臨床微生物檢驗復習資料

臨床微生物檢驗細菌整理(球菌)養(yǎng)鏈(液體培養(yǎng)要求不高，最適溫度最適耐干燥葡菌血瓊脂平明溶血環(huán)(β瓊脂中生長(大便發(fā)生菌群失調，平板上為黃色菌落觸酶試驗(+) 片法——結合型——分泌型凝固為陰性或陽性均需做試管法(金葡菌、中間型 (+)，路登葡萄球菌玻片法(+)、素表現為敏感時(紙片法或MIC)進行，陽性菌對不耐素耐藥 球菌試驗③6.5%Nacl生長試驗菌層球菌和草綠色鏈球菌pH7.4~7.6灰白色，透明或菌落②不別形成)③肺炎鏈球菌落④液體培粒沉淀)測(咽拭標本的A群殖道標本的 5%NaCl不生長，可確定為鏈球PYR試驗、桿菌肽敏感試驗(A大小兩種不同菌落)、CAMP試驗(無乳鏈球菌的初步鑒定)分球菌毒素 GA群鏈球菌也稱化膿性鏈球菌或溶血性鏈球菌，是人類鏈球菌中致病力最強的細菌②B群β溶血性鏈球菌③α溶血性鏈球菌(甲型溶血性)n驗S+—R——牛~牛R—+、高葉苷產生黑色菌落苷和PYR(+)、NaCl肉湯長驗，根糖和精氨酸的代1)敏感結果，且作用于細胞壁的可出現協(xié)基霉素體外但臨基糖藥試驗(HLAR)子①最適生長溫度35℃需氧生長，初分度刺激生長③需羊血、兔血或血可溶性淀粉力瓊脂平板上呈藍色菌落②或中度混濁氧化酶(+)觸酶(+)硝酸鹽還原(-)多糖合成(-)DNA酶(-)①初步鑒定：直徑1~2㎜、灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落，G-雙球菌，氧化酶和觸酶試驗(+)葡萄糖和麥芽糖發(fā)酵試驗(+)，其他糖類發(fā)酵(—)可確定為腦膜炎~；葡萄糖發(fā)酵試驗(+)，其他糖類(—)可確素：菌膜蛋白時的注意事項①錯誤的鑒定結果可帶腦++———淋+————脂平板上生長三丁酸甘油酯水解(丁酸酯酶)DNA酶(+)類產酸試驗(+)可與奈瑟菌屬鑒別?？膳R床微生物檢驗細菌整理(腸桿菌科)養(yǎng)毛生長2)對一般化學消毒劑敏料的已被培養(yǎng)糖(產酸或產 采用脂門革蘭陰性桿菌除志賀菌較少引起腸菌科許多細菌可引起染。鼠疫耶爾森菌引、慢性腹瀉、食物中抗原成分：包括菌體抗原(O)、鞭毛抗原(H)和表面抗原。①菌體抗原(O)：是細菌細胞壁成分，化學成是一個以核心多糖為中心的三O毛抗原(H)：是不熱的多糖抗原，在不同的菌屬中有不，-+--+科弧菌科氧物(LPS)，耐熱，加熱100℃不能滅活，目前能阻止清型別成較大的潤、灰白色的菌可發(fā)酵乳糖，形黏液型菌落IMViCAAAIUCSS央1、ETEC：生化反應+血清分型+腸毒素檢測 (最可靠)2、EIEC：①賴氨酸、動力、乳糖、葡萄糖產氣均(-)②與志賀菌的生化反應鑒別試驗有醋酸鈉、葡萄糖胺利用和黏液酸鹽產酸、大腸埃希菌三者均(+)③鑒定內容有生化反應、血清學試驗(國產血清OK1、OK2)、毒力測定(豚鼠眼角膜)。3、EPEC：生化反應+血清凝集(國產血清有OK1、OK2、OK3)+細胞粘附試驗4、EHEC：最重要的血清型O157：H7，鑒定：生化反應+血清凝集，可不測定Vero也可確診5、EAEC：無抗血清，可用凝塊聚集試H養(yǎng)，次日觀察結果，表面形成凝塊者為陽性，均勻混濁無凝塊者為陰性。毒素 (LT)和耐熱腸毒素(ST)。兩種腸致菌①腸毒素型大腸埃希菌(ETEC)：引起兒童腹瀉和旅腹痛、低熱以及急性發(fā)作的類似②腸致病型大腸埃希菌(EPEC)：主要引起嬰幼兒腸道嘔吐、大量水樣便，便中含粘液但無③腸侵襲型大腸埃希菌(EIEC)：該菌引起的癥狀類似，如發(fā)熱、腹痛、水瀉或典型的菌痢腸埃希菌(STEC、VTEC或EHEC)⑤腸凝聚型大腸埃希菌(EAEC)高綠等染料邊緣整齊，有時乳糖(-)，三脂中產酸或產堿HS+)枸櫞酸鹽(-)酸(+)糞便的標渣接用鹽，符合沙門菌屬特素染門★凡臨床分離菌乳糖、吲哚、脲酶(+)均不考慮為沙1、血清學診斷(肥達氏反應)：用已知的傷寒沙門菌的O、H抗原、副傷寒沙門菌(A、B、C表示)的H抗原，檢測患者的血清中的相應抗體及其效價。用于輔助診斷傷寒、副傷寒甲、乙、丙。此方法與分離培養(yǎng)同時進行或培養(yǎng)失敗時試驗。方法:試管法和大孔反應板2、抗原結構：主要有三種，即菌體O抗原、鞭毛H抗原和表面(Vi等)抗原。①O抗原(菌體抗原)：多糖-類脂-蛋白質復合物，耐熱如O2群(A)等。O抗原與相應抗血清(IgM)發(fā)生顆粒狀凝集反應。②H抗原(鞭毛抗原)：不穩(wěn)定的蛋白質抗原，加熱60~70℃15分鐘或用乙醇處理臨床微生物檢驗細菌整理(腸桿菌科)養(yǎng)G短H普通培養(yǎng)基抗力較菌為低基上形成乳糖不半透明的成粗糙型 (-)基(MAC指示劑為中性 去氧膽酸鹽(XLD指示劑為酚紅)培養(yǎng)基血清學鑒定痢疾志賀菌甘露醇(-)，宋內志賀菌β-半乳糖苷酶和鳥氨酸脫羧酶(+)。腹等③外毒素(Vero毒素)： EIEC葡萄糖銨、粘質酸鹽(+)志賀菌：醋酸鈉、葡萄糖銨、粘質酸鹽(-)②與類志賀鄰單胞菌的鑒別：志賀菌：動力、氧化酶(-)H2S、動力(-)，血清學凝集(與沙門菌凝集，與志賀菌不凝集)G球℃最適生長，最適H長，但發(fā)育：可生長，但生菌科其它細菌力(-)，IMVC：-+--；均為(-)，對的形態(tài)、菌落特點和生化小腸結腸炎耶G偶長良好養(yǎng)基：無色、半透乳糖(-)、葡萄糖(+)、蔗糖(+)皆不產脲酶(+) 嗜冷性，脲酶(+)，硫化氫(-)，鳥氨酸脫羧酶(+)；發(fā)酵葡萄糖、蔗糖產酸不產和鼠李糖G-桿菌，有動力(周身鞭毛)、無芽孢、無莢膜脂為渾濁的菌落③氧化酶(-)，觸酶(+)，葡IAAA愛德華菌屬鑒別：賴氨酸脫羧酶(-)②種間鑒別：弗勞地枸櫞酸桿菌大部分菌株吲哚(-)，硫化氫多數(+)臨床微生物檢驗細菌整理(腸桿菌科)養(yǎng)較大、凸起灰白、紅色菌落氧化酶(-)，酸產、鳥DNA酶(-)，脲酶(+)，枸櫞二酸鹽(+)鳥氨酸脫羧酶(-)③種的鑒定：肺炎克雷伯菌吲哚(-)，產酸克雷伯菌吲哚(+)④特異性抗血清進行莢膜腫原發(fā)性肺炎的感染成大而濕潤的黏液狀菌落②BAP：形成大而濕潤TSI或產酸/UREIND+/-),MOT(+)，VP(+/-)，ORN)-，動力和鳥氨酸脫羧酶(+)②最終鑒定：各主要種間的鑒產生黃色色素菌引起一些腸道外感腸桿菌引起的新生兒G，有周。成團+，彌散G有周身色 (紅色、粉紅色)菌落DNA酶(+)、脂酶(+)、明膠酶(+)屬間鑒定：三種酶(+)、對多粘菌素、頭染抗生素耐藥異變形桿在普通瓊脂平板狀薄膜不滿整個為遷徙現象，是、扁平、無色半硫化氫(+)、酶(+)、脲酶 (+)快速陽性的離抗炎形成有關→尿路呈持續(xù)酶(+)的細菌。酶，具有分解尿素的性能，感染后的+--+--入抗變量到5~7%同上枸櫞酸鹽(+)脲酶(-)，吲哚和動力(+)，)①屬鑒定：與變形桿菌鑒別，硫化氫(-)；與摩登菌屬鑒別，鳥氨酸脫羧酶(-)斯圖雷極脲酶--/++-+-側金盞花醇+-+脫氨酶的細菌屬間鑒別變形桿菌屬普羅威登菌屬摩根菌屬H2S+--+/--+鹽+/-+-CITVPURE、IND、MOT、ORN(+)、腹瀉臨床微生物檢驗細菌整理(不發(fā)酵革蘭陰性桿菌)養(yǎng)G短體培養(yǎng)種水溶性色素(綠膿素、滑，常融①氧化酶(+)、精氨酸水解(+)O型③吲哚(-)④明膠(+/-)、枸櫞酸鹽(+/-) 酸檢測形成類似沙門菌的菌落的感綠假單，引起銅綠惡臭熒光化酶+++精氨酸水解+++化葡萄糖++++++4℃生長--+2℃生長+---+氣味生姜氣味腥臭味無+--素明養(yǎng)溫度、溶血的菌落，但菌下的培多數菌株產生黃色素上呈弱陽性)賴氨酸(+)、氧化快。明膠(+)、七葉苷(+)首選藥物：磺胺類、環(huán)丙沙星、替卡西林/克拉維酸。★天然耐藥：亞胺培南++--S++-+RG成通培養(yǎng)最適溫長滑、邊緣整齊、直徑血不動桿菌在血平板上可呈化酶(-)、硝酸鹽還原試驗(-)、 (-)酸鹽還原試驗 (-)象臨床微生物檢驗細菌整理(苛氧菌)養(yǎng)要求高，培養(yǎng)條件苛刻,普通培養(yǎng)基上不生長或很難生長的一類細菌。體外培養(yǎng)時需添加生長因子或其它營養(yǎng)成分，提供特殊的生長環(huán)境，需要長時間才能檢測到生長，故又稱“難培養(yǎng)的細菌”。養(yǎng)分離菌桿狀或物中呈多形性(長桿狀或絲狀)，的培養(yǎng)8小時出現中莢膜生②需要5%~10%的血或消圓小菌的菌，而無莢膜的菌株呈顆粒狀沉淀生顯混濁現上為灰白光滑、濕落；兔血為細小露羊血瓊脂脹試驗星現象，配血桿菌菌菌落的流大，而遠離血桿菌菌落不含血液的菌所進行的的菌結果④(X+V)因子結果陰性的幾種可能原因：待測菌死亡、培養(yǎng)基缺乏營養(yǎng)、孵育條件未滿足、紙片失效(人獸共患病病株有微，很少蘭染色，因為被堿性色著色狀“。初次培養(yǎng)需要5%~10%的-37℃，最適或粗糙生長中需混濁無菌：無色、半凸起的菌液樣或干觸酶(+)、氧化酶(+/-)①細菌形態(tài)學(柯氏染色)~反應：觸酶+、 (或生長試驗)：藥片周圍出現抑菌圈為敏感(抑制)，無抑)。④血清學凝完入宿的繁液會增不需要G球桿菌，常見、無鞭氧或兼性厭氧，長基道不呈粘型和粘液型養(yǎng)基：多不哚(+)，脲酶(-)，觸酶和氧化酶(+)、發(fā)酵葡萄臨床微生物檢驗細菌整理(弧菌屬)有弧菌絕對需要鈉離子，某些細菌無鹽不生長。上不發(fā)酵乳糖：沙門菌、志賀菌、弧菌養(yǎng)，普進行選擇在其表培養(yǎng)基(中心灰褐色的菌落)群樣排列2)動力和制動試驗：陽性可推定。4)霍亂毒素的測定麝香草酚藍)上形成的菌落較大，因分 (均含亞碲酸鉀)上，因細菌可將碲離。取玻片兩張，一張用來觀察動力，另血清凝集試驗：本試驗主要用于霍亂弧菌的血清型鑒定 道傳染病——霍米泔樣弧菌屬的推測鑒定的混稠，用接種環(huán)挑取A、BA、CABCA為群特異性抗原，而B、C為型特異性抗原。-別型-紅細胞凝集-VP--D++R++霍亂弧菌具有色氨酸酶和還原硝酸鹽為，培養(yǎng)后所產生的兩種產物結合成亞硝酸鹽吲哚，滴加所共有的性質(副溶血等除外)G極有氧①TCBS：藍綠色菌落(不發(fā)酵蔗久之不易刮①基本反應：氧化酶試驗(+)、葡萄糖(+)、乳糖(-)、吲哚(+)、脲酶(-)、VP(-)底沉淀物、魚蝦海產品中。主要性腹瀉，也可引素是產生性較高，對馬紅臨床微生物檢驗細菌整理(氣單胞菌屬和鄰單胞菌屬)養(yǎng)G有，普嗜冷菌37℃不生長；嗜中溫③TCBS和SS：不生鑒別性胨水，液體培養(yǎng)基中MAC乳糖，應與腸桿BAP(20ug/ml氨芐西林)：嗜水氣單胞隆氣單胞菌菌落有溶血現象。菌生化鑒定：氧化酶和觸酶(+)、硝酸鹽還原(+)、葡O/129敏感試驗(R)、肌醇產酸、三種氨基酸、嗜鹽性、②種的鑒定：主要鑒別三個常見菌種，嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌和威隆氣單胞菌。主要依據V-P、阿拉伯糖、氨基酸，其它種床上引起的感染常見病原菌之一。其為溶血毒素和細胞毒：氣單胞菌可引起多染，但以皮膚和軟組多數患者有與水或水，嗜水氣單胞菌和威G可林可抑現陽性P氧化酶和觸酶(+)、吲哚(+)、硝酸鹽還原(+)、發(fā)酵酸雙水解三者陽性和肌醇陽性為本菌一個種，既類志賀引起胃腸炎，好發(fā)狀可以是短時間的腹瀉。另外，還可膜炎、傷口感染等(1)與志賀菌屬細菌的鑒別：類志賀鄰單胞菌志賀菌OXI+—MOT+—(2)與氣單胞菌屬細菌的鑒別：試驗類志賀鄰單胞菌氣單胞菌屬細菌肌醇+—O129SR(3)與弧菌屬細菌的鑒別：試驗類志賀鄰單胞菌弧菌屬生長大多不生長TCBS不生長生長臨床微生物檢驗細菌整理(棒狀桿菌屬)段或顆毛和芽兩端膨大，排列如文字狀或亂放兩端或中異糖脂平板：棒狀桿菌的選擇性培養(yǎng)基。白喉菌落。在此培養(yǎng)基上生長的菌落分為三型柔軟，黑色、表面光滑有光澤，邊緣整整：重型表面有菌膜，其它兩型為均勻混濁或行染色，菌體染顆粒有明顯的顏色差別，易Albert(阿伯脫氏)：異染顆粒呈Neisser(奈瑟氏)：異染顆粒呈藍特征，作為頭氣管及鼻腔的粘膜，幾乎呈純時在皮膚、粘膜等部位的淺表性創(chuàng)強烈的外毒素胞毒作用③對組織有選擇性親癥和毒血癥染液中纖維蛋白將炎性細胞、黏膜壞死組織和菌體凝結在1)體外法：◆瓊脂平板毒力試驗(EIek平板)：觀察待測菌與抗毒素2)體內法(動物試驗)：皮內試驗法U◆半小時后再次注射培養(yǎng)物于動物的另一側體壁(對照)?！?4~72h觀察結果。臨床微生物檢驗細菌整理(有芽孢需氧革蘭陽性桿菌)養(yǎng)芽胞和莢膜,接涂片：兩明顯莢膜,單的形態(tài)：形連接處有明標本：因為抗腐敗能力較菌體強,所以在陳舊或?？梢娭挥小熬啊被虬菅堪?內生芽胞)：卵體中央，小形成扁平、灰白、不透明、邊低倍鏡下呈卷：絮狀沉淀，無菌⑤重碳酸鹽血瓊脂上(CO2)：有絲現象。無毒 (+)、脲酶(-)、枸櫞酸鹽(-)。1)顯微鏡檢查：革蘭染色、莢膜染色(俄爾特2)莢膜熒光抗體染色3)核酸檢測1)普通培養(yǎng)基：灰白色、粗糙型菌血其它需血快速而法包括菌體和菌落長毒力試驗：待測菌接種于素抑制聯合試驗驗驗類具有我國列為乙類傳按甲類傳染病處畜或其尸體，以污染的環(huán)境及各體表接觸、消化夏秋季莢膜和毒素，均皮膚炭疽、肺炭次感染罕見大部分：細菌性抗原和炭利用此特點來進行熱沉淀反應(Ascoli)-與抗血原：特異性抗原吞噬作用，在體外可阻上的噬菌體受體，有助于細菌的繁常成為侵襲因子。用高價的莢膜抗腫脹試驗，對細菌鑒定有一定的意質組成的外毒素復合物。三種時均不能引起病理變化：應在三級生物安全實驗室進行。生長中心或瓊脂平良好菌落較大，灰白玻璃樣或蠟：均勻混濁、有菌③卵黃瓊脂平板：卵黃反應(乳光反應)：因卵磷脂被分解形成明膠(+)、卵磷脂酶(+)。經過1~10-3于辨認菌計數及生化反必要時進行血清學分型起食物中季，引起食多為加熱烹米飯中極易無腐敗變質防止二次污型：一類是的腸毒素引型，由耐熱：蠟樣芽胞桿菌在卵黃瓊，培養(yǎng)三個小時后，雖未見菌卵磷脂被分解形成的白色沉淀樣芽胞桿菌與病人標本中的蠟樣芽臨床微生物檢驗細菌整理(分枝桿菌屬)點：①菌體形態(tài)：為微彎曲或直的桿菌?！奔毦?。同。抗酸桿菌的由來：本菌屬細菌大多數染色不易著色，經加熱或延長時間才能著色，一旦著色后有抵抗鹽酸酒精脫色的性質，故又稱抗酸桿菌(AFB)養(yǎng)①G+陽性，不易著色。②細長的直或略帶彎曲、兩端鈍圓的桿菌，有時可見分枝狀，單個散在或呈并常聚集成束狀、繩索狀或叢狀菌體堆積一團時類似“菊花冠”狀桿菌團。因衰老和抗結核藥物的作用可出現多形態(tài)，如球型、串珠狀或絲狀。③抗酸染色為紅色，背景為蘭色。PH.8。生長細顆粒成菌膜觸酶試驗(+)假涂分枝不用因分應冷(1)形態(tài)學檢查1)直接涂片染色鏡檢：2、根據對硝基苯甲酸(PNB)生長試驗、噻吩-2-羧酸肼(TCH或T2H)生長試驗、菌落形態(tài)和顏色，熱觸酶屬于結核分枝桿菌復合群枝桿菌PNBTCH分枝桿菌++桿菌-+枝桿菌-+硝酸鹽還原試驗型++最多的傳染卡介苗(BCG)就是有毒力的牛毒變異株我國的現狀：三高一低(患病核多見染枝桿菌不產生內、外毒素及侵可能與細菌在組織細胞內大量繁體成分及代謝產物的毒性以及機生的免疫損傷有關。結核分枝桿有利于結核分枝桿菌的黏附與入有使結核分枝桿菌在吞噬細胞內長見菌體呈橘紫多藥干燥或金胺2)濃縮集菌涂片檢查法：法 (2)核酸檢測上陽性痰假陰性--核菌素注入受試者皮內，若結核則結核菌素與致敏的淋態(tài)反應性炎癥。如未感染過分析：0.5~1.5cm流行病學調查 密分枝菌酸與海藻糖結合的一種糖的結核分枝桿菌的細胞壁中。使中生長時相互粘連排列成長索：有毒株的細胞壁成分。能抑制吞體和溶菌酶的結合，減緩溶酶體分解作用，使細菌在吞噬細胞內，可激發(fā)機體產生遲發(fā)型超敏反一次。景清晰，抗酸菌呈紅色，其它細菌和細胞呈藍色⑩操作應在生物安全柜中進行。DNA、放線菌、螺旋體、支真核細胞型微生物(細胞核分化程度高，有核膜、核仁，細胞器完整，包括真菌和原蟲)非細胞型微生物(僅有一種核酸類型，包括病毒、亞病毒、朊粒)拮抗外來病原微生物和提供某些營養(yǎng)物的作用。位改變或寄居微生物叢平衡失調，能引起內源性感染。)5.重視和加強與臨床的聯系踐。要是由于處理感染性物質時的操作不當造成的。8.消毒(disinfection)：通過物理或化學方法去除或殺滅大多數微生物的過程。滅菌(sterilization)：通過物理或化學方法殺滅或去除所有微生物的過程。消毒滅菌技術包括：熱力(濕熱滅菌和干熱滅菌)、化學(液體或氣體)、輻射(γ輻射和紫外線)、過濾技術。皮膚和軟組織感染，眼和結膜感染、子宮內膜炎、產后生殖道感染，胃腸炎、肝炎等。2.臨床常見采血指征：1發(fā)熱(>38。C)或低溫(36。C)2寒戰(zhàn)3白細胞增多(計數大于12，000109/L，特別有“核左移”未成熟的或桿狀核的白細胞)4粒細胞減少(成熟的多核白細胞<1000109/L)5血小板減少6皮膚粘膜出血7昏迷，休克8多器官衰竭9CRP告流程1.壓滴法(濕片法)→不可有氣泡和外溢觀察于觀察厭氧菌的動力熒光染色、特殊染色(鞭毛染色和莢膜染色)個原理，操作步驟與臨床意義復合物不易滲出。革蘭陰性菌細胞壁結構較疏松，肽聚糖層薄，含脂質多，易被乙醇溶解，使細胞壁通透性增加，胞內結晶○3等電點學說：革蘭陽性菌的等電點(pH2~3)比格蘭陰性菌(pH4~5)低，在相同pH的條件下，革蘭陽性菌比革蘭陰性菌所帶的負電荷(高層、斜面、高層斜面、平板)○1需氧培養(yǎng)法(37℃，18~24h)二氧化碳培養(yǎng)法：二氧化碳培養(yǎng)箱和燭缸法厭氧培養(yǎng)法(一)碳水化合物的代謝試驗1.糖(醇、苷)類發(fā)酵試驗(1)原理：不同細菌分解糖(醇、苷)的酶各異，代謝能力產物各不同，有的不分解，有的僅產酸，有的既產酸又產氣，利用此特點鑒(2)培養(yǎng)基：0.5~1.0%糖類等，內有指示劑。細菌接種糖發(fā)酵管，37℃、24h孵育后觀察結果結果判斷：有的細菌能分解某些糖產酸產氣(AG/+)，有的只能產酸而不產氣(A/+)，有的則不能分解糖類(N/-)★2.葡萄糖代謝類型鑒別試驗(O/F試驗)在無氧環(huán)境下不能分解葡萄糖，稱為氧化型;在分解葡萄糖的過程中，可以萄糖；不分解葡萄糖的細菌稱為產堿型。HL培養(yǎng)基(O/F氧化-發(fā)酵培養(yǎng)基)h結果O加液體石蠟變色；F有氧或無氧環(huán)境中都能分解葡萄糖，兩管均變色N氧或無氧的環(huán)境中都不能分解葡萄糖，兩管均不變色K—開放管變藍，封閉管不變色3.β-半乳糖苷酶試驗(ONPG)(1)原理：具有β-半乳糖苷酶的細菌，可分解鄰-硝基酚-β-D-半乳糖苷(ONPG)，生成黃色的鄰-硝基酚，在很低濃度下亦可檢出。(2)試劑：0.75MONPG溶液(4)應用：迅速或遲緩分解乳糖的細菌ONPG試驗為陽性，而不發(fā)酵乳糖的細菌為陰性。主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定aβ-半乳糖苷酶，可將乳糖分解糖快速運到細胞內所以需幾天乳糖才能被分解。苷水解試驗(1)原理：有的細菌可將七葉苷水解成七葉素和葡萄糖，前者與二價鐵離子反應，生成黑色化合物(2)培養(yǎng)基：七葉苷培養(yǎng)基、膽汁七葉苷培養(yǎng)基(3)方法及應用：腸球菌陽性，其他鏈球菌陰性★5.甲基紅試驗(MR)一步分解成甲酸、乙酸、乳酸等PH4.5以下，加入甲基紅試劑顯紅色(陽性)。如果酸進一步轉化為其它物質(醇、酮、醛、氣體和水)，或丙酮酸按PH在6.2以上，加入甲基紅試劑呈黃色(陰性)?！?.V-P試驗VP的代謝試驗(1)原理：細菌分泌的明膠酶(胞外蛋白水解酶)能分解明膠使明膠失去凝固能力而液化(3)應用：a腸桿菌科細菌鑒別b厭氧菌鑒定c非發(fā)酵菌鑒定常用★2.吲哚試驗(靛基質試驗)成吲哚(靛基質)，吲哚與加入試劑對位二甲氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲酶試驗②方法：將待檢菌接種于尿素培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后出現紅色為陽性，不變色(橙色)為陰性 脫氨酶試驗羧酶試驗★方法及結果：將待檢菌分別接種于氨基酸脫羧酶培養(yǎng)基(含葡萄糖、精氨酸或鳥氨酸或賴氨酸，指示劑為溴甲酚紫)和氨基對照管 對照管為黃色，若培養(yǎng)基由黃色變?yōu)樽仙珵榘被崦擊让冈囼炾栃裕魞H發(fā)酵葡萄糖顯黃色者為陰性。測定管由淡桔黃變紫(溴甲酚紫) (三)碳源利用試驗枸櫞酸鹽(丙二酸鹽)利用試驗 (1)原理：某些細菌能枸櫞酸鹽(丙二酸鹽)為唯一碳源，可在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上生長，將其分解生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，指 為深藍色。 用于腸桿菌科細菌屬間的鑒定 (四)各種酶類試驗★1.氧化酶試驗使對苯二胺氧化，生成有色琨類化合物(二甲基為紅，四甲基為藍)?！锓椒ㄅc結果：1)濾紙片法2)菌落法3)試劑紙片法：制成干紙片，便于保存。為保證實驗結果的準確性，應設陰、陽性對照菌株?！飸茫?)奈瑟菌屬陽性、莫拉菌屬陽性的鑒定2)腸桿菌科陰性、弧菌科、假單胞菌陽性及其它非發(fā)酵菌的鑒別化酶活性★2.過氧化氫酶試驗(觸酶試驗)★注意事項①不宜用血平板上的菌落作試驗，以免出現假陽性。②不宜用陳舊的培養(yǎng)物，以免出現假陰性③需設陰(鏈)、陽(葡)鮮配制驗(1)原理：某些細菌可將硝酸鹽還原成亞硝酸鹽，后者在與乙酸作用生成亞硝酸，亞硝酸與對氨基苯磺酸作用，形成重氮苯磺酸，在與(3)結果：a加入試劑后顯紅色→陽性b加入試劑后不顯紅色→加入鋅粉，顯紅色為陰性,不顯紅色為陽性4.DNA酶試驗★原理：細菌產生的DNA酶，可使長鏈脫氧核糖核酸(DNA)水解成寡核苷酸。因為長鏈DNA可被酸沉淀，而寡核苷酸則溶于酸，所用玻片法檢測；另一種是分泌到菌體外的游離凝固酶，可用試管法檢測菌液呈均勻混濁狀態(tài)，為陽性；菌液聚集呈團塊或顆粒狀，為陰性mlml不凝固，則為陰性(24h后不凝固才報告陰性)。注意事項1)玻片法為篩選試驗，陰、陽性結果均需進行試管法。2)血漿必需新鮮。3)應使用EDTA抗凝血而非枸櫞酸鹽抗凝。有些凝固酶陰性的葡萄球菌和腸球菌可利用枸櫞酸鹽，使抗凝血再次凝固而出現假陽性結果。4)最好不用人血。存在潛在的感染因子和凝固障礙6.CAMP試驗(1)原理：B族鏈球菌能產生CAMP因子，可促進葡萄球菌的β溶血素溶解紅細胞的活性，因此在兩菌(B族鏈球菌和葡萄球菌)的交(2)培養(yǎng)基：血瓊脂平板(3)應用：B族鏈球菌陽性，特異性鑒定(4)注意事項ATCCATCC它金葡結果不典型，甚至出現假陰性結果。(1)原理：膽汁或膽鹽可溶解肺炎鏈球菌，可能是膽汁降低了細菌細胞膜表面的張力使菌體裂解，也可能是膽汁加速了肺炎鏈球菌的自(2)培養(yǎng)基：10%去氧膽酸鈉或純牛膽汁(3)方法：平板法35℃30min(4)應用：肺鏈+與甲鏈-的鑒別(五)抑菌試驗★1.O/129敏感(抑菌)試驗(1)原理：O/129對弧菌屬和鄰單胞菌屬有抑菌作用，而對氣單胞菌無此作用。(2)培養(yǎng)基：堿性瓊脂平板(3)方法：10ug/片、150ug/片(4)結果與應用：屬間鑒定(1)原理：A群鏈球菌對桿菌肽幾乎全部敏感，而其他群鏈球菌絕大多數對其耐藥。(2)培養(yǎng)基：血瓊脂平板(1)原理：肺炎鏈球菌對奧普拖欣敏感，而其他鏈球菌對其耐藥。(2)培養(yǎng)基：血瓊脂平板(3)結果及應用：用于肺炎鏈球菌與其他鏈球菌的鑒別(六)其它試驗A?！椒ㄅc結果：4%的KOH溶液保存期限不超過一周取一滴4%的氫氧化鉀水溶液(應新鮮制)于潔凈的玻片上再取新鮮菌落少許，與氧化鉀溶液攪拌均勻，每隔幾秒上提接種環(huán)，觀察能否拉出絲來。能拉出粘絲為陽性結果(革蘭陰性菌)，仍為菌懸液者陰性(革蘭s出現陽性反應，革蘭陽性菌60s以后仍為陰性反應。★2.克氏雙糖鐵試驗(復合生化反應)原理：克氏雙糖鐵(KIA)瓊脂用于觀察細菌對糖(葡萄糖和乳糖)的利用能力,以及是否產生硫化氫,可對細菌的種屬進行初步鑒定。克氏雙糖鐵培養(yǎng)基制成高層(下層)和短的斜面(上層)其中乳糖濃度為葡萄糖濃度的10倍，。如果細菌只分解葡萄糖而不分解乳糖，葡萄糖分解產生少量的酸，在最初培養(yǎng)的8~12h內也足以使高層和斜面變黃(酚紅指示劑6.8~8.4，黃~紅)，但隨著培養(yǎng)時間的延長，培養(yǎng)基斜面部分所產的酸因接觸空氣被氧化，并因細菌利用含氮物質生成堿性化合物，經18~24h后整個斜面又恢復成紅色，深層在相，所產生的酸暫時不被氧化而仍呈黃色；如果細菌既分解葡糖糖，又分解乳糖，因培養(yǎng)基中含乳糖的濃度較高，產生大個培養(yǎng)基變黃；如果細菌分解培養(yǎng)基中的蛋白質產生硫化氫，與培養(yǎng)基中的亞鐵離子生成硫化亞鐵黑色沉淀，使培養(yǎng)基7.抗原檢測：凝集反應、免疫熒光技術、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)平或患者恢復期抗體效價比急性期升高≥4倍才有意義。9.細菌毒素檢測：內毒素(革蘭陰性)→鱟試驗；外毒素：體內試驗→動物試驗、體外試驗→抗原抗體反應菌的抗菌效果：一代頭孢菌素>二代>三代；對革蘭陰性球菌的抗菌效果：一代頭孢菌素<二代<三代2.抗菌藥物敏感試驗(AST)的意義3.敏感(S):血藥濃度達到MIC4~8倍或以上。是指分離菌株能被測試藥物使用推薦劑量時，在感染部位通?？蛇_到的抗菌藥物濃度所抑耐藥(R)：MIC高于藥物在血液或組織中的濃度。是指分離菌株不能被測試藥物使用推薦劑量時在感染部位通?？蛇_到的抗菌藥物濃度物對分離菌株的臨床療效不可靠。4.中介(I):血藥濃度相當于或略高于MIC。是指抗菌藥物MIC接近血液和組織中通?？蛇_到的濃度，療效低于敏感菌株，在藥物生理濃效力，或者可用高于正常劑量的藥物進行治療；另外中介還作為緩沖區(qū)，以避免微小的不能控制的技術因素造成重大5.非敏感(NS):由于沒有耐藥菌株或耐藥菌罕見，此分類特指僅有敏感解釋標準的分離菌株。對于這些菌株應當確證鑒定結果和藥敏結驗方法:1.紙片擴