(高清版)GB∕T 38569-2020 工業(yè)微生物菌株質量評價 拉曼光譜法

ICS07.080A21中華人民共和國國家標準工業(yè)微生物菌株質量評價拉曼光譜法pvR國家市場監(jiān)督管理總局國家標準化管理委員會ⅠGB／T38569—2020本標準按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標準由中國標準化研究院提出并歸口。本標準起草單位：中國科學院青島生物能源與過程研究所、中國標準化研究院。本標準主要起草人：馬波、籍月彤、何曰輝、李洵融、徐健、馬愛進。1GB／T38569—2020工業(yè)微生物菌株質量評價拉曼光譜法本標準規(guī)定了用拉曼光譜法評價工業(yè)微生物菌株質量的方法。本標準適用于工業(yè)發(fā)酵用細菌、真菌、微藻等相對于參考菌株的質量一致性評價。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1利用拉曼光譜法開展工業(yè)微生物菌株質量一致性評價。3.2細胞內部化合物拉曼光譜的疊加信息可以反映該細胞的綜合表型，通過比較待評價菌株與參考菌株單細胞拉曼光譜的相似性，可以判斷待評價菌株是否具有與參考菌株可比較的發(fā)酵性能。5試劑或材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑，水為GB/T6682規(guī)定的二級水。按照菌種類型配制，或選用相應商品化培養(yǎng)基。氟化鈣載玻片(25mm×75mm)。6儀器設備試驗中所使用的儀器設備為：2GB／T38569—2020;b)培養(yǎng)箱；d)離心機。7測定步驟根據生產工藝配制工業(yè)微生物相應的固體平板和液體培養(yǎng)基，用無菌接種環(huán)分別蘸取參考菌株和待評價菌株的保種菌液，在固體平板上劃線，根據生產工藝參數選擇相應的溫度等條件進行培養(yǎng)，直至中，根據生產工藝參數選擇相應的溫度和轉速，培養(yǎng)至對數期。體培養(yǎng)基的容器中，根據生產工藝參數選擇相應的溫度和轉速，培養(yǎng)至穩(wěn)定期。7.3樣品前處理釋后的菌液，在潔凈的氟化鈣載玻片上點樣，無菌環(huán)境下室溫風干。7.4.1將風干后的氟化鈣載玻片置于顯微拉曼光譜儀載物臺上，在透射式明場模式下選擇單個細胞，切換至光譜采集模式，測定拉曼光譜信號。7.4.2每個樣本隨機選取至少20個單細胞作為樣品信號。7.4.3在點樣區(qū)內，采集3個無細胞處信號，并計算平均值，作為背景信號。數）和基于面積的歸一化處理。數據，補充數據個數，使得待評價菌株組和參考菌株組具有相同的數據個數。8結果計算和分析8.1.1余弦距離按式(1)計算：GB／T38569—2020n式中：ii計算余弦距離的平均值和標準偏差，并以細胞數為橫坐標，以變異系數為縱坐標作圖，若曲線達到平臺，說明細胞數已足夠，若曲線未達到平臺，則增加單細胞拉曼光譜采集個數，直至飽和為止。8.1.2相似度按式(2)計算：式中：R—待評價菌株和參考菌株的相似度；rr計算結果以平行測定值的算術平均值表示，保留三位有效數字。