藥物分析：第四章 藥物定量分析與分析方法驗證

藥物分析：第四章藥物定量分析與分析方法驗證前處理的目的：滿足所選用的分析方法對試樣的要求。前處理方法分類：（1）不經(jīng)有機破壞的分析方法；（2）不經(jīng)有機破壞的分析方法。經(jīng)有機破壞的分析方法（了解）：濕法破壞：適用于含氮有機合成藥物分析的前處理，在生物制品分析中用于氮（包括蛋白質(zhì)）、磷、硫柳汞及氯化鈉的測定法的前處理。另外，本法亦用于生物樣品中金屬元素測定時生物基質(zhì)的去除。本法主要使用硫酸作為分解劑，常加入氧化劑作為輔助分解劑。如硫酸——硫酸鹽法為基礎的含氮有機藥物定量分析方法——凱氏定氮法干法破壞：本法主要適用于含鹵素、硫、磷等有機藥物分析的前處理，亦用于某些藥物中硒和砷鹽的檢查，根據(jù)破壞方式的不同，干法破壞可分為高溫熾灼法和氧瓶燃燒法。藥品分析方法的驗證內(nèi)容及內(nèi)容表示方法：準確度：用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度，用回收率(%)表示。原料藥：回收率(%)=測得量/加入量*100%制劑：測定制劑中其他組分及輔料對含量測定方法的影響。回收率(%)=測得量-本底量/加入量*100%精密度：在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結果之間的接近程度。用偏差(d)、標準偏差(SD)、相對標準偏差(RSD)表示，用ｓ或RSD表示時，至少６次結果進行評價。重復性：在較短時間間隔內(nèi)，在相同的操作條件下由同一分析人員測定所得結果的精密度，也稱批內(nèi)精密度。中間精密度：在同一實驗室內(nèi)，由于實驗室內(nèi)部條件的改變，不同時間不同分析人員用不同設備測定所得結果的精密度。重現(xiàn)性：在不同實驗室由不同分析人員測定結果的精密度。專屬性：是在其他成分可能存在下，采用的方法能準確測定出被測物的特性。鑒別反應、雜質(zhì)檢查、含量測定方法均應考察其專屬性。檢測限(LOD)：指試樣中被測物能被檢測出的最低濃度或量常用方法：目視法；信噪比法(S/N=3或2時的相應濃度或注入儀器的量確定)。定量限(LOQ)：樣品中被測物能被定量的最低量，其測定結果應有一定的準確度和精密度。計算信噪比S/N=10的相應濃度或注入儀器的量而確定。線性：在設計的范圍內(nèi)，測試結果（響應值）與試樣中被測物濃度或量直接呈正比關系的程度。應列出回歸方程、相關系數(shù)和線形圖。范圍：能達到一定精密度、準確度和線性、測試方法適用的高低限濃度或量地區(qū)間。根據(jù)分析方法的具體應用和精密度、準確度和線性結果和要求確定。耐用性：在測定條件有小的變化時，測定結果不受影響的承受程度，為使方法可用于常規(guī)檢驗提供依據(jù)。蛋白質(zhì)的去除：加入與水混溶的有機溶劑；加入中性鹽；加入強酸；加入含鋅鹽及銅鹽的沉淀劑；酶解法定量分析方法的驗證：（注：與藥物分析方法驗證的不同點）特異性：必須證明所測定的物質(zhì)是原形藥物或特定的活性代謝物，內(nèi)源性物質(zhì)和相應的代謝物及同時服用的其他藥物不得干擾樣品的測定。標準曲線和線性范圍：必須至少6個濃度建立標準曲線，不許外延。建立標準曲線時應隨行空白生物樣品，但標準曲線不包括零點。精密度與準確度：RSD<15%，準確度在85%—115%定量下限：是標準曲線的最低濃度點，要求至少能滿足測定3—5個半衰期時樣品中的藥物濃度，或Cmax的1/10—1/20時的藥物濃度。樣品的穩(wěn)定性：根據(jù)具體情況，對含藥生物樣品在室溫、冰凍和凍融條件下以及不同存放時間進行穩(wěn)定性考察，以確定生物樣品的存放條件和時間。提取回收率：一般低于100％，須穩(wěn)定。應考