基于快速響應(yīng)的紅色 ONOO−熒光探針及其細胞成像_第1頁
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文檔簡介

背景介紹過氧亞硝酸鹽（ONOO?）作為一種重要的生物活性氧（ROS），由體內(nèi)一氧化氮和超氧化物的擴散控制反應(yīng)產(chǎn)生。正常濃度范圍的ONOO?對細胞功能產(chǎn)生積極影響，如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、氧化還原穩(wěn)態(tài)和免疫反應(yīng)。截至目前為止，有許多分析方法用于ONOO?檢測，如紫外-可見光譜、電子自旋共振、電化學(xué)分析、免疫組織化學(xué)、和熒光法。相比之下，熒光法具有非入侵、選擇性高、響應(yīng)快速、超時空成像等優(yōu)勢，被認為是一種非常有效的方法。本文亮點1合成了一種紅色ONOO?熒光探針HBSCN，展現(xiàn)出明顯的熒光增強信號；2該探針能夠在生理pH下快速地檢測ONOO?，且對ONOO?具有較大的Stokes位移和較高的選擇性；3HBSCN能夠用于活細胞內(nèi)ONOO?成像，具有潛在的生物應(yīng)用價值。內(nèi)容介紹1

實驗部分2

結(jié)果與討論2.1

光譜表征首先，借助紫外吸收光譜考察HBSCN對ONOO?識別能力。如圖1所示，在PBS緩沖溶液（V(DMF):

V(H2O)=1：9,10mmol/L,

pH7.4）中，HBSCN自身在425nm處有一個明顯的紫外吸收峰。2.2

反應(yīng)機理通常，缺電子雙鍵在強氧化劑的作用下容易發(fā)生斷裂，生成醛或者羧酸化合物。通過上述的實驗可以看出，探針HBSCN加入ONOO?后，其紫外光譜和熒光光譜均發(fā)生了明顯的變化，溶液顏色也相應(yīng)的改變，推測HBSCN中C=C鍵在ONOO?作用下可能發(fā)生了裂解。2.3

pH影響pH值是一個重要的實驗參數(shù)。為探討HBSCN是否能夠在生物體中實現(xiàn)對ONOO?的檢測，在不同的pH溶液中，我們測試了HBSCN對ONOO?響應(yīng)情況。如圖5所示，在pH4~11之間，HBSCN自身的熒光強度幾乎不變，說明HBSCN在不同的pH值下具有較好的穩(wěn)定性。2.4

反應(yīng)時間考察HBSCN

對ONOO?的響應(yīng)時間是另外一個重要的實驗參數(shù)。為探討HBSCN對ONOO?檢測的動力學(xué)，我們測試了HBSCN在不加和加入ONOO?后熒光強度變化與時間的關(guān)系，如圖6所示，HBSCN本身的熒光強度不隨時間的變化而變化。3

結(jié)論基于不飽和C=C雙鍵氧化斷裂反應(yīng)，我們成功構(gòu)建了一種簡單有效的紅色ONOO?熒光探針HBSCN。在ONOO?存在下，探針的熒光顯劇增強，其熒光強度與0

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