產(chǎn)前實(shí)驗(yàn)室技術(shù)課件

一、產(chǎn)前實(shí)驗(yàn)室相關(guān)技術(shù)二、唐氏篩查申請(qǐng)單填寫(xiě)注意事項(xiàng)三、我們實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展的項(xiàng)目第1頁(yè)/共47頁(yè)產(chǎn)前實(shí)驗(yàn)室相關(guān)技術(shù)衛(wèi)生部《產(chǎn)前診斷技術(shù)管理辦法》要求：產(chǎn)前診斷實(shí)驗(yàn)室能夠開(kāi)展：①生化免疫；②細(xì)胞遺傳；③分子遺傳具體包括：唐氏篩查染色體核型分析羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體分析臍帶血染色體核型分析絨毛染色體核型分析分子遺傳學(xué)基因診斷熒光原位雜交

無(wú)創(chuàng)染色體非整倍體產(chǎn)前檢測(cè)第2頁(yè)/共47頁(yè)1、唐氏篩查可篩查：①唐氏綜合征（21-三體綜合征）②18-三體綜合征③開(kāi)放性神經(jīng)管缺陷第3頁(yè)/共47頁(yè)（1）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的母體血清標(biāo)記物方案，

選擇下列任一種：

a)二聯(lián)法：血清甲胎蛋白（AFP）+血清人絨毛膜促性腺激素游離β亞基（Freeβ-HCG）或者AFP+血清人絨毛膜促性腺激素（HCG）

b)三聯(lián)法：AFP+Freeβ-HCG+血清游離雌三醇（uE3）或者AFP+HCG+uE3或者AFP+Freeβ-HCG+抑制素A（InH-A）c)四聯(lián)法：AFP+Freeβ-HCG+uE3+InH-A或者AFP+HCG+uE3+InH-A中孕期母血清學(xué)產(chǎn)前篩查標(biāo)準(zhǔn)第4頁(yè)/共47頁(yè)（2）結(jié)果的判別

篩查結(jié)果分為高風(fēng)險(xiǎn)和低風(fēng)險(xiǎn)：

a)唐氏綜合征篩查結(jié)果可采用1/270為陽(yáng)性切割值（臨界值），即篩查結(jié)果風(fēng)險(xiǎn)率≧1/270者為高風(fēng)險(xiǎn)妊娠；b)18-三體綜合征篩查結(jié)果可采用1/350為陽(yáng)性切割值，篩查結(jié)果風(fēng)險(xiǎn)率≧1/350者為高風(fēng)險(xiǎn)妊娠；c)開(kāi)放性神經(jīng)管缺陷宜以母血清AFP≧，為陽(yáng)性切割值，篩查結(jié)果AFP≧者為高風(fēng)險(xiǎn)妊娠。第5頁(yè)/共47頁(yè)（3）產(chǎn)前篩查的檢出率要求二聯(lián)法：T21≧60%假陽(yáng)性率＜8%T18≧80%假陽(yáng)性率＜5%ONTD≧85%假陽(yáng)性率＜5%

三聯(lián)法：T21≧70%假陽(yáng)性率＜5%T18≧85%假陽(yáng)性率＜5%ONTD≧85%假陽(yáng)性率＜5%四聯(lián)法：T21≧80%假陽(yáng)性率＜5%T18≧85%假陽(yáng)性率＜1%ONTD≧85%假陽(yáng)性率＜5%第6頁(yè)/共47頁(yè)時(shí)間分辨熒光免疫法時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定：是一種非同位素免疫分析技術(shù)。用鑭系元素標(biāo)記抗原或抗體，根據(jù)鑭系元素螯合物的發(fā)光特點(diǎn)，用時(shí)間分辨技術(shù)測(cè)量熒光，同時(shí)檢測(cè)波長(zhǎng)和時(shí)間兩個(gè)參數(shù)進(jìn)行信號(hào)分辨。特異性好。發(fā)光時(shí)間長(zhǎng)。由于蛋白質(zhì)等本底物質(zhì)所發(fā)出的熒光發(fā)光時(shí)間較短，因此可以通過(guò)延長(zhǎng)時(shí)間去除本底干擾，提高準(zhǔn)確性。穩(wěn)定。第7頁(yè)/共47頁(yè)抽母體外周血，檢測(cè)AFP、

β-hCG、uE3，結(jié)合孕婦年齡、孕周、等信息，評(píng)估孕唐氏兒的風(fēng)險(xiǎn)值。時(shí)間分辨熒光免疫分析儀、三聯(lián)篩查假陽(yáng)性率小于5%時(shí)，檢出率70%（4）我院的檢測(cè)方法第8頁(yè)/共47頁(yè)篩查出的高風(fēng)險(xiǎn)孕婦需要進(jìn)一步診斷。21-三體高風(fēng)險(xiǎn)18-三體高風(fēng)險(xiǎn)羊水穿刺染色體核型分析NTD高風(fēng)險(xiǎn)超聲診斷第9頁(yè)/共47頁(yè)2、細(xì)胞遺傳學(xué)檢查染色體檢查、染色體核型分析取樣方法絨毛穿刺取樣羊膜腔穿刺取樣臍帶血穿刺取樣外周血取樣產(chǎn)前診斷第10頁(yè)/共47頁(yè)有自然流產(chǎn)史、死胎、葡萄胎、女性原發(fā)不孕、繼發(fā)不孕的夫婦；生過(guò)遺傳病患兒及先天畸形患兒的父母；男性少精、弱精、畸精、死精癥及婚后不明原因不育的夫婦；兩性畸形及性器官發(fā)育異常的患者；原發(fā)閉經(jīng)、繼發(fā)閉經(jīng)的婦女；染色體異常的患者及患者的父母和同胞；染色體檢查適應(yīng)證：

第11頁(yè)/共47頁(yè)原因不明的智力低下及生長(zhǎng)發(fā)育遲緩的患者；本人及家系成員患有某種遺傳疾病或先天畸形的患者；未婚青年的相戀對(duì)方或其家屬患有某種遺傳病或先天畸形的患者；長(zhǎng)期接觸不良環(huán)境因素的婚齡、育齡的男女青年；常規(guī)檢查或常見(jiàn)遺傳病篩查發(fā)現(xiàn)異常者；青年男女的婚（孕）前檢查與咨詢(xún)。第12頁(yè)/共47頁(yè)A：正常二倍體細(xì)胞核內(nèi)有2個(gè)21號(hào)染色體信號(hào)B：21-三體患者細(xì)胞核內(nèi)有3個(gè)21號(hào)染色體信號(hào)3、熒光原位雜交

以21號(hào)染色體的相應(yīng)片段序列作探針，進(jìn)行原位雜交，可快速、準(zhǔn)確進(jìn)行診斷。

21-三體綜合征患兒的細(xì)胞中呈現(xiàn)3個(gè)21號(hào)染色體的熒光信號(hào)。第13頁(yè)/共47頁(yè)FISH具有其不可比擬的優(yōu)點(diǎn)：1.操作簡(jiǎn)便，探針標(biāo)記后穩(wěn)定，一次標(biāo)記后可使用二年。2.方法敏感，能迅速得到結(jié)果。3.在同一標(biāo)本上，可同時(shí)雜交幾種不同探針。4.不僅可用于分裂細(xì)胞染色體數(shù)量或結(jié)構(gòu)變化的研究，而且還可用于靜止期細(xì)胞的染色體數(shù)量及基因改變的研究。目前羊水FISH產(chǎn)前診斷：可快速診斷胎兒13、18、21、X、Y染色體數(shù)目的異常。第14頁(yè)/共47頁(yè)4、無(wú)創(chuàng)染色體非整倍體產(chǎn)前檢測(cè)母體外周血含有的cffDNA，幾乎全部來(lái)源于胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞懷孕4周可檢出，8周后含量上升并穩(wěn)定存在母體外周血中的cffDNA含量在5%-50%之間。孕周越大外周血中胚胎DNA的含量越高胎兒游離DNA：cell-freefetalDNA（cffDNA）Lancet.1997第15頁(yè)/共47頁(yè)無(wú)創(chuàng)：10ml外周血，無(wú)須空腹風(fēng)險(xiǎn)?。簾o(wú)流產(chǎn)、感染風(fēng)險(xiǎn)孕12周以上即可檢測(cè)DNA水平檢測(cè)，準(zhǔn)確率99%以上檢測(cè)周期短，10個(gè)工作日出檢測(cè)結(jié)果無(wú)創(chuàng)DNA產(chǎn)前檢測(cè)技術(shù)與傳統(tǒng)診斷技術(shù)相比具有如下優(yōu)勢(shì)：第16頁(yè)/共47頁(yè)嵌合體和多胎目前不能檢影響因素：孕婦染色體異常孕婦近期接受過(guò)異體輸血、移植手術(shù)、干細(xì)胞治療胎兒其他染色體異常樣本自然溶血或因個(gè)體差異造成的cffDNA含量過(guò)低孕周計(jì)算不準(zhǔn)確抽血時(shí)孕婦體重超過(guò)100kg局限性和風(fēng)險(xiǎn)：第17頁(yè)/共47頁(yè)一、產(chǎn)前實(shí)驗(yàn)室相關(guān)技術(shù)二、唐氏篩查申請(qǐng)單填寫(xiě)注意事項(xiàng)三、我們實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展的項(xiàng)目第18頁(yè)/共47頁(yè)唐氏篩查申請(qǐng)單填寫(xiě)項(xiàng)目中孕期唐氏綜合征血清學(xué)篩查檢測(cè)的孕周范圍為15-20周6天，早孕期唐氏篩查檢測(cè)的孕周范圍為9-13周6天。請(qǐng)開(kāi)單醫(yī)生嚴(yán)格把關(guān)。孕婦的電話號(hào)碼一定要如實(shí)填寫(xiě)，以便核實(shí)信息、高風(fēng)險(xiǎn)通知和日后隨訪。采血日期應(yīng)填寫(xiě)采血當(dāng)日日期（公歷）。出生日期應(yīng)為孕婦的實(shí)際出生日期（公歷）。如農(nóng)歷生日應(yīng)換算成公歷后再填寫(xiě)或在申請(qǐng)單上清晰標(biāo)注。第19頁(yè)/共47頁(yè)體重單位為公斤，填寫(xiě)時(shí)需注意。唐氏篩查風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估軟件中體重的檢測(cè)范圍為40-120公斤，如不在此范圍內(nèi)，將按最接近的臨界值計(jì)算（如孕婦體重為38公斤，軟件將按40公斤計(jì)算），因此在采樣時(shí)須告知孕婦，得到知情同意后方可送檢，并在申請(qǐng)單上標(biāo)注。體重可以對(duì)孕婦血清中AFP，free-βhCG，uE3三個(gè)指標(biāo)進(jìn)行校正，以避免因體重的增加，使其在血液中濃度降低。唐氏篩查的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估軟件默認(rèn)規(guī)則的月經(jīng)周期為28-30天，超出此范圍均為不規(guī)則，不能應(yīng)用末次月經(jīng)來(lái)推算孕周，因此必須提供一份超聲信息。單雙胎必須填寫(xiě)。因?yàn)槿鐬殡p胎，血清學(xué)指標(biāo)會(huì)較單胎時(shí)偏，因此高風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估軟件會(huì)對(duì)結(jié)果進(jìn)行校正。（從2013年4月7日開(kāi)始，我中心不再對(duì)雙胎做中期篩查）第20頁(yè)/共47頁(yè)懷孕方式應(yīng)注明自然懷孕或輔助生殖，如為IVF，應(yīng)填寫(xiě)取卵日期和植入日期，并提供超聲信息。軟件同樣會(huì)進(jìn)行校正。每一位受檢孕婦均應(yīng)提供一份超聲信息，超聲信息以孕早期超聲頭臀長(zhǎng)（CRL）為最佳，如沒(méi)有孕早期超聲，至少應(yīng)提供一份包括胎兒雙頂徑數(shù)值（BPD）或超聲當(dāng)日提示孕周，二者至少應(yīng)有一項(xiàng)的超聲結(jié)果，并注明超聲日期。懷孕過(guò)程中是否有陰道流血的現(xiàn)象應(yīng)如實(shí)填寫(xiě)，請(qǐng)開(kāi)單醫(yī)生在問(wèn)診時(shí)注意。異常妊娠史主要包括不明原因流產(chǎn)、死胎等現(xiàn)象。如孕婦曾生育過(guò)21-三體綜合征、18-三體綜合征，應(yīng)直接建議孕婦做產(chǎn)前診斷，不建議做唐氏篩查。如孕婦特別要求，應(yīng)交代清楚后再送檢，并在申請(qǐng)單上標(biāo)注清楚。第21頁(yè)/共47頁(yè)胰島素依賴(lài)型糖尿病及吸煙史應(yīng)如實(shí)填寫(xiě)，且為必填項(xiàng)目。因?yàn)橛幸葝u素依賴(lài)型糖尿病病史的孕婦血清中hAFP低10%；uE3低7%；freehCGb低11%。而吸煙的孕婦血清中free-βhCG較正常孕婦降低3%，AFP較正常升高3%?！爸性衅谀秆鍖W(xué)產(chǎn)前篩查知情同意書(shū)”應(yīng)按照知情選擇、孕婦自愿的原則，醫(yī)務(wù)人員應(yīng)事先告知孕婦或其家屬產(chǎn)前篩查的性質(zhì)，孕婦及醫(yī)生同時(shí)簽字，不可由他人代簽。年齡在35歲及35歲以上的孕婦，建議直接做遺傳咨詢(xún)。第22頁(yè)/共47頁(yè)第23頁(yè)/共47頁(yè)第24頁(yè)/共47頁(yè)第25頁(yè)/共47頁(yè)第26頁(yè)/共47頁(yè)第27頁(yè)/共47頁(yè)一、產(chǎn)前實(shí)驗(yàn)室相關(guān)技術(shù)二、唐氏篩查申請(qǐng)單填寫(xiě)注意事項(xiàng)三、我們實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展的項(xiàng)目第28頁(yè)/共47頁(yè)早孕期唐氏篩查中孕期唐氏篩查羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體產(chǎn)前診斷臍帶血細(xì)胞培養(yǎng)染色體產(chǎn)前診斷外周血染色體核型分析羊水熒光原位雜交（FISH）產(chǎn)前診斷流產(chǎn)絨毛組織熒光原位雜交（FISH）先天性心臟病FISH產(chǎn)前診斷開(kāi)展項(xiàng)目第29頁(yè)/共47頁(yè)早孕期篩查：（1）血清學(xué)篩查，是在孕9-13周6天進(jìn)行，抽血檢測(cè)孕婦血清中生化指標(biāo)（PAPP-A和Free-βhCG），結(jié)合孕婦的年齡、體重、孕周等進(jìn)行綜合風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，得出胎兒患21-三體、18-三體綜合征的風(fēng)險(xiǎn)。（2）一站式篩查，是在孕11周-13周6天做超聲NT掃描，確定孕周在11周-13周6天內(nèi)，然后抽血進(jìn)行早孕期血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)，將NT指標(biāo)與血清學(xué)指標(biāo)、孕婦年齡、體重、采血日期等進(jìn)行結(jié)合，評(píng)估胎兒罹患21-三體、18-三體的風(fēng)險(xiǎn)。第30頁(yè)/共47頁(yè)早孕期篩查的優(yōu)勢(shì)：（1）早孕期篩查把產(chǎn)前篩查的孕周窗提前，使孕婦更早掌握胎兒罹患21-三體、18-三體的風(fēng)險(xiǎn)，盡早進(jìn)行相關(guān)產(chǎn)前診斷。（2）早孕期篩查還可以與中孕期篩查進(jìn)行整合，提高21-三體、18-三體的檢出率。第31頁(yè)/共47頁(yè)流產(chǎn)絨毛組織FISH快速檢測(cè)發(fā)生率：50%以上的早期流產(chǎn)是由胚胎染色體異常引起，且大多數(shù)為染色體數(shù)目異常。原理：FISH快速檢測(cè)使用13、16、18、21、22、X、Y探針，檢測(cè)7個(gè)染色體的非整倍體。檢測(cè)：取流產(chǎn)絨毛組織少許，浸泡生理鹽水中送到產(chǎn)前診斷中心4樓前臺(tái)，進(jìn)行熒光原位雜交檢測(cè)。第32頁(yè)/共47頁(yè)先天性心臟病FISH產(chǎn)前診斷發(fā)生率：活產(chǎn)嬰兒中占8‰，每年新增15-20萬(wàn)例。原因：遺傳因素——心臟調(diào)節(jié)基因的遺傳突變。環(huán)境因素——藥物、感染、母親患病等。檢測(cè)：妊娠11-14周進(jìn)行B超檢查，測(cè)量胎兒頸背透明帶厚度。中期18-22周用胎兒超聲心動(dòng)圖檢測(cè)。

22q11熒光原位雜交檢測(cè)。第33頁(yè)/共47頁(yè)

22q11熒光原位雜交檢測(cè)第34頁(yè)/共47頁(yè)合作開(kāi)展項(xiàng)目1、無(wú)創(chuàng)染色體非整倍體產(chǎn)前檢測(cè)項(xiàng)目2、Array-CGH技術(shù)項(xiàng)目3、單基因遺傳病檢測(cè)項(xiàng)目第35頁(yè)/共47頁(yè)1.無(wú)創(chuàng)染色體非整倍體產(chǎn)前檢測(cè)可篩查13、18、21染色體三倍體（發(fā)報(bào)告）還可觀測(cè)到其他染色體的非整倍體異常（口頭通知）檢出率可達(dá)99%有專(zhuān)家建議：可以代替產(chǎn)前篩查的精密篩查項(xiàng)目提示：可供孕婦及其家屬選擇，但費(fèi)用高。第36頁(yè)/共47頁(yè)2.Array-CGH技術(shù)第37頁(yè)/共47頁(yè)Array-CGH技術(shù)

應(yīng)用于羊水細(xì)胞檢測(cè)，是一種產(chǎn)前診斷技術(shù)。第38頁(yè)/共47頁(yè)Array-CGH技術(shù)原理與流程第39頁(yè)/共47頁(yè)第40頁(yè)/共47頁(yè)第41頁(yè)/共47頁(yè)第42頁(yè)/共47頁(yè)第43頁(yè)/共47頁(yè)3.單基因遺傳病檢測(cè)關(guān)鍵：找到先證者；查夫妻雙方為攜帶者，可以指導(dǎo)下一胎生育。第44頁(yè)/共47頁(yè)目前開(kāi)展700多種遺傳疾病的診斷。成功案例：一夫妻