江蘇專版2024-2025學(xué)年新教材高中生物第一章發(fā)酵工程第二節(jié)發(fā)酵工程的無菌技術(shù)第2課時(shí)微生物分離純化和培養(yǎng)的無菌技術(shù)分層作業(yè)蘇教版選擇性必修3

第一章其次節(jié)第2課時(shí)微生物分別、純化和培育的無菌技術(shù)必備學(xué)問基礎(chǔ)練1.[2024江蘇揚(yáng)州邗江中學(xué)高二月考]某同學(xué)利用選擇培育基勝利分別出了土壤中的自生固氮菌,得到了如圖所示的試驗(yàn)結(jié)果。下列說法正確的是()A.該試驗(yàn)運(yùn)用了平板劃線法接種B.該試驗(yàn)運(yùn)用了液體培育基C.該試驗(yàn)運(yùn)用了無碳培育基D.該試驗(yàn)運(yùn)用了無氮培育基2.[2024江蘇常州武進(jìn)中學(xué)高二調(diào)研]稀釋涂布平板法是常用的微生物培育方法。下列相關(guān)敘述正確的是()A.倒好的平板應(yīng)馬上運(yùn)用,以防止培育基的表面干燥B.稀釋涂布平板法不行用于微生物的分別,只可用于微生物的計(jì)數(shù)C.用此法估測的數(shù)值往往偏小,應(yīng)以菌落數(shù)最多的平板計(jì)數(shù)為準(zhǔn)D.運(yùn)用過的微生物培育基應(yīng)進(jìn)行滅菌處理后再丟棄3.[2024江蘇南通高二期末]某探討小組為調(diào)查湖水中的細(xì)菌污染狀況進(jìn)行了試驗(yàn)。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A.試驗(yàn)用過的帶菌培育基必需經(jīng)消毒后才能倒掉B.用稀釋涂布平板法對細(xì)菌進(jìn)行分別、純化和計(jì)數(shù)C.比照組設(shè)置可在另外培育基上接種等量無菌水D.可以依據(jù)菌落和代謝特征對細(xì)菌種類進(jìn)行鑒定4.[2024江蘇連云港東海高二第一次學(xué)分認(rèn)定考試]下圖為純培育酵母菌的一個(gè)操作環(huán)節(jié)示意圖,下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A.該操作步驟是接種,方法是平板劃線法B.除第一次劃線外,以后的每一次劃線的起點(diǎn)都是上一次劃線的末端C.圖中酵母菌密度最小的是5處D.該接種方法適用于酵母菌的計(jì)數(shù)5.[2024江蘇揚(yáng)州高郵高三調(diào)研]已知固體培育基會(huì)因碳酸鈣的存在而呈乳白色,且乳酸能分解培育基中碳酸鈣。某同學(xué)用簇新的泡菜濾液為材料進(jìn)行了分別純化乳酸菌的試驗(yàn)。下列敘述錯(cuò)誤的是()A.分別純化所用的培育基中加入碳酸鈣的作用是鑒別乳酸菌B.分別純化所用的培育基加入錐形瓶后一般還要進(jìn)行滅菌處理C.分別純化乳酸菌時(shí),須要用無菌水對泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋D.分別純化乳酸菌時(shí),應(yīng)選擇出不具有透亮圈的菌落作為候選菌6.[2024江蘇南通海安高級中學(xué)高二調(diào)研]原油中含有大量有害的、致癌的多環(huán)芳烴。土壤中有些細(xì)菌可以利用原油中的多環(huán)芳烴作為碳源,在培育基中形成分解圈。為篩選出能高效降解原油的菌株并投入除污,某小組同學(xué)設(shè)計(jì)了相關(guān)試驗(yàn)。下列有關(guān)試驗(yàn)的敘述,不正確的是()A.應(yīng)配制來源于被原油污染土壤的土壤稀釋液備用B.配制以多環(huán)芳烴為唯一碳源的選擇培育基C.將土壤稀釋液滅菌后接種到選擇培育基上D.在選擇培育基上能形成分解圈的可能為所需菌種7.在分別、純化細(xì)菌的試驗(yàn)中,劃線接種(甲)、培育結(jié)果(乙)如下圖所示,a、b、c、d是劃線的四個(gè)區(qū)域。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A.操作過程中,接種環(huán)至少需灼燒五次B.連續(xù)劃線的目的是獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落C.甲圖中的a區(qū)域?yàn)閯澗€的起始區(qū)域D.蘸取菌液和劃線都要在酒精燈火焰旁進(jìn)行8.[2024江蘇無錫高三期末]在“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計(jì)數(shù)”探究試驗(yàn)中,要規(guī)范地進(jìn)行無菌操作。下列與無菌操作相關(guān)的說法,正確的是()A.為了防止雜菌污染,應(yīng)將配制好的選擇培育基分裝到培育皿中再用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌B.將土樣進(jìn)行10倍稀釋后,取1mL上清液加入盛有9mL蒸餾水的試管中依次等比稀釋C.將涂布器在火焰上灼燒,待其上的酒精燃盡后,必需先冷卻再進(jìn)行涂布平板操作D.待長成的菌落穩(wěn)定后,要在無菌條件下進(jìn)行尿素分解菌菌落的視察和計(jì)數(shù)9.中學(xué)印刷試卷多數(shù)運(yùn)用蠟紙,蠟紙的主要成分是棉花纖維和石油蠟。蠟紙成本低,但在自然環(huán)境中由于透水性差而難以降解。某課題小組嘗試從土壤中篩選出能夠分解石油蠟的微生物,流程如下圖所示?；卮鹣铝袉栴}:(1)下列幾個(gè)地方的土壤樣品中最可能篩選出目的菌的是()A.農(nóng)田里 B.煉油廠旁邊C.食品加工廠旁邊 D.化肥工廠旁邊(2)在配制培育基時(shí),應(yīng)當(dāng)以石油蠟為唯一。培育瓶和培育皿中的培育基在成分上的差異是前者缺少。

(3)探討者希望通過培育皿中的分解圈來篩選分解實(shí)力最強(qiáng)的微生物,結(jié)果發(fā)覺其中每個(gè)圈子幾乎交織一起,還有許多菌落緊挨在一起,此時(shí)應(yīng)當(dāng)實(shí)行的措施是。

(4)有同學(xué)提出,將培育瓶中的石油蠟換為蠟紙碎屑,希望篩選出能夠同時(shí)分解石油蠟和棉花纖維的微生物,這種方法是否可行?,理由是。

關(guān)鍵實(shí)力提升練10.[多選][2024江蘇鹽城伍佑中學(xué)高三模考]下圖中甲是稀釋涂布平板法中的部分操作,乙是平板劃線法的操作結(jié)果。下列敘述錯(cuò)誤的是()A.甲中涂布前要將涂布器灼燒接著涂菌液B.甲、乙操作中只有甲可以用于微生物的計(jì)數(shù)C.乙中接種環(huán)須要灼燒5次D.乙中的連續(xù)劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端11.[2024江蘇鹽城阜寧中學(xué)高三期中]野生型大腸桿菌菌株能在基本培育基上生長,氨基酸養(yǎng)分缺陷型突變株無法合成某種氨基酸,只能在完全培育基上生長。下圖為純化某氨基酸養(yǎng)分缺陷型突變株的部分流程圖,①②③④代表培育基,A、B、C表示操作步驟,D、E為菌落。下列敘述錯(cuò)誤的是()A.圖中①②④為基本培育基,③為完全培育基B.A操作的目的是提高突變率,增加突變株的數(shù)量C.B的正確操作是用涂布器把菌液勻稱地涂布在②表面D.經(jīng)C過程原位影印及培育后,可從④中挑取D進(jìn)行純化培育12.聚羥基脂肪酸酯(PHA)是由嗜鹽細(xì)菌合成的一種胞內(nèi)聚酯,它具有類似于合成塑料的理化特性,且廢棄后易被生物降解,可用于制造無污染的“綠色塑料”?？茖W(xué)家從某咸水湖中找尋生產(chǎn)PHA菌種的流程圖如下圖所示。下列說法正確的是()A.步驟②可用平板劃線法接種到含合成塑料的選擇培育基上B.假如用稀釋涂布平板法接種,涂布時(shí)用涂布器蘸取少量菌液并勻稱地涂布在培育基表面C.挑取菌落時(shí),應(yīng)挑取多個(gè)菌落并分別測定嗜鹽細(xì)菌的PHA含量D.步驟④所用到的培育基應(yīng)加入瓊脂,以便挑取單菌落獲得純化菌株13.鞣質(zhì)(單寧)是一種具有止血、殺菌等作用的中藥成分,在植物中廣泛分布。為探究鞣質(zhì)對自然界中生存條件相同的甲、乙、丙三種細(xì)菌的殺傷實(shí)力,某科研小組將等量的甲、乙、丙三種細(xì)菌接種到含有適量鞣質(zhì)的完全培育基和不含鞣質(zhì)的完全培育基上,在相同且相宜的條件下培育一段時(shí)間,視察菌落大小,結(jié)果如圖所示。下列相關(guān)說法不正確的是()A.試驗(yàn)中用的培育皿等玻璃器材,可以采納干熱滅菌法滅菌B.由圖中結(jié)果可知,鞣質(zhì)對甲細(xì)菌的殺傷實(shí)力最強(qiáng)C.為解除雜菌污染,本試驗(yàn)設(shè)置的試驗(yàn)組和比照組比較合理D.接種前,可以用顯微鏡干脆計(jì)數(shù)法推斷三種細(xì)菌接種量是否相等14.[2024江蘇泰州姜堰中學(xué)高三質(zhì)量檢測]物質(zhì)W是一種含氮有機(jī)物,會(huì)污染土壤。W在培育基中達(dá)到肯定量時(shí)培育基表現(xiàn)為不透亮。某探討小組欲從土壤中篩選出能降解W的細(xì)菌(目標(biāo)菌)?；卮鹣铝袉栴}:(1)要從土壤中分別目標(biāo)菌,所用選擇培育基中的氮源應(yīng)當(dāng)是。

(2)在從土壤中分別目標(biāo)菌的過程中,發(fā)覺培育基上甲、乙兩種細(xì)菌都能生長并形成菌落(如圖所示)。假如要得到目標(biāo)菌,應(yīng)當(dāng)選擇菌落進(jìn)一步純化,選擇的依據(jù)是。

(3)土壤中的某些微生物可以利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈础Ｈ粢O(shè)計(jì)試驗(yàn)進(jìn)一步確定甲、乙菌能否利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈?請簡要寫出試驗(yàn)思路并預(yù)期結(jié)果和結(jié)論。。

(4)該小組將人工合成的一段DNA轉(zhuǎn)入大腸桿菌中,使大腸桿菌產(chǎn)生能降解W的酶(酶E)。為了比較酶E與自然酶降解W實(shí)力的差異,該小組擬進(jìn)行如下試驗(yàn),請完善相關(guān)內(nèi)容。①在含有肯定濃度W的固體培育基上,A處滴加酶E的緩沖液,B處滴加含有相同濃度自然酶的緩沖液,C處滴加,三處滴加量相同。

②一段時(shí)間后,測量透亮圈的直徑。若C處沒有出現(xiàn)透亮圈,說明;若A、B處形成的透亮圈直徑大小相近,說明。

學(xué)科素養(yǎng)創(chuàng)新練15.[多選][2024江蘇姜堰中學(xué)、如東中學(xué)、沭陽中學(xué)高三聯(lián)考]雙層平板法是一種利用底層和上層均為牛肉膏蛋白胨培育基對噬菌體進(jìn)行檢測的常用方法。詳細(xì)操作如下:先在無菌培育皿中倒入瓊脂含量是2%的培育基凝固成底層平板后,將瓊脂含量是1%的培育基溶化并冷卻至45~48℃,然后加入宿主細(xì)菌和待測噬菌體稀釋懸液的混合液,充分混勻后馬上倒入底層平板上形成雙層平板。培育一段時(shí)間后,在上層平板上望見由于噬菌體侵染四周細(xì)菌而使宿主細(xì)胞裂解死亡形成的空斑,即噬菌斑。通常一個(gè)噬菌斑來自原液中的一個(gè)噬菌體。依據(jù)噬菌斑的數(shù)目計(jì)算原液中噬菌體的數(shù)量,如圖所示。下列相關(guān)敘述正確的是()A.牛肉膏蛋白胨培育基可作為選擇培育基選擇出噬菌體的宿主細(xì)胞B.加入混合液后,運(yùn)用滅菌后的涂布器將混合液勻稱地涂布在培育基表面C.雙層平板法中加了底層培育基后彌補(bǔ)了培育皿底面不平的缺陷D.上層培育基中瓊脂濃度較低,因此形成的噬菌斑較大,更有利于計(jì)數(shù)第2課時(shí)微生物分別、純化和培育的無菌技術(shù)1.D該試驗(yàn)中將土壤浸出液接種到培育基的方法為稀釋涂布平板法,所用培育基為固體培育基,A、B項(xiàng)錯(cuò)誤;自生固氮微生物屬于異養(yǎng)型微生物,沒有碳源不能生長,所以為了保證自生固氮菌的生長,培育基中應(yīng)添加碳源,C項(xiàng)錯(cuò)誤;由于自生固氮菌可以利用空氣中氮?dú)鉃榈?而其他不能固氮的微生物不能利用氮?dú)庾龅?所以在無氮培育基上可以篩選出自生固氮菌,D項(xiàng)正確。2.D倒好的平板不能馬上運(yùn)用,通常須要進(jìn)行培育檢測,推斷培育基滅菌是否合格,A項(xiàng)錯(cuò)誤;稀釋涂布平板法既可用于微生物的分別,又可用于微生物的計(jì)數(shù),B項(xiàng)錯(cuò)誤;當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí),平板上視察到的只是一個(gè)菌落,因此統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少,但在進(jìn)行菌落數(shù)統(tǒng)計(jì)時(shí)須要統(tǒng)計(jì)各個(gè)平板的數(shù)據(jù),并求得平均值,C項(xiàng)錯(cuò)誤;運(yùn)用過的微生物培育基應(yīng)進(jìn)行滅菌處理后再丟棄,避開對環(huán)境和操作者造成影響,D項(xiàng)正確。3.A試驗(yàn)用過的帶菌培育基必需經(jīng)滅菌后才能倒掉,以防止污染環(huán)境或感染操作人員,A項(xiàng)錯(cuò)誤。4.D平板劃線法只能用于微生物的分別、培育,不能用于計(jì)數(shù),D項(xiàng)錯(cuò)誤。5.D分別純化乳酸菌時(shí),應(yīng)選擇出具有透亮圈的菌落作為候選菌,D項(xiàng)錯(cuò)誤。6.C在無菌環(huán)境下,將土壤稀釋液接種到選擇培育基上,將土壤稀釋液滅菌后會(huì)殺死原有菌種,C項(xiàng)錯(cuò)誤。7.C分析圖乙可知,a區(qū)域出現(xiàn)了單個(gè)菌落,d區(qū)域菌落最多,因此a區(qū)域應(yīng)當(dāng)為劃線的最終區(qū)域,d區(qū)域?yàn)閯澗€的起始區(qū)域,C項(xiàng)錯(cuò)誤。8.C配制好的選擇培育基先用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌,再在無菌環(huán)境中分裝到培育皿中,A項(xiàng)錯(cuò)誤;將土樣進(jìn)行10倍稀釋后,取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中依次等比稀釋,B項(xiàng)錯(cuò)誤;將涂布器在火焰上灼燒,待其上的酒精燃盡后,必需先冷卻再進(jìn)行涂布平板操作,防止高溫殺死菌種,C項(xiàng)正確;待長成的菌落穩(wěn)定后,可干脆視察,無須在無菌條件下進(jìn)行尿素分解菌菌落的視察和計(jì)數(shù),D項(xiàng)錯(cuò)誤。9.答案(1)B(2)碳源凝固劑(3)將培育液稀釋后再進(jìn)行接種或縮短培育時(shí)間(4)不行行只能分解石油蠟和只能分解棉花纖維的微生物也能生長解析(1)依據(jù)題意可知,該課題小組嘗試從土壤中篩選出能夠分解石油蠟的微生物,因此試驗(yàn)用的土壤樣品應(yīng)取自煉油廠旁邊,以篩選目的菌,故選B。(2)本試驗(yàn)篩選的目的菌為能夠分解石油蠟的微生物,因此在配制培育基時(shí),應(yīng)當(dāng)以石油蠟為唯一碳源。培育瓶中的培育基為液體培育基,培育皿中的培育基為固體培育基,它們在成分上的差異是前者缺少凝固劑。(3)培育液濃度過高,細(xì)菌緊挨在一起,此時(shí)應(yīng)當(dāng)將培育液稀釋后再進(jìn)行接種或縮短培育時(shí)間。(4)將培育瓶中的石油蠟換為蠟紙碎屑,只能分解石油蠟和只能分解棉花纖維的微生物也能生長,不能篩選出能夠同時(shí)分解石油蠟和棉花纖維的微生物。10.AC為防止雜菌污染,涂布前要將涂布器灼燒,冷卻8~10s后才能進(jìn)行涂布,若灼燒后馬上涂布,則會(huì)將菌體殺死,A項(xiàng)錯(cuò)誤。甲是稀釋涂布平板法,在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞,從而能在培育基表面形成單個(gè)菌落,通過統(tǒng)計(jì)菌落數(shù),可以推想出菌液中微生物的數(shù)量;乙是平板劃線法,接種環(huán)在劃線前后都要滅菌(殺死殘留在接種環(huán)上的菌種)。平板劃線法能用于菌種的分別、純化,無法計(jì)數(shù),因此只有甲可以用于微生物的計(jì)數(shù),B項(xiàng)正確。乙是平板劃線法,在每次劃線前都要灼燒接種環(huán),在劃線操作結(jié)束時(shí),仍舊須要灼燒接種環(huán),乙總共劃線5次,接種環(huán)須要灼燒6次,C項(xiàng)錯(cuò)誤。乙中連續(xù)劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端,這樣能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步削減,最終得到由單個(gè)活菌繁殖而來的菌落,D項(xiàng)正確。11.A野生型大腸桿菌菌株能在基本培育基上生長,氨基酸養(yǎng)分缺陷型突變株無法合成某種氨基酸,只能在完全培育基上生長。依據(jù)題干信息和題圖分析,圖中①②④為完全培育基,③為基本培育基,A項(xiàng)錯(cuò)誤。12.CPHA是由嗜鹽細(xì)菌合成的一種胞內(nèi)聚酯,要篩選嗜鹽細(xì)菌,步驟②可用稀釋涂布平板法接種到含鹽量較高的選擇培育基上,A項(xiàng)錯(cuò)誤;假如用稀釋涂布平板法接種,涂布時(shí)應(yīng)用移液器取樣至培育基上,然后用涂布器勻稱涂布,B項(xiàng)錯(cuò)誤;要篩選高產(chǎn)聚羥基脂肪酸酯(PHA)的嗜鹽菌,挑取菌落時(shí),應(yīng)挑取多個(gè)菌落并分別測定嗜鹽細(xì)菌的PHA含量,最終進(jìn)行比較,C項(xiàng)正確;步驟④(擴(kuò)大培育)應(yīng)選用液體培育基,液體培育基中不應(yīng)加入瓊脂,D項(xiàng)錯(cuò)誤。13.C為解除雜菌污染,本試驗(yàn)還需設(shè)置未接種細(xì)菌的含鞣質(zhì)的完全培育基和未接種細(xì)菌的不含鞣質(zhì)的完全培育基作為空白比照,C項(xiàng)錯(cuò)誤。14.答案(1)W(2)乙乙菌落的四周出現(xiàn)透亮圈,說明乙菌能降解W(3)將甲、乙菌分別接種在無氮源培育基上,若某細(xì)菌能生長,則說明該細(xì)菌能利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈?4)①緩沖液②緩沖液不能降解W酶E與自然酶降解W的實(shí)力相近解析(1)該探討小組的目標(biāo)菌是能夠降解物質(zhì)W的細(xì)菌,而物質(zhì)W是一種含氮有機(jī)物,故可作為篩選培育