxicity）：指外源化學(xué)物在一定劑量下，對(duì)受孕母體產(chǎn)生損害作用。詳細(xì)表現(xiàn)包含體重減輕、出現(xiàn)一些臨床癥狀、直至死亡。（一）母體原因?qū)Πl(fā)育毒性影響

遺傳學(xué)、疾病、營(yíng)養(yǎng)、應(yīng)激、對(duì)胎盤(pán)毒性

發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第47頁(yè)（二）母體毒性與胚胎毒性關(guān)系1．含有發(fā)育毒性，但無(wú)母體毒性；2．同時(shí)出現(xiàn)發(fā)育毒性和母體毒性；3．含有母體毒性，但不含有致畸作用；4．在一定劑量下，既無(wú)母體毒性，也不表現(xiàn)發(fā)育毒性。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第48頁(yè)

第四節(jié)

發(fā)育毒性和致畸作用試驗(yàn)與評(píng)價(jià)

外源化學(xué)物發(fā)育毒性評(píng)價(jià)動(dòng)物發(fā)育毒性試驗(yàn)人群流行病學(xué)調(diào)查發(fā)育毒性替換試驗(yàn)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第49頁(yè)動(dòng)物發(fā)育毒性試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)：

輕易控制接觸條件、接觸動(dòng)物數(shù)量、年紀(jì)、狀態(tài)及選擇檢測(cè)效應(yīng)指標(biāo)（終點(diǎn)）。甚至一些輕微效應(yīng)對(duì)研究人體影響很有意義。缺點(diǎn)：試驗(yàn)結(jié)果外推到人存在不必定性，預(yù)測(cè)對(duì)人致畸性特異性不夠高；從較高劑量暴露結(jié)果外推到人（暴露劑量較低）有一定困難，況且人與人之間個(gè)體差異要比動(dòng)物更大。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第50頁(yè)一、動(dòng)物發(fā)育毒性試驗(yàn)主要試驗(yàn)方案1.三段生殖毒性試驗(yàn)主要用于評(píng)價(jià)藥品生殖發(fā)育毒性。2.一代和多代生殖毒性試驗(yàn)主要用于評(píng)價(jià)食品添加劑、農(nóng)藥及其它化學(xué)物生殖發(fā)育毒性。3.改進(jìn)大鼠發(fā)育神經(jīng)毒性試驗(yàn)程序：1988年EPA公布。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第51頁(yè)最正確方案是對(duì)成年動(dòng)物進(jìn)行染毒并試驗(yàn)，包

括子代從受精卵到性成熟全部生長(zhǎng)發(fā)育階段；觀察期應(yīng)貫通一個(gè)完整生命周期。

設(shè)計(jì)關(guān)鍵在于試驗(yàn)對(duì)生殖和生長(zhǎng)發(fā)育各階段影響無(wú)間隔，并可直接或間接評(píng)價(jià)生殖循環(huán)全過(guò)程。最常選取方案為三段生殖毒性試驗(yàn)。動(dòng)物發(fā)育毒性試驗(yàn)基本要求發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第52頁(yè)為了進(jìn)行生殖發(fā)育毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)方便，將連續(xù)、完整生殖發(fā)育過(guò)程細(xì)分為以下6個(gè)階段：交配性成熟發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第53頁(yè)三段生殖毒性試驗(yàn)示意圖

I

生育力與早期胚胎發(fā)育毒性試驗(yàn);II胚體－胎體毒性試驗(yàn)；III出生前和出生后發(fā)育毒性試驗(yàn)。實(shí)線(xiàn)表示染毒期。處死懷孕前著床前器官形成期胎期新生兒期開(kāi)始懷孕著床分娩斷乳I4周15天處死♂♀IIIII發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第54頁(yè)生育力與早期胚胎發(fā)育毒性試驗(yàn)流程圖發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第55頁(yè)胚胎-胎仔發(fā)育毒性試驗(yàn)流程圖發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第56頁(yè)圍產(chǎn)期毒性試驗(yàn)流程圖發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第57頁(yè)致畸試驗(yàn)致畸作用是發(fā)育毒性中最主要、最輕易觀察到一個(gè)表現(xiàn)，故化學(xué)物發(fā)育毒性評(píng)定主要經(jīng)過(guò)致畸試驗(yàn)。在致畸試驗(yàn)中除可觀察到出生幼仔畸形外，也可同

時(shí)發(fā)覺(jué)生長(zhǎng)發(fā)育遲緩解胚胎致死。Ⅱ段試驗(yàn)是評(píng)定化學(xué)物是否含有致畸作用標(biāo)準(zhǔn)方法。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第58頁(yè)動(dòng)物選擇:普通要求選取兩種哺乳動(dòng)物嚙齒類(lèi)：首先考慮大鼠，也可采取小鼠。非嚙齒類(lèi)：多項(xiàng)選擇家兔。致畸試驗(yàn)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第59頁(yè)劑量分組試驗(yàn)劑量組最少應(yīng)設(shè)三個(gè)劑量組：高、中、低。每組劑量成等比級(jí)數(shù)關(guān)系。另設(shè)對(duì)照組。標(biāo)準(zhǔn)上高劑量組可引發(fā)母體輕度中毒；中劑量組可允許母體出現(xiàn)一些極輕微中毒癥狀；最低劑量組不應(yīng)觀察到任何中毒癥狀。致畸試驗(yàn)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第60頁(yè)動(dòng)物交配將性成熟雌雄動(dòng)物按雌雄1：1或2：1百分比同籠交配，每日經(jīng)過(guò)陰栓或陰道涂片精子檢驗(yàn)，將已確定受孕雌鼠隨機(jī)分入各劑量組和對(duì)照組。出現(xiàn)陰栓或精子之日即為受孕第1天。致畸試驗(yàn)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第61頁(yè)動(dòng)物染毒染毒時(shí)間：在器官形成期，即從著床期到硬腭閉合大、小鼠孕期第6~15天兔孕期6~18天。染毒方式與路徑應(yīng)與人體實(shí)際接觸情況一致普通多經(jīng)口給予。致畸試驗(yàn)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第62頁(yè)染毒期間觀察妊娠動(dòng)物：體征和死亡（1次/日）;體重和體重改變（2次/日）；攝食量（1次/日）；其它毒性研究中已證實(shí)主要靶效應(yīng)。致畸試驗(yàn)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第63頁(yè)胎體檢驗(yàn)：自然分娩前1~2天將受孕動(dòng)物處死：普通大鼠在受孕后第19~20天；小鼠第18~19天；家兔在第29天。致畸試驗(yàn)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第64頁(yè)剖腹處死時(shí)對(duì)全部妊娠動(dòng)物進(jìn)行尸體解剖和肉眼檢驗(yàn)。保留肉眼發(fā)覺(jué)有改變臟器，方便進(jìn)行組織學(xué)評(píng)價(jià)。取出子宮及活產(chǎn)胎體，并另行統(tǒng)計(jì)死胎和吸收胎?；钐ト〕龊?，先檢驗(yàn)性別，逐只稱(chēng)重，并按窩計(jì)算平均體重，然后由以下幾方面進(jìn)行畸形檢驗(yàn)：外觀畸形內(nèi)臟及軟組織畸形骨骼畸形?；螜z驗(yàn)只限活產(chǎn)胎體。致畸試驗(yàn)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第65頁(yè)以上檢驗(yàn)只能檢出結(jié)構(gòu)與形態(tài)畸形，不能檢出可能發(fā)生生化功效或神經(jīng)行為缺點(diǎn)。故為了全方面了解可能存在先天缺點(diǎn)和生理功效異常，可將試驗(yàn)雌鼠保留1/4左右待其自然分娩，喂養(yǎng)觀察出生幼仔方便檢驗(yàn)。致畸試驗(yàn)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第66頁(yè)結(jié)果評(píng)定：對(duì)母體毒性評(píng)價(jià)指標(biāo)：體重、體重改變、食物和水消耗量、死亡率、交配率、受孕率、臟器重及母體畸胎出現(xiàn)率等。致畸試驗(yàn)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第67頁(yè)結(jié)果評(píng)定：對(duì)孕體影響評(píng)價(jià)指標(biāo)：著床數(shù)、黃體數(shù)、平均胎體體重/窩、活胎數(shù)/窩、吸收胎數(shù)/窩、畸胎數(shù)/窩等。致畸試驗(yàn)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第68頁(yè)結(jié)果評(píng)價(jià)發(fā)育毒性劑量-反應(yīng)關(guān)系比較復(fù)雜。伴隨劑量增加，先出現(xiàn)發(fā)育遲緩，然后胚胎-胎兒死亡和畸形發(fā)生，劑量很大時(shí)可致全部死亡。試驗(yàn)最終應(yīng)能得出受試物對(duì)母體和胚胎-胎兒各自NOAEL和LOAEL。為了比較不一樣化學(xué)物致畸強(qiáng)度，可計(jì)算致畸指數(shù)：致畸試驗(yàn)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第69頁(yè)致畸指數(shù)=

評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：

致畸指數(shù)在10以下不致畸；10-100為致畸；100以上為強(qiáng)致畸。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第70頁(yè)動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果外推到人問(wèn)題動(dòng)物試驗(yàn)中所見(jiàn)發(fā)育毒性類(lèi)型，不一定與人所產(chǎn)生一樣；發(fā)育毒性全部表現(xiàn)（死亡、生長(zhǎng)遲緩、結(jié)構(gòu)異常和功效缺點(diǎn)），與人都是相關(guān)系，不應(yīng)僅注意結(jié)構(gòu)異常；人在孕期中攝入量不太小物質(zhì)，只要對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生發(fā)育毒性，就表示對(duì)人是一個(gè)潛在危害。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第71頁(yè)發(fā)育毒性和致畸作用試驗(yàn)與評(píng)價(jià)（二）流行病學(xué)研究用流行病學(xué)方法研究環(huán)境中生殖毒物對(duì)人群生殖、發(fā)育影響情況，包含性質(zhì)，程度以及原因。環(huán)境流行病學(xué)研究必須配合以環(huán)境化學(xué)毒物檢測(cè)和人體生物標(biāo)志物檢測(cè)即分子流行病學(xué)研究。環(huán)境流行病學(xué)研究不是普通流行病學(xué)調(diào)查，須科學(xué)設(shè)計(jì)、嚴(yán)格選擇對(duì)象和對(duì)照，觀察指標(biāo)客觀量化。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第72頁(yè)

(1)在一些罕見(jiàn)病例中，可能不需要正式研究就能夠識(shí)別異常出生結(jié)局原因。

(2)對(duì)老污染物或老產(chǎn)品只能采取回顧性或橫斷面調(diào)查，這類(lèi)調(diào)查較難取得明確結(jié)論。

需要足夠大效應(yīng)和研究人群。

在出生時(shí)異常結(jié)局發(fā)生率不能反應(yīng)異常真實(shí)比率。3.病例匯報(bào)和出生缺點(diǎn)監(jiān)測(cè)登記對(duì)取得人類(lèi)發(fā)育毒性證據(jù)是有用。

流行病學(xué)研究發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第73頁(yè)確認(rèn)人類(lèi)致畸物標(biāo)準(zhǔn)：一個(gè)特殊缺點(diǎn)或幾個(gè)缺點(diǎn)并發(fā)（綜合征）頻率突然增加。缺點(diǎn)增加與某種已知環(huán)境改變（如一個(gè)新藥廣泛使用）相關(guān)聯(lián)。在妊娠特殊階段已知暴露于某種環(huán)境改變，產(chǎn)生有特征性缺點(diǎn)綜合征。缺乏妊娠時(shí)引發(fā)特征性缺點(diǎn)嬰兒其它共同因子。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第74頁(yè)致畸化學(xué)物分類(lèi)

國(guó)際生命科學(xué)研究所（InternationalLifeScienceInstitute,ILSI）：依據(jù)動(dòng)物試驗(yàn)中發(fā)育毒性類(lèi)型、嚴(yán)重程度和發(fā)生率，分為4級(jí)ICH人類(lèi)用藥危險(xiǎn)性分類(lèi)：分為5類(lèi)，供臨床醫(yī)師參考美國(guó)FDA：依據(jù)藥品對(duì)人孕體造成危害證據(jù)，分為5類(lèi)歐洲致畸物危險(xiǎn)度分級(jí)分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，分5級(jí)WHO:全球化學(xué)品統(tǒng)一分類(lèi)和標(biāo)簽制度（GHS）致畸指數(shù)＝母體LD50/胎體最小致畸劑量。<10普通不致畸,10~100為致畸,>100為強(qiáng)致畸發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第75頁(yè)致畸化學(xué)物分類(lèi)（ILSI,1989）基準(zhǔn)A類(lèi)B類(lèi)C類(lèi)D類(lèi)1．最小母體中毒劑量與最小致畸劑量比值2．畸胎率3．較低劑量時(shí)畸形類(lèi)型4．靶細(xì)胞5．安全系數(shù)范圍遠(yuǎn)大于1高，與劑量相關(guān)有特定器官系統(tǒng)特定細(xì)胞~400大于1或兩劑量間有很大重合高，與劑量相關(guān)普通為多發(fā)性，也可能有特定特點(diǎn)特定細(xì)胞~300小于1低，但與劑量相關(guān)無(wú)特異性，廣泛多發(fā)泛化、非特定細(xì)胞~250母體中毒時(shí)無(wú)致畸

—

—不詳~100

發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第76頁(yè)妊娠期用藥類(lèi)型（ICH）

人群研究結(jié)果動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果＋－無(wú)可用資料＋－無(wú)可用資料X或DBC1X或DABX或DA或BC2A、B、C2：僅在顯著需要時(shí)，妊娠期間能夠使用C1：僅在假如證實(shí)可能效益與對(duì)胎兒可能危險(xiǎn)比較可取時(shí)，妊娠期間能夠使用D：假如在妊娠期間使用，應(yīng)通知病人對(duì)胎兒可能危害X：在妊娠期間或可能妊娠婦女中禁止使用發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第77頁(yè)發(fā)育毒性初篩和替換試驗(yàn)體外初篩試驗(yàn)體內(nèi)初篩試驗(yàn)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第78頁(yè)體外初篩試驗(yàn)伴隨細(xì)胞、組織和器官培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)步，發(fā)展了一些發(fā)育毒物體外初篩試驗(yàn)，建立了全胚胎培養(yǎng)、器官培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)體外試驗(yàn)法。這些試驗(yàn)方法結(jié)果與沒(méi)有母體毒性整體動(dòng)物致畸試驗(yàn)有很好相關(guān)，且可嚴(yán)格控制試驗(yàn)條件，故可用這些試驗(yàn)作發(fā)育毒物初篩，預(yù)測(cè)對(duì)整體動(dòng)物致畸性，發(fā)覺(jué)致畸作用靶器官，或說(shuō)明致畸機(jī)制等。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第79頁(yè)常見(jiàn)體外初篩試驗(yàn)有：大鼠全胚胎培養(yǎng)器官培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)法體外初篩試驗(yàn)發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第80頁(yè)大鼠全胚胎培養(yǎng)自從１９７８年首次在體外進(jìn)行嚙齒類(lèi)動(dòng)物全胚胎培養(yǎng)成功后，這一技術(shù)逐步被應(yīng)用于毒理學(xué)研究。用于著床后全胚胎培養(yǎng)胚體正處于器官發(fā)生期，是對(duì)有毒外源物高度敏感發(fā)育階段，能很好反應(yīng)化學(xué)物對(duì)胚體影響。該方法在毒理學(xué)、藥理學(xué)等領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用，但本法技術(shù)難度相對(duì)較大，費(fèi)用高。發(fā)育毒性與致畸作用專(zhuān)家講座第81頁(yè)大鼠全胚胎培養(yǎng)詳細(xì)試驗(yàn)方法；從孕期9～10天大鼠子宮取出胚體，剝?nèi)eichert膜，放入培養(yǎng)液中加入外源化學(xué)物，在孵箱中通氣旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)。觀察心臟搏動(dòng)、卵黃囊直徑、胚芽、神經(jīng)管閉合、體節(jié)數(shù)目及體長(zhǎng)等發(fā)育情況。依據(jù)Brow評(píng)分對(duì)器官形態(tài)分化做出評(píng)價(jià)?？珊Y選受試化學(xué)物發(fā)育毒性、