Luteolin對實(shí)驗(yàn)性胰腺炎的保護(hù)作用

1/1Luteolin對實(shí)驗(yàn)性胰腺炎的保護(hù)作用Luteolin對實(shí)驗(yàn)性胰腺炎的保護(hù)作用#熊杰1，胡國勇2，倪建波1，萬榮1，王興鵬2**（1.同濟(jì)大學(xué)附屬第十人民醫(yī)院消化內(nèi)科，上海200072；2.上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科，上海200080）摘要：

目的：

觀察3’,4’,5,7-四羥黃酮（Lut）治療小鼠重癥急性胰腺炎（SAP）的效果并探討其作用機(jī)制。

方法：

50只雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為生理鹽水注射、重癥急性胰腺炎模型組、低劑量Lut給藥組（50mg/kg）、中劑量Lut給藥組（100mg/kg）、高劑量Lut給藥組（200mg/kg），每組10只，各給藥組均與開始造模前2小時灌胃給藥。

造模完成后6h處死各組小鼠，HE染色法觀察胰腺組織病理改變并測定各組小鼠血清淀粉酶水平及胰腺組織MDA和MPO含量；ELISA法檢測血清HO-1、TNF-、IL-10含量；realtime-PCR法檢測胰腺組織HO-1、TNF-、IL-10mRNA水平變化；westernbolt法檢測胰腺組織HO-1、TNF-、IL-10、NF-B蛋白水平變化。

結(jié)果：

較SAP模型組，三組Lut給藥組均可不同程度地改善胰腺損傷程度，降低胰腺組織病理評分與胰腺濕重比（P＜0.05）；升高血清、組織mRNA水平及組織蛋白水平的HO-1、IL-10含量（P＜0.05或P＜0.01），降低TNF-含量（P＜0.05或P＜0.01）。

同時三組Lut給藥組均可不同程度地降低胰腺組織中MDA、MPO含量。

結(jié)論：

Lut可發(fā)揮對SAP胰腺的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與增高組織HO-1活力，降低氧化應(yīng)激水平、減少中性粒細(xì)胞浸潤、促進(jìn)抗炎因子IL-10的表達(dá)及抑制NF-B、TNF-表達(dá)有關(guān)。

關(guān)鍵詞：

3’,4’,5,7-四羥黃酮；血紅素加氧酶；腫瘤壞死因子-；白介素-10；核轉(zhuǎn)錄因子-B中圖分類號：

R576ProtecteffectsofluteolinonexperimentalacutepancreatitisinmiceXIONGJie1,HUGuoyong2,NIJianbo1,WANRong1,WANGXingpeng2(1.DepartmentofGastroenterology,ShanghaiTenthPeoplesHospital,TongjiUniversitySchoolofMedicine,ShangHai200072;2.DepartmentofGastroenterology,ShanghaiFirstPeoplesHospital,ShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedicine,ShangHai200080)Abstract:Objective：

Toinvestigatetheprotecteffectsofluteolinonthepancreasinsevereacutepancreatitis(SAP)mousemodel,andexploreitspossiblemechanism.Method:Atotalof50maleC57BL/6micewererandomlydividedinto5groups(n=10ineachgroup):group1,normalsaline-treatedgroup;group2,SAPmodelgroup;group3,4,5,SAP+luteolin-treated（50,100,200mg/kg,peros,respectively,luteolinwasadministrated2hbeforethemodelestablishment.6hafterthemodelestablishment,allmiceweresacrificed,thepancreasweight/bodyweightratiowascalculated,thehistopathologicalchangesineachgroupweregraded,theamylaselevelsinserumandthecontentsofmalondialdehyde(MDA)andmyeloperoxidase(MPO)inpancreastissueweredetected.Thehemeoxygenase-1(HO-1)、tumornecrosisfactoralpha(TNF-)、interleukin-10（IL-10）andnuclearfactorkappaB(NF-B)levelsinserumandpancreastissureweredetectedbyELISA,realtime-PCRandwesternblot.Result：

Pretreatmentwithluteolinsignificantlyattenuatedtheseverityofpancreatitisasevidencedbyeffectivereductionsinpancreasweight/bodyweightratio,histopathologyscores,MPOactivity,MDAformation,TNF-level,NF-Bactivity(P＜0.05orP＜0.01),andconspicuousincreasesinHO-1andIL-10.Conclusion:TheresultofthestudydemonstratedthatluteolinhasprotectiveeffectsonthepancreasinSAP.UpregulationofHO-1andIL-10,downregulationofNF-BandTNF-mightbeseverdasitspotentialmechanism.基金項(xiàng)目：

高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金資助項(xiàng)目（編號20090072110022）作者簡介：

熊杰，（1987-），男，碩士研究生，急性胰腺炎的基礎(chǔ)研究。

通信聯(lián)系人：

王興鵬，（1965-），男，教授，胰腺疾病的基礎(chǔ)與臨床。

E-mail:wangxp1965@-1-51015202530354045Keywords:Luteolin;Hemeoxygenase-1;Tumornecrosisfactoralpha;Interleukin-10;NuclearfactorkappaB500引言急性胰腺炎(acutepancreatitis，AP)是由于多種原因引起的胰腺自身消化性疾病，急性重癥胰腺炎(severeacutepancreatitis，SAP)由于并發(fā)多臟器功能衰竭，病情兇險(xiǎn)，常常危及患者的生命[1]。

氧化應(yīng)激(oxidativestress)是在機(jī)體內(nèi)活性氧生成和抗氧化物質(zhì)失衡狀態(tài)下，直5560接或間接通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路引起細(xì)胞的損傷，是許多疾病的病因，同時又是許多疾病發(fā)生、發(fā)展的結(jié)果。

目前研究表明，氧化應(yīng)激在AP的發(fā)病中發(fā)揮重要作用，還與胰腺炎時胰腺外器官的損傷有密切的聯(lián)系[2,3]。

3’,4’,5,7-四羥黃酮（Luteolin，Lut）又名木犀草素，屬于天然黃酮類化合物，近年研究表明Lut具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等作用[4]。

本研究通過觀察Lut對雨蛙素聯(lián)合脂多糖誘導(dǎo)的小鼠重癥急性胰腺炎組織病理、生化指標(biāo)、促炎及抗炎因子表達(dá)水平、血紅素加氧酶（Hemeoxygenase-1，H0-1）表達(dá)水平以及核因子kappaBp65（nuclearfactorkappaB,NF-Bp65）的影響，初步探討Lut對小鼠重癥急性胰腺炎的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。

1材料與方法1.1材料與試劑65健康雄性C57BL/6小鼠50只，體重20-22g，購自中科院上海實(shí)驗(yàn)動物中心。

Lut購自上海同田生物科技有限公司，雨蛙素(cerulein，Cn)和脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)均購自美國Sigma公司。

血淀粉酶試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、髓過氧化物酶(MPO)試劑盒均購自南京建生生物制品研究所。

HO-1、TNF-、IL-10ELISA試劑盒均購自美國RD公司。

Trizol試劑購自美國Invitrogen公司，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、realtime-PCR試劑盒均購自日本Tankara70公司。

兔抗鼠HO-1、TNF-、IL-10、NF-Bp65、均購自美國santacruz公司。

內(nèi)參抗體-actin、LaminB及羊抗兔熒光標(biāo)記二抗均購自巴傲德生物公司。

方法動物分組及模型制作1.21.2.1按照隨機(jī)分配原則將小鼠分為5組，即生理鹽水組(Normalsaline,NS)、模型組、低劑量75Lut給藥組、中劑量Lut給藥組和高劑量Lut給藥組，每組10只。

受試動物于實(shí)驗(yàn)前禁食18h，自由飲水。

模型組小鼠腹腔內(nèi)注射雨蛙素50ug/kg，連續(xù)6次，每次間隔1h，在末次雨蛙素注射后，即向腹腔內(nèi)注射脂多糖10mg/kg；低、中、高三組Lut給藥組分別于第一次注射雨蛙素2小時前予以口服灌入100mg/kg、200mg/kg和400mg/kgLut，其造模步驟同模型組。

NS組用相同體積生理鹽水代替雨蛙素及脂多糖予以注射。

1.2.2取材80各組小鼠均于最后一次雨蛙素注射后第6小時眼球取血，脫頸法處死，剖腹，肉眼觀察腺及胰外各器官變化。

仔細(xì)分離全部胰腺，稱胰腺濕重，計(jì)算濕重比（胰腺濕重與體重的比），一部分胰腺于4%多聚甲醛溶液中固定，石蠟包埋，供形態(tài)學(xué)檢測；其余部分-80℃保存，用于組織MDA、MPO水平測定以及westernblot。

-2-1.2.385血清各項(xiàng)指標(biāo)的測定采用碘-淀粉比色法測血清淀粉酶含量，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測血清HO-1、TNF-、IL-10的含量，各項(xiàng)操作過程嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書指示。

胰腺組織MDA及MPO含量測定1.2.4取部分胰腺組織稱重后，加人相應(yīng)比例的生理鹽水，用低溫勻漿機(jī)制成l％的勻漿，4℃903000g/min離心lOmin,取上清，雙縮脲法測定蛋白含量，硫代巴比妥酸（TBA）法檢測MDA含量。

另取部分胰腺組織稱重后，加入相應(yīng)比例的生理鹽水，用低溫勻漿機(jī)制成10%勻漿，取出0.1mL上清，用酶化學(xué)法測定MPO含量，各項(xiàng)操作過程嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書指示。

胰腺組織病理檢查及評分1.2.5各組取胰腺常規(guī)切片，HE染色，顯微鏡下觀察。

用雙盲法按Schmidt標(biāo)準(zhǔn)行胰腺組織95病理評分[5]，評分標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1Schmidts胰腺組織病理學(xué)評分標(biāo)準(zhǔn)Table1Schmidtsscorestandardofpancreatichistopathlogy病理改變分值012無無無無1-2處3間質(zhì)水腫炎癥浸潤實(shí)質(zhì)壞死實(shí)質(zhì)出血小葉間＜20%＜5%小葉內(nèi)20%-50%5%-20%3-5處腺泡間＞50%＞20%＞20%1.2.6胰腺組織HO-1、TNF-、IL-10mRNA水平測定100105按說明書用Trizol試劑盒提取肺組織總RNA，用紫外分光光度計(jì)測定RNA濃度，逆轉(zhuǎn)錄法生成CDNA。

采用realtime-PCR法檢測各組胰腺組織HO-1、TNF-、IL-10mRNA水平變化,以-actin為內(nèi)參照，Ct法計(jì)算各組間mRNA倍數(shù)關(guān)系。

HO-1正向引物：

5-GATAGAGCGCAACAAGCAGAA-3，反向引物：

5-CAGTGAGGCCCATACCAGAAG-3；TNF-正向引物：

5-TCTCTTCAAGGGACAAGGCTG-3，反向引物：

5-ATAGCAAATCGGCTGACGGT-3；IL-10正向引物：

5-CTTACTGACTGGCATGAGGATCA-3，反向引物：

5-GCAGCTCTAGGAGCATGTGG-3；-actin正向引物：

5-GTCCCTCACCCTCCCAAAAG-3，反向引物：

5-GCTCCCTCAAC-ACCTCAACCC-3。

Westernblotting檢測1.2.7取-80℃保存的胰腺組織，液氮研磨后分別提取總蛋白與核蛋白，測定蛋白濃度，經(jīng)110SDS-PADE電泳分離，將目的蛋白轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜上，脫脂奶粉封閉，加兔抗鼠HO-1（稀釋倍數(shù)1:100）、TNF-（稀釋倍數(shù)1:100）、IL-10（稀釋倍數(shù)1:100）、一抗，4℃孵育過夜，加熒光標(biāo)記二抗，洗膜后機(jī)器曝光，采用Image-ProPlus像分析系統(tǒng)對各條帶平均灰度值（A）進(jìn)行分析，以目的條帶的A值與內(nèi)參照-actin的A值比值為相對表達(dá)量。

統(tǒng)計(jì)處理1.2.8115分組所得計(jì)量數(shù)據(jù)采用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間均數(shù)比較用SNK-q檢驗(yàn)。

病理組織評分等級差異用Ridit分析，數(shù)據(jù)用樣本例數(shù)表示。

P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

-3-2結(jié)果2.1各組胰腺組織病理變化及評分如圖1所示，生理鹽水組，胰腺組織正常（圖1a）；模型組即Cn+LPS組，胰腺高度120125水腫，廣泛腺泡細(xì)胞壞死，細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊不清，腺泡內(nèi)空泡形成，壞死區(qū)有大量中心粒細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤。

胰腺間質(zhì)內(nèi)動脈痙攣，靜脈明顯擴(kuò)張淤血，炎性細(xì)胞附邊，局部血管出血、壞死（圖1b）；低、中、高Lut給藥組相比模型組有不同程度的水腫、浸潤及壞死程度的減輕（圖1c、1d、1e）。

各組評分結(jié)果見表2。

表2Schmidts胰腺組織病理評分結(jié)果Table2Theresultsofpancreatichistopathologyscore病理變化NS組間質(zhì)水腫炎癥浸潤實(shí)質(zhì)壞死實(shí)質(zhì)出血SAP模型組間質(zhì)水腫炎癥浸潤實(shí)質(zhì)壞死實(shí)質(zhì)出血低Lut給藥組間質(zhì)水腫炎癥浸潤實(shí)質(zhì)壞死實(shí)質(zhì)出血中Lut給藥組間質(zhì)水腫炎癥浸潤實(shí)質(zhì)壞死實(shí)質(zhì)出血高Lut給藥組間質(zhì)水腫炎癥浸潤實(shí)質(zhì)壞死實(shí)質(zhì)出血分值0123總數(shù)910010100001010000101000010004610a004610a003710a064010a024410ab025310ab025310ac26210ab053210ac062210ac045110ac730010ac072110ac082010ac073010ac910010c注：

a：

與生理鹽水組相比P＜0.05；b：

與模型組相比P＜0.05；c：

與模型組相比P＜0.01-4-0.530.05ab6.181.2068.320.3567.780.29ab5.721.32ac0.450.07acacac0.380.10ac4.771.5366.920.2579.48.4ac89.86.9ac104.710.2ac0.730.050.820.070.960.0482.314.571.210.663.08.9613676335461154321286103801896圖1各組胰腺組織病理比較。

A：

正常胰腺；B：

急性胰腺炎模型組；C：

低劑量Lut給藥組；D：

中劑量Lut給藥組；E：

高劑量Lut給藥組Figure1.Comparisionofpancreasamongeachgroup(HE,400).A：

normalpancreas;B：

APmodelgroup;C：

lowdoseLuteolingroup;D：

middledoseLuteolingroup;E：

highdoseLuteolingroup1301352.2各組胰腺組織濕重比及MDA、MPO含量測定結(jié)果如表3所示，與生理鹽水組相比，模型組胰腺濕重比、MDA含量以及MPO含量均顯著增高（P＜0.05),低、中、高Lut給藥組相比模型組三項(xiàng)指標(biāo)均有不同程度的下降（P＜0.05或P＜0.01）。

表3各組胰腺組織濕重比、MDA含量及MPO含量Table3Thepancreasweight/bodyweight、MDAandMPOlevelinpancreastissure胰腺濕重比（mg/g）64.870.251.721.240.100.0469.240.48a7.342.16a0.670.10aabab140組別例數(shù)MDA含量（nmol/t）MPO含量（U/mg）NS組SAP模型組低Lut給藥組中Lut給藥組高Lut給藥組注：

a：

與生理鹽水組相比P＜0.05；b：

與模型組相比P＜0.05；c：

與模型組相比P＜0.01各組血清淀粉酶、HO-1、TNF-、IL-10值測定結(jié)果2.3如表4所示，與生理鹽水組相比，模型組血清淀粉酶、TNF-水平顯著增高（P＜0.05），145150低、中、高Lut給藥組可不同程度降低血清淀粉酶水平、TNF-水平（P＜0.05或P＜0.01）。

模型組血清HO-1、IL-10水平相對生理鹽水組已有比較明顯升高（P＜0.05），然而低、中、高Lut各給藥組血清HO-1、IL-10水平相比模型組而言又均有不同程度的增高（P＜0.05或P＜0.01）。

表4各組血清淀粉酶、HO-1、TNF-、IL-10含量Table4Thelevelofamylase、HO-1、TNF-andIL-10inserum淀粉酶（U/mL）6278013280.280.0528.88.912.52.36177852370a0.560.06a98.722.9a56.35.9aababab組別例數(shù)HO-1（ng/mL）TNF-(pg/mL)IL-10(pg/mL)NS組SAP模型組低Lut給藥組中Lut給藥組高Lut給藥組注：

a：

與生理鹽水組相比P＜0.05；b：

與模型組相比P＜0.05；c：

與模型組相比P＜0.01acacacacacac-5-2.4各組胰腺組織HO-1、IL-10mRNA水平測定結(jié)果如圖2所示，與生理鹽水組相比，模型組TNF-mRNA水平增高倍數(shù)明顯（P＜0.05），低、中、高Lut給藥組可不同程度降低胰腺組織TNF-mRNA水平增高倍數(shù)（P＜0.05或P155160＜0.01）。

模型組HO-1mRNA、IL-10mRNA水平較生理鹽水組已有小幅度增高，低、中、高Lut各給藥組可使HO-1mRNA、IL-10mRNA水平增高幅度更為明顯（P＜0.05或P＜0.01）。

圖2各組胰腺組織HO-1、TNF-、IL-10mRNA水平表達(dá)情況。

表與模型組相比，p0.05；Figure2ThemRNAlevelofHO-1,TNF-,IL-10inpancreastissureamongeachgroup.ap0.01vs.NSgroup；bp0.05vs.APgroup；2.5各組胰腺組織HO-1、TNF-、IL-10、NF-Bp65蛋白水平表達(dá)結(jié)果a代表與生理鹽水組相比，p0.05；c代表與模型組相比，p0.01b代cp0.01vs.APgroup165如圖3所示，與生理鹽水組相比，模型組TNF-、NF-Bp65蛋白表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05），低、中、高給藥組可不同程度降低TNF-、NF-Bp65蛋白表達(dá)水平（P＜0.05或P＜0.01）。

模型組HO-1、IL-10蛋白表達(dá)水平較生理鹽水組已有小幅度升高（P＜0.05），低、中、高Lut給藥組可使HO-1、IL-10蛋白表達(dá)水平增高幅度更為明顯（P＜0.05或P＜0.01）。

圖3各組胰腺組織HO-1、TNF-、IL-10及NF-B蛋白表達(dá)情況。

A：

各組胰腺組織HO-1、TNF-、IL-10及NF-B蛋白表達(dá)變化；B-E：

各組胰腺組織HO-1、TNF-、IL-10及NF-B蛋白相對表達(dá)量的變化。

Figure3.TheproteinlevelsofHO-1,TNF-,IL-10,NF-Binpancreastissureamongeachgroup.A：

ChangesofHO-1、TNF-、IL-10andNF-Bexpressionatproteinlevelamongeachgroup；B-E：

RelativeexpressionlevelofHO-1、TNF-、IL-10andNF-Bamongeachgroup.ap0.01vs.NSgroup；bp0.05vs.APgroup；-6-170175a代表與生理鹽水組相比，p0.05；b代表與模型組相比，p0.05；c代表與模型組相比，p0.01cp0.01vs.APgroup。

3討論在SAP的發(fā)病過程中，早期胰蛋白酶原被激活轉(zhuǎn)化為胰蛋白酶，誘發(fā)局部炎癥反應(yīng)，180185190195200205210215炎性介質(zhì)產(chǎn)生，多核中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞釋放溶酶體酶、氧自由基(oxygenfreeradicals，OFR)、血管活性物質(zhì)和促炎反應(yīng)介質(zhì)[6]。

OFR及其衍生物作為分子起源在胰腺損害的過程中起重要作用，這些高度的活化物質(zhì)可通過脂肪酸過氧化作用造成的類脂膜破壞及溶酶體膜破壞。

此外OFR可激活補(bǔ)體，促進(jìn)白細(xì)胞黏附、活化和遷移，能夠損傷內(nèi)皮細(xì)胞的完整性，增加毛細(xì)血管的通透性，造成循環(huán)血量的丟失，引起微循環(huán)障礙，加重胰腺損傷[7-9]HO-1也被稱為熱休克蛋白-32(HSP-32)，為一種應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白，是降解血紅素為膽綠素、一氧化碳(CO)和亞鐵的限速酶。

近來研究顯示，應(yīng)激狀態(tài)下，HO-1通過抗氧化、維持微循環(huán)正常功能和抗炎性介質(zhì)反應(yīng)等機(jī)制保護(hù)細(xì)胞[10-12]。

急性胰腺炎一旦發(fā)生即可引起氧化應(yīng)激反應(yīng)基因的強(qiáng)烈上調(diào)，尤其是HO-1基因顯著上調(diào)最為顯著。

這表明機(jī)體具有對抗應(yīng)激的代償機(jī)制，然而胰腺的局部病變并未因此停止，原因在于對抗炎性介質(zhì)反應(yīng)的應(yīng)激基因表達(dá)難以拮抗和抑制大量釋放的促炎細(xì)胞因子基因表達(dá)[13]。

Lut作為一種天然抗氧化劑，已被多種體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)具有上調(diào)HO-1表達(dá)水平的功能[14]。

本實(shí)驗(yàn)通過口服不劑量的Lut進(jìn)而不同程度地提高了機(jī)體HO-1表達(dá)水平，Lut給藥組可呈劑量依賴性地顯示出對小鼠SAP的保護(hù)作用，主要表現(xiàn)為血清淀粉酶水平的降低，胰腺組織病理評分的降低以及胰腺濕重比的下降。

MDA是氧自由基引起細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，而過氧化脂質(zhì)是自由基與脂質(zhì)作用的產(chǎn)物，可間接映機(jī)體細(xì)胞受氧自由基攻擊的嚴(yán)重程度。

MPO作為衡量中性粒細(xì)胞浸潤程度的指標(biāo)，SAP時胰腺組織含量顯著增高，提示中性粒細(xì)胞浸潤增多。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Lut給藥組可呈劑量依賴性地降低胰腺組織MDA和MPO含量，提示Lut能夠在有效改善胰腺組織的抗氧化能力并減輕機(jī)體脂質(zhì)過氧化程度的同時減少胰腺組織中性粒細(xì)胞的浸潤，發(fā)揮對胰腺炎的保護(hù)作用。

在SAP的炎癥應(yīng)答過程中，致炎因子和氧化應(yīng)激產(chǎn)物發(fā)揮協(xié)同作用，觸發(fā)共同的信號傳導(dǎo)通路，主要通過NF-B的激活，導(dǎo)致了炎癥因子的級聯(lián)擴(kuò)增。

NF-B是以同或異二聚體形式存在的核轉(zhuǎn)錄因子。

通常，非激活狀態(tài)下，NF-B二聚體與其抑制蛋白IB非共價(jià)結(jié)合于胞漿內(nèi)以無活性形式存在。

許多因素通過激活一個或數(shù)個信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，導(dǎo)致IKB磷酸化、IB迅速泛素化，從NF-B/IB復(fù)合體中釋出。

NF-B活化并向核內(nèi)轉(zhuǎn)移，其活化形式是P65和P50組成的異二聚體[15]。

NF-B的激活可促進(jìn)TNF-的釋放，而TNF-的大量釋放又促進(jìn)IB的磷酸化使NF-B進(jìn)一步激活，導(dǎo)致最初的炎癥信號不斷放大，這是一類正反饋。

TNF-是SAP早期轉(zhuǎn)錄水平增加較早的炎癥因子，其升高可誘導(dǎo)IL-6、IL-8及其自身表達(dá)的增高，從而引起級聯(lián)反應(yīng)，造成炎性介質(zhì)的失控性釋放[16]。

此外TNF-還能促進(jìn)炎癥部位白細(xì)胞聚集和活化，活化的白細(xì)胞又可產(chǎn)生大量OFR。

因此，致炎因子特別是TNF-和氧化應(yīng)激的相互作用形成了一個惡性循環(huán)，是導(dǎo)致SAP的重要根源[6,17,18]。

目前研究表明，抑制氧化應(yīng)激可抑制NF-B活性，顯著減少TNF-等炎癥因子的合成和釋放，延緩緩急慢性炎癥的發(fā)展[19]。

IL-10作為體內(nèi)一種重要的抗炎因子，其可抑制TNF-、IL-2、IL-3等細(xì)胞因子的合成并可負(fù)反饋抑制NF-B的激活，對SAP所致多器官損傷有保護(hù)作用，在SAP早期機(jī)體開始釋放TNF-等促炎因子導(dǎo)致疾病惡化的同時，機(jī)體也開始釋放IL-10等抗炎細(xì)胞因子，但仍難以阻止全身過度炎性介質(zhì)反應(yīng)和胰腺壞死。

提高SAP狀態(tài)下抗炎細(xì)胞因子IL-10表達(dá)和抑制促炎細(xì)胞因子TNF-表達(dá)可緩解或阻斷胰腺的局部病變和SAP-7-所致的多器官功能衰竭[20,21]。

本研究顯示，口服給予不同劑量Lut致機(jī)體HO-1水平劑量依賴性高表達(dá)時，血清和胰腺組織中的IL-10含量也呈劑量依賴性增高，而NF-B、TNF-表220達(dá)水平卻相應(yīng)地降低。

由此推論，可能是HO-1提高IL-10表達(dá)抑制TNF-的釋放或者通過抑制NF-B的活化進(jìn)而抑制TNF-的釋放。

總之，本研究證實(shí)Lut對SAP小鼠模型的保護(hù)作用，其部分機(jī)制可能與Lut增高組織HO-1活力，降低氧化應(yīng)激水平、減少中心粒細(xì)胞浸潤、促進(jìn)抗炎因子IL-10的表達(dá)及抑制NF-B、TNF-表達(dá)有關(guān)。

盡管如此，Lut對SAP的保護(hù)作用仍需進(jìn)一步的理論與臨床論證。

225[參考文獻(xiàn)](References)[1]LopezMartinA,CarrilloAlcarazA.Oxidativestressandacutepancreatitis[J].RevEspEnfermDig2011;103:559-62.[2]Apodaca-TorrezFR,LoboEJ,MonteiroLM,deMeloGR,GoldenbergA,HeraniFilhoB,TrivinoT,LopesFilhoGdeJ.Severeacutepancreatitis:resultsoftreatment[J].RevColBrasCir2012;39:385-8.[3]ColC,DinlerK,HasdemirO,BuyukasikO,BugdayciG.Oxidativestressandlipidperoxidationproducts:effectofpinealectomyorexogenousmelatonininjectionsonbiomarkersoftissuedamageduringacutepancreatitis[J].HepatobiliaryPancreatDisInt2010;9:78-82.[4]KuoMY,LiaoMF,ChenFL,LiYC,YangML,LinRH,KuanYH.LuteolinattenuatesthepulmonaryinflammatoryresponseinvolvesabilitiesofantioxidationandinhibitionofMAPKandNFkappaBpathwaysinmicewithendotoxin-inducedacutelunginjury[J].FoodChemToxicol2011;49:2660-6.[5]WernerJ,HartwigW,HackertT,KaiserH,SchmidtJ,GebhardMM,BuchlerMW,KlarE.Multidrugstrategiesareeffectiveinthetreatmentofsevereexperimentalpancreatitis[J].Surgery2012;151:372-81.[6]EscobarJ,PeredaJ,ArduiniA,SandovalJ,SabaterL,AparisiL,Lopez-RodasG,SastreJ.Cross-talkbetweenoxidativestressandpro-inflammatorycytokinesinacutepancreatitis:akeyroleforproteinphosphatases[J].CurrPharmDes2009;15:3027-42.[7]EscobarJ,PeredaJ,ArduiniA,SandovalJ,MorenoML,PerezS,SabaterL,AparisiL,CassinelloN,HidalgoJ,JoostenLA,VentoM,Lopez-RodasG,SastreJ.Oxidativeandnitrosativestressinacutepancreatitis[J].Modulationbypentoxifyllineandoxypurinol.BiochemPharmacol2012;83:122-30.[8]BoothDM,MukherjeeR,SuttonR,CriddleDN.Calciumandreactiveoxygenspeciesinacutepancreatitis:friendorfoe[J]?AntioxidRedoxSignal2011;15:2683-98.[9]YuberoS,RamudoL,MansoMA,DeDiosI.Theroleofredoxstatusonchemokineexpressioninacutepancreatitis[J].BiochimBiophysActa2009;1792:148-54.[10]ParkEJ,KimYM,ParkSW,KimHJ,LeeJH,LeeDU,ChangKC.InductionofHO-1throughp38MAPK/Nrf2signalingpathwaybyethanolextractofInulaheleniumL.reducesinflammationinLPS-activatedRAW264.7cellsandCLP-inducedsepticmice[J].FoodChemToxicol2013.[11]NusslerAK,HaoL,KnobelochD,YaoP,NusslerNC,WangZ,LiuL,EhnertS.ProtectiveroleofHO-1foralcohol-dependentliverdamage[J].DigDis2010;28:792-8.[12]BellezzaI,TucciA,GalliF,GrottelliS,MierlaAL,PilolliF,MinelliA.InhibitionofNF-kappaBnucleartranslocationviaHO-1activationunderliesalpha-tocopherylsuccinatetoxicity[J].JNutrBiochem2012;23:1583-91.[13]HabtezionA,KwanR,YangAL,MorganME,AkhtarE,WanaskiSP,CollinsSD,ButcherEC,KamalA,OmaryMB.Hemeoxygenase-1isinducedinperipheralbloodmononuc