農(nóng)業(yè)部2122號公告-9-2014 轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測 耐除草劑玉米DAS-40278-9及其衍生品種定性PCR方法

農(nóng)業(yè)部2122號公告—9—2014轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測耐除草劑玉米DAS-40278-9及其衍生品種定性PCR方法DetectionofgeneticallymodifiedplantsandderivedpI農(nóng)業(yè)部2122號公告—9—20141農(nóng)業(yè)部2122號公告—9—2014耐除草劑玉米DAS-40278-9及其衍生品種定性PCR方法本標(biāo)準(zhǔn)適用于轉(zhuǎn)基因耐除草劑玉米DAS-40278-9及其衍生品種，以及制品中DAS-40278-9轉(zhuǎn)化體農(nóng)業(yè)部1485號公告—4—2010轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測DNA提取和純化農(nóng)業(yè)部1861號公告—3—2012轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因定性PCR方法農(nóng)業(yè)部2031號公告—19—2013轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測抽樣NY/T672轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測通用要求2zSSHIb-1F:5′-CTCCCAATCCTTTGzSSIIb-2R:5′-TCGATTTCTCTCTTGDAS-40278-9-F:5'-CCATTCAGGAGACCTCDAS-40278-9-R:5′-CGAGCTTCAATCACT37.5.1.2.1每個試樣PCR反應(yīng)設(shè)置3次平行。終濃度水10×PCR緩沖液dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)總體積“—”表示體積不確定。如果PCR緩沖液中含有氯化鎂，則不加氯化鎂溶液。根據(jù)TagDNA聚合酶的濃度確定其體積，并相應(yīng)調(diào)整水的體積，使反應(yīng)體系總體積達到25.0μL。以非轉(zhuǎn)基因玉米基因組DNA作為陰性對照；以轉(zhuǎn)基因玉米DAS-40278-9質(zhì)量分數(shù)為0.1%~農(nóng)業(yè)部2122號公告—9—2014增片段是否為目的DNA片段，按照7.8和7.9的規(guī)定執(zhí)行。A)進行比對，確定PCR擴增的DNA片段是否為目的DNA片段。大小與預(yù)期片段大小一致，而陰性對照中僅擴增出玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因片段，8.2.1玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因和DAS-40278-9轉(zhuǎn)化體特異性序列均得到擴增，且擴增片段大小與預(yù)期片段特異性序列未得到擴增，或擴增片段大小與預(yù)期片段大小不一致，表明樣品中未檢測出DAS-40278-9本標(biāo)準(zhǔn)方法的檢出限為1g/kg。5農(nóng)業(yè)部2122號公告—9-20141CCATTCAGGAGACCTC61TTACGCCTCTCTAAGCGGCCAAACTTGCAGAAAACCGCC