草果不同極性萃取物總黃酮、總多酚含量與其抗氧化活性的相關(guān)性

摘要以草果為原料，通過50%乙醇、水、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇、甲醇和石油醚不同極性溶劑萃取活性物質(zhì)，探討萃取物中總黃酮和總多酚含量與總還原能力及對DPPH·、ABTS+·、OH-、NO2-清除能力的相關(guān)性。結(jié)果表明：50%乙醇萃取物總黃酮和總多酚含量均最高，各萃取物均有抗氧化能力，且呈明顯的量效關(guān)系，其中50%乙醇萃取物總還原能力、清除ABTS+·和DPPH·能力最強(qiáng)，石油醚萃取物清除OH-和NO2-能力最強(qiáng)。相關(guān)性分析表明草果萃取物中總黃酮含量與ABTS+·清除能力呈極顯著相關(guān)，與DPPH·清除能力呈顯著相關(guān)，總多酚含量與對ABTS+·和DPPH·的清除能力呈極顯著相關(guān)，可為草果作為天然抗氧化劑提供理論依據(jù)。引言草果（AmomumtsaokoCrevostetLemaire）為姜科豆蔻屬多年生草本植物，又名草果仁、草果子，廣泛分布于云南、貴州、四川等地。干燥成熟的草果屬于藥食同源植物，其主要成分為揮發(fā)油、萜類、黃酮類、酚類等]。作為香辛料，其特有的香辛味，可以去除牛、羊、魚肉膻腥味，增進(jìn)食欲而廣泛應(yīng)用于食品行業(yè),被譽(yù)為食品調(diào)味料中“五香之一”。作為傳統(tǒng)中藥，具有消食化瘀、祛痰除瘧、祛濕除寒、理氣健脾的作用。近年來，草果藥用價(jià)值日益成為研究熱點(diǎn)。目前，對草果的研究報(bào)道主要集中在草果揮發(fā)油、多酚、黃酮的提取工藝，而關(guān)于草果不同極性溶劑萃取，萃取物中總黃酮、總多酚與其抗氧化性的相關(guān)性分析未見報(bào)道。本文利用7種不同極性溶劑萃取草果生物活性物質(zhì)，測定總黃酮和總多酚含量，采用DPPH自由基清除能力、ABTS+自由基清除能力、羥基自由基清除能力、NO2-清除能力和總還原力對其抗氧化能力進(jìn)行評價(jià)，探討草果總黃酮、總多酚與其抗氧化性的相關(guān)性，以期為草果的開發(fā)利用奠定理論基礎(chǔ)。正文部分1

實(shí)驗(yàn)部分1.1

主要儀器與試劑1.2

實(shí)驗(yàn)方法1.2.1

草果不同極性溶劑提取物制備1.2.2

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與草果總黃酮的測定1.2.3

沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與草果總多酚的測定1.2.4

草果提取物抗氧化活性檢測1.2.4.1

DPPH自由基清除能力1.2.4.2

ABTS自由基清除能力1.2.4.3

羥基自由基清除能力測定1.2.4.4

NO2-清除能力測定1.2.4.5

總還原力測定1.3

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SigmaPlot10.0軟件、SPSS20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、繪圖及相關(guān)性分析。2

結(jié)果與討論2.1

不同極性萃取物中草果總黃酮含量草果不同極性萃取物中草果總黃酮含量如圖1所示，50%乙醇萃取物總黃酮含量最高，為1.842mg/g，顯著高于其他溶劑萃取物。其次為甲醇萃取物，為1.036mg/g。石油醚萃取物總黃酮含量最低。不同極性萃取物總黃酮含量由大到小依次為：50%乙醇>甲醇>水>丙酮>乙酸乙酯>正丁醇>石油醚。2.2

不同極性萃取物中草果總多酚含量草果不同極性萃取物中草果總多酚含量如圖2所示，50%乙醇總多酚含量最高，為0.570mg/g，顯著高于其他溶劑萃取物。其次為甲醇萃取物，為0.474mg/g。石油醚萃取物總多酚含量最低。不同極性萃取物總多酚含量由大到小依次為：50%乙醇>甲醇>水>丙酮>乙酸乙酯>正丁醇>石油醚。2.3

不同極性萃取物抗氧化活性2.3.1

清除DPPH自由基能力DPPH自由基是一種非生理性自由基，它是以氮為中心，較為穩(wěn)定。當(dāng)溶液中的抗氧化劑提供氫原子時(shí)，DPPH自由基中的孤對電子被配對而使得溶液顏色變淺，即逐步被抗氧化劑還原。由圖3可知，在濃度0～0.20mg/mL范圍內(nèi)，DPPH自由基清除能力隨濃度的增大而增強(qiáng)。當(dāng)濃度為0.05mg/mL，50%乙醇和甲醇萃取物清除DPPH自由基能力顯著提高，之后趨于穩(wěn)定。由表1可知，50%乙醇萃取物清除DPPH自由基能力最強(qiáng)，其IC50值為0.0362

mg/mL，不同萃取物清除能力由大到小依次為:50%乙醇>甲醇>乙酸乙酯>石油醚>水>正丁醇>丙酮。2.3.2

清除ABTS+自由基能力ABTS+二銨鹽與過硫酸銨反應(yīng)，會生成藍(lán)綠色的ABTS+自由基溶液，但是當(dāng)反應(yīng)物中加入自由基清除劑時(shí)會清除該自由基并使溶劑顏色變淺，在波長734nm下，吸光度減弱。由圖4可知，草果不同極性萃取物均有清除ABTS+自由基能力，隨著濃度的增加，清除能力不斷增強(qiáng)。2.3.3

清除羥基自由基能力雙氧水和鐵離子發(fā)生芬頓反應(yīng)產(chǎn)生羥基自由基，在該反應(yīng)體系中加入水楊酸，水楊酸會與羥基自由基發(fā)生反應(yīng)并生成有色物質(zhì)，當(dāng)試液中存在抗氧化物質(zhì)時(shí)，羥基自由基被清除以至有色物質(zhì)生成減少，吸光度減弱。由圖5可知，草果不同極性萃取物均有清除羥基自由基能力，隨著濃度的增加，清除能力不斷增強(qiáng)。2.3.4

清除NO2-能力亞硝酸鹽在弱酸性的條件下，與鹽酸萘乙二胺和對氨基苯磺酸反應(yīng)后，會生成紅色的絡(luò)合物，當(dāng)試液中有抗氧化物質(zhì)存在時(shí)，紅色絡(luò)合物被還原，溶液出現(xiàn)褪色，在波長536nm，吸光度減弱。由圖6可知，草果不同極性萃取物均有清除NO2-能力，隨著濃度的增加，清除能力不斷增強(qiáng)。其中石油醚萃取物在不同濃度下清除能力都最強(qiáng)，當(dāng)濃度為0.60mg/mL時(shí)，石油醚萃取物清除NO2-能力達(dá)到最大為65.30%。2.3.5

總還原能力總還原力測定是以生成普魯士藍(lán)的含量為指標(biāo)，是測定提取物抗氧化能力標(biāo)準(zhǔn)之一。其機(jī)理為當(dāng)溶液體系中存在抗氧化劑時(shí)，抗氧化劑會將六氰合鐵酸鉀還原成為亞鐵氰化鉀，然后利用三價(jià)鐵離子逐漸形成Fe4[Fe(CN)6]3，在波長為700nm處測定吸光度，評價(jià)其總還原能力大小。由圖7可知，草果不同極性萃取物均有一定的還原能力，隨著濃度的增加，還原能力不斷增強(qiáng)。2.3.6

不同極性萃取物IC50值采用SPSS20.0軟件計(jì)算不同極性萃取物IC50值，總還原能力的IC50值為吸光度0.5時(shí)所對應(yīng)的樣品質(zhì)量濃度。由表1可知，50%乙醇萃取物總還原能力、清除ABTS+自由基和DPPH自由基能力最強(qiáng)，石油醚萃取物清除羥基自由基和NO2-能力最強(qiáng)，不同極性萃取物抗氧化能力強(qiáng)弱順序不一致，這是由于萃取物中抗氧化物質(zhì)的種類和結(jié)構(gòu)不同，選擇性的清除自由基。2.4

總黃酮、總多酚含量與抗氧化活性相關(guān)性分析采用SPSS20.0軟件，對草果不同極性萃取物總黃酮、總多酚含量及抗氧化能力進(jìn)行Person法相關(guān)性分析，由表2可知，萃取物中總黃酮含量與ABTS+自由基清除能力呈極顯著相關(guān)，與DPPH自由基清除能力呈顯著相關(guān)；總多酚含量與ABTS+和DPPH自由基呈極顯著相關(guān)，總黃酮和總多酚含量都與OH-、NO2-和總還原能力相關(guān)性不顯著。ABTS+和DPPH自由基測定方法有極顯著相關(guān)，OH-自由基和NO2-測定方法有極顯著相關(guān)，總還原能力與NO2-測定方法有顯著相關(guān)。3

結(jié)論結(jié)論本實(shí)驗(yàn)選取50%乙醇、水、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇、甲醇和石油醚溶劑，萃取草果中生物活性物質(zhì)，比較不同萃取物總黃酮和總多酚含量與其抗氧化活性的相關(guān)性。結(jié)果顯示總黃酮和總多酚含量存在極顯著差異，50%乙醇總黃酮和總多酚含量明顯高于其他萃取物，50%乙醇萃取物總還原能力、清除ABTS+和DPPH自由基能力最強(qiáng)，石油醚萃取物清除羥基自由基和NO2-能力最強(qiáng)。相關(guān)性