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出口食品過敏原成分檢測第18部分：實時熒光PCR方法檢測蕎麥成分DetectionofallergencomponentsinI 本部分所規(guī)定方法的最低檢出限(LOD)為0.01%質(zhì)量分數(shù))。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T27403實驗室質(zhì)量控制和探針進行實時熒光PCR擴增，觀察實時熒光PCR的增幅現(xiàn)象，判斷樣品中是否存在過敏原蕎麥工25試劑和材料表1。序列(5'-3’)目的基因內(nèi)參照5'端引物內(nèi)參照3'端引物內(nèi)參照探針AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCFAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAA真核生物18SrRNA基因ITS和5.8SrRNA用10%鹽酸調(diào)pH至8.0,121℃,高壓滅菌20min,備用。5.4蛋白酶K:20mg/μL。5.1070%乙醇。6.1實時熒光PCR儀。6.4冰箱：2℃~8℃,-20℃。3取適量DNA溶液原液加雙蒸水稀釋一定倍數(shù)后，使用核酸蛋白分析儀或紫外分光光度計測c=A?6O×N×50…………(1)7.3實時熒光PCR檢測7.3.2實時熒光PCR反應參數(shù)50℃/2min,95℃/10mi4c)如35.0<Ct值<40.0,則重復一次。如再次擴增后Ct值仍為<40.0,則判定被檢樣品陽性：如再次擴
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