(高清版)GB∕T 38172-2019 蛋白A親和層析介質(zhì)

蛋白A親和層析介質(zhì)國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)1蛋白A親和層析介質(zhì)應(yīng)符合表1中的規(guī)定。最高流速/(cm/h)配基密度(p)/(mg/mL)動(dòng)態(tài)載量(Q?0%)/(mg/mL)2表1(續(xù))菌落總數(shù)/(CFU/mL)5-羥甲基糠醛脫落量/(μg/mL)在0.10MPa壓力下可達(dá)最高流速。每毫升介質(zhì)對(duì)人免疫球蛋白(h-IgG)的吸附量。5檢測(cè)方法5.1外觀合GB/T6682的三級(jí)水清洗5次，每次2min,最后用真空泵在0.1MPa壓力下抽干5min。將洗凈的用塑料吸管吸取混合體系置于載玻片上，調(diào)整顯微鏡放大倍數(shù)。以視野里80%以上面積均為蛋白A親和層析介質(zhì)為標(biāo)準(zhǔn)，用塑料吸管增減載玻片上的蛋白A親和層析介質(zhì)，最后用蓋玻片壓上。調(diào)節(jié)5.2粒徑3W——粒徑為k(μm)顆粒的體積與全部試樣在重復(fù)性條件下獲得的三次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。將層析柱連入中低壓層析系統(tǒng)。測(cè)定時(shí)，從零開始設(shè)定一定流速v?(mL/min),在重復(fù)性條件下獲得的三次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。45.4.1.2甲基紅-溴甲酚綠指示劑準(zhǔn)確稱取3mg甲基紅，1mg溴甲酚綠于50mL燒杯中，加入乙醇溶解后定容至100mL。5.4.2樣品處理按照方法5.1.1處理介質(zhì)樣品。接著進(jìn)行硝化處理，準(zhǔn)確稱取1.00g樣品，移入干燥的100mL凱氏燒瓶中，加入50mg硒粉和5mL濃硫酸。置于電爐上加熱。先用小火慢慢加熱2h至液體呈透明淡綠色，然后改用大火繼續(xù)加熱30min,當(dāng)液體澄清透明后停止加熱，并自然冷卻至室溫。準(zhǔn)確稱量10.0mg蛋白A,溶于1mL水中。同時(shí)配制10.00g/mL、6.00mg/mL、3.00mg/mL、1.25mg/mL蛋白A標(biāo)準(zhǔn)溶液，各取1mL進(jìn)行硝化處理。5.4.3樣品測(cè)定準(zhǔn)確稱取1mL硝化后樣品，移入干燥的100mL凱氏定氮瓶中。加入10mL40%的氫氧化鈉溶液，蒸汽浴進(jìn)行反應(yīng)。用25mL20g/L硼酸溶液(加入5滴～6滴甲基紅-溴甲酚綠指示劑，淺紫色)收集餾出液，冷凝器的出液口浸于硼酸溶液液面以下。硼酸溶液的體積達(dá)到45mL時(shí)冷凝器的出液口離開液面，用去離子水沖洗冷凝器的出液口，至最終體積為50mL時(shí)停止收集。用0.05mol/L的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定上述硼酸溶液至灰色或藍(lán)紫色為終點(diǎn)，并記錄消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。建立蛋白A質(zhì)量-消耗鹽酸體積標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí)取1.00g空白介質(zhì)進(jìn)行上述操作，做空白對(duì)照。5.4.4結(jié)果計(jì)算按式(4)計(jì)算：p——蛋白A親和層析介質(zhì)配基密度，單位為毫克每毫升(mg/mL);m?——蛋白A親和層析介質(zhì)上測(cè)定出的蛋白A質(zhì)量，單位為毫克(mg);mo——空白介質(zhì)上測(cè)定出的蛋白A質(zhì)量，單位為毫克(mg);m——蛋白A親和層析介質(zhì)質(zhì)量，單位為克(g);1.4——蛋白A親和層析介質(zhì)質(zhì)量轉(zhuǎn)化為體積的換算系數(shù)。在重復(fù)性條件下獲得的三次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。5.5動(dòng)態(tài)載量5.5.1溶液配制5.5.1.1緩沖液A,pH7.0準(zhǔn)確稱取4.17g十二水合磷酸氫二鈉，1.27g二水合磷酸二氫鈉和8.78gNaCl于500mL燒杯中，加入三級(jí)水溶解后，調(diào)pH為7.0,最后定容至1000mL,用0.45μm過(guò)濾膜進(jìn)行過(guò)濾。準(zhǔn)確稱取7.51g甘氨酸，加入三級(jí)水溶解，調(diào)pH至3.0,最后定容至1000mL,用0.45μm過(guò)濾膜進(jìn)行過(guò)濾。5GB/T38172—25.5.1.3h-IgG樣品(純度>98%)動(dòng)態(tài)結(jié)合載量用10%穿透值表示。測(cè)量并記錄樣品h-IgG的100%UV信號(hào)，包括不結(jié)合到介質(zhì)上的IgG亞類的紫外吸收。用緩沖液A以2.0mL/min的流速平衡層析柱至紫外基線平衡，以2.0mL/min的流速上樣，待流穿曲線中h-IgG的UV信號(hào)濃度為10%的樣品濃度時(shí)上樣結(jié)束，記錄上1%丙酮，記錄出現(xiàn)UV信號(hào)時(shí)的體積。按式(5)計(jì)算：V?——柱出口蛋白濃度C達(dá)到入口蛋白濃度C。的10%時(shí)流出液體積，單位為毫升(mL);在重復(fù)性條件下獲得的三次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。5.75-羥甲基糠醛脫落量節(jié)pH為13.0。100mL容量瓶中，用10%甲醇水溶液稀釋至刻度，配成0.01pg/mL、0.03μg/mL、0.05μg/mL、清洗方法同5.1.1。取若干份1.00g抽干蛋白A親和層析介質(zhì)置于帶蓋玻璃試管內(nèi)。分別取6記錄下該保留時(shí)間處峰的面積，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量。5.7.4結(jié)果計(jì)算按式(6)計(jì)算：式中：X——每毫升介質(zhì)中5-羥甲基糠醛的脫落量，單位為微克每毫升(μg/mL);C——從工作曲線求得的試樣溶液中5-羥甲基糠醛的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);V——試樣經(jīng)鹽酸水解后最終的定容體積，單位為毫升(mL);m——稱取的蛋白A親和層析介質(zhì)的質(zhì)量，單位為克(g);1.4——蛋白A親和層析介質(zhì)質(zhì)量轉(zhuǎn)化為體積的換算系數(shù)。在重復(fù)性條件下獲得的三次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。6檢驗(yàn)規(guī)則6.1組批同一工藝周期生產(chǎn)，質(zhì)量均一的產(chǎn)品為一批。按GB/T5475的規(guī)定進(jìn)行。6.3出廠檢驗(yàn)每批產(chǎn)品出廠前應(yīng)進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格的產(chǎn)品方可出廠。出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目為第4章中規(guī)定的粒徑、最6.4型式檢驗(yàn)6.4.1正常生產(chǎn)時(shí)，每半年應(yīng)進(jìn)行一次型式檢驗(yàn)，有下列情況之一時(shí)應(yīng)進(jìn)行型式檢驗(yàn)：a)新產(chǎn)品試制鑒定時(shí)；c)產(chǎn)品停產(chǎn)半年以上恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；d)出廠檢驗(yàn)結(jié)果與上次型式檢驗(yàn)有較大差異時(shí)；e)監(jiān)督機(jī)構(gòu)提出要求時(shí)。6.4.2型式檢驗(yàn)項(xiàng)目為第4章中規(guī)定的所有項(xiàng)目。6.5判定規(guī)則6.5.1出廠檢驗(yàn)判定和復(fù)檢6.5.1.1出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目符合