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文檔簡介
細胞內組蛋白與雌激素受體作用增加機械牽張誘導的肺泡上皮通透性背景急性呼吸窘迫綜合征(Acuterespiratorydistresssyndrome,ARDS)是一種急性彌漫性肺部炎性反應,可導致肺血管通透性升高,肺水腫發(fā)生,參與通氣的肺組織減少。盡管各種診治手段在不斷發(fā)展,然而其病理生理機制仍未明確,ARDS的病死率仍高達40%。最近的報道發(fā)現組蛋白(Histones)釋放至細胞外具有強烈的細胞毒性作用,是介導膿毒癥和ARDS死亡的重要介質。本研究旨在探討組蛋白在ARDS機械通氣中對肺上皮細胞炎癥反應和通透性的影響和相關機制。目的研究機械牽張誘導肺上皮細胞釋放組蛋白,是通過與細胞內雌激素受體相互作用釋放至細胞外,引起細胞的通透性增加所致,這將為闡明肺上皮在機械牽張受損傷的分子機理及為ARDS機械通氣相關的肺損傷診治提供新的治療靶分子。方法采用Flexcell@TensionPlusFX-5000T應變加載系統(tǒng)予以肺上皮細胞BEAS-2B細胞0.33Hz、20%牽張力作用48h。倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)變化,應用蛋白質印跡法(WesternBlot)檢測機械牽張上清HistonesH3,H4分泌情況,免疫熒光技術檢測BEAS-2B雌激素受體(EstrogenReceptor,ER)的表達及分布情況。通過WesternBlot檢測細胞內雌激素受體ERα,ERβ的表達。siRNA轉染沉默ERα,ERβ,ELISA檢測牽張上清IL-6、IL-8的表達情況,WesternBlot檢測緊密連接蛋白的表達情況。結果20%機械牽張48h誘導人肺上皮細胞BEAS-2B釋放組蛋白H3,H4,WesternBlot結果顯示,與靜止對照組相比,20%牽張組上清H3,H4分泌明顯增加,通透性關鍵性蛋白E-caherin,claudin-18,caveolin-1表達顯著下調;ELISA檢測牽張上清炎癥因子IL-6,IL-8分泌顯著增多。此外,免疫熒光及WesternBlot結果顯示,雌激素受體ERα,ERβ可在人肺上皮細胞BEAS-2B表達。siRNA轉染分別沉默ERα,ERβ,發(fā)現與靜止對照組及單純機械牽張組相比,20%機械牽張沉默組肺上皮細胞通透性顯著下調,上清炎癥因子IL-6釋放顯著增加。結論組蛋白可在機械牽張過程中釋放并導致肺上皮細胞通透性增加和促進炎癥因子釋放;敲除肺上皮細胞雌激素受體ERα,ERβ的表達,可增加機械牽張過程中組蛋白釋放至細胞外,增加肺上皮細胞通透性改變和促進炎癥反應。因此,雌激素受體
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