il-10在子宮腺肌病種植窗期在位內(nèi)膜的表達(dá)與子宮腺肌病內(nèi)膜容受性的關(guān)系

1/1il-10在子宮腺肌病種植窗期在位內(nèi)膜的表達(dá)與子宮腺肌病內(nèi)膜容受性的關(guān)系IL-10在子宮腺肌病種植窗期在位內(nèi)膜的表達(dá)與子宮腺肌病內(nèi)膜容受性的關(guān)系【摘要】目的：

分析IL-10在子宮腺肌病患者在位內(nèi)膜種植窗期的表達(dá)，探討子宮腺肌病患者內(nèi)膜容受性下降的免疫學(xué)因素。

方法：

分別取子宮腺肌病、非腺肌病患者在自然周期種植窗期的內(nèi)膜組織。

子宮腺肌病患者18例，對(duì)照組16例，采用免疫組化SP法檢測(cè)內(nèi)膜組織中IL-10的表達(dá)。

結(jié)果：

IL-10在腺肌病患者內(nèi)膜腺體和間質(zhì)的表達(dá)較非腺肌病患者減弱（P0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)論：

子宮腺肌病患者在位內(nèi)膜中具有妊娠保護(hù)作用的IL-10表達(dá)減低，推測(cè)IL-10的表達(dá)降低是導(dǎo)致子宮腺肌病患者內(nèi)膜容受性下降的免疫學(xué)因素。

【關(guān)鍵詞】子宮腺肌??；在位內(nèi)膜；IL-10；內(nèi)膜容受性RelationshipbetweenexpressionofIL-10duringthewindowofimplationineutopicendometriumofadenomyosisonendometrialreceptivityofadenomyosis[Abstract]Obejective：

ToanalyzetheexpressionofIL-10duringthewindowofimplationineutopicendometriumofadenomyosis，Tryingtoinvestigatethemechanismofdecreasingendometrialreceptivityofadenomyosisintheimmunologicalview.Methods：

Theeutopicendometriumwasobtainedfromtwogroupsofadenomyosisandnon-adenomyosisduringthewindowofimplationinnaturalcycleinvolving18patientsofadenomyosisand16patientsofnon-adenomosis.IL-10weredetectedbyimmunohistochemistriySPmethod.Results：

theexpressionofIL-10wasexpressedweaklyontheendometriumofadenomyosisthannon-adenomyosis（P0.05）.Conclusion：

TherearedecreasingexpressionofIL-10intheeutopicendometriumofadenomyosis，whichpromotingthepregnancy.TheweakerexpressionofIL-10mayplayanimportantroleonthedecreasingendometriumreceptivityofadenomyosis.[Keywords]Adenomyosis；eutopicendometrium；IL-10；endometrialreceptivity子宮腺肌?。ˋdenomyosis，AM）指子宮內(nèi)膜腺體及間質(zhì)侵入子宮肌層。

AM好發(fā)于30～50歲的育齡婦女，發(fā)病率從8.8%～31%不等[1]。

傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為AM好發(fā)于經(jīng)產(chǎn)婦、并有多次刮宮史的30～50歲之間的婦女。

隨著現(xiàn)代社會(huì)的發(fā)展，更多的女性選擇在她們35～45歲之間生育，生育年齡的推后使得不孕婦女中AM在育齡婦女中的發(fā)病率明顯增加，已經(jīng)成為影響生育以及助孕治療結(jié)果的重要因素。

有文獻(xiàn)認(rèn)為1/3因AM不孕女性因癥狀不明顯而未能得到及時(shí)診斷[2]。

AM主要影響子宮內(nèi)膜容受性從而導(dǎo)致胚胎種植失敗，其涉及的機(jī)制目前不十分清楚，有學(xué)者提出可能與子宮內(nèi)膜干細(xì)胞功能紊亂、內(nèi)膜-肌層界面破壞及內(nèi)膜局部免疫環(huán)境的改變有關(guān)。

本文通過(guò)檢測(cè)子IL-10在子宮腺肌病患者種植窗期在位內(nèi)膜的表達(dá)特征，尋找子宮腺肌病患者內(nèi)膜容受性下降的免疫學(xué)因素。

1研究方法1.1研究對(duì)象2012年2月至2012年12月在上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬蘇州九龍醫(yī)院就診的因子宮腺肌病不孕患者18例為研究組，同期因輸卵管因素或男方因素不孕的16例為對(duì)照組，患者年齡在21～38歲，月經(jīng)規(guī)律，取內(nèi)膜前3月未用過(guò)激素治療，排除標(biāo)準(zhǔn)：

女方合并有子宮肌瘤、多囊卵巢綜合癥、輸卵管積水、子宮內(nèi)膜息肉、子宮畸形、既往有盆腔結(jié)核史、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)病史者、染色體異常及自身免疫性疾病。

1.1.2子宮腺肌病診斷AM患者診斷標(biāo)準(zhǔn)：

a.痛經(jīng)；b.血清CA12535IU/L；c.經(jīng)陰道彩色超聲下，子宮增大呈球形，肌層增厚，回聲增強(qiáng)粗糙不均，病灶與周?chē)M織界限欠清，病灶內(nèi)有散在分布的小液性暗區(qū)，CDFI可檢出短條狀或稀疏點(diǎn)狀血流信號(hào)，伴或不伴內(nèi)膜線移位。

同時(shí)符合以上三項(xiàng)中的兩項(xiàng)者診斷為AM。

1.2標(biāo)本收集及方法1.2.1入組患者均于月經(jīng)D2-4天抽靜脈血測(cè)基礎(chǔ)性激素（FSH、LH、E2、P），CA125。

1.2.2內(nèi)膜收集：

兩組患者分別于月經(jīng)周期排卵后6～7天種植窗期行內(nèi)膜活檢。

患者均簽署知情同意，且經(jīng)過(guò)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬蘇州九龍醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意認(rèn)證許可。

取內(nèi)膜用S型宮腔組織吸引管（購(gòu)自上海計(jì)劃生育研究所）吸取少許內(nèi)膜，每份內(nèi)膜以無(wú)菌生理鹽水洗凈后分2管，置于4%多聚甲醛固定。

1.3研究方法1.3.1抗體來(lái)源：

IL-10（武漢博士德公司）一抗兔抗人IL-10多克隆抗體，二抗羊抗兔IgG抗體。

1.3.2標(biāo)本制作：

手術(shù)取出子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本，直接置于4%多聚甲醛（PFA）、4℃固定16h，經(jīng)磷酸鹽緩沖液（PBS）洗3次，每次5min，乙醇脫水，石蠟包埋，經(jīng)石蠟切片機(jī)切片，切片厚度為5um。

1.3.3免疫組化分析：

參照試劑盒提供的方法，分別進(jìn)行免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)，脫蠟、抗原修復(fù)、染色、顯色、封片，由2人進(jìn)行雙盲觀察，全面觀察每張切片，以細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。

隨機(jī)選擇5個(gè)具有代表性的高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，取平均數(shù)作為該病例的最終結(jié)果。

以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例分為：

陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)50%（+++）；根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例及相應(yīng)染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分pi（i：

細(xì)胞漿染色強(qiáng)度），i為0、1、2、3時(shí)分別表示陰性（無(wú)著色細(xì)胞）、弱陽(yáng)性（淺棕黃色）、陽(yáng)性（棕黃色）、強(qiáng)陽(yáng)性（深棕黃色）；p代表同一染色強(qiáng)度細(xì)胞所占計(jì)數(shù)細(xì)胞百分比，1、2、3、4、5分別表示染色細(xì)胞所占計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)的0%～15%、16%～50%、（上接至第6頁(yè)）3.3ER、PR與子宮腺肌病內(nèi)膜容受性的關(guān)系目前國(guó)內(nèi)外統(tǒng)一的觀點(diǎn)認(rèn)為雌激素在AM的發(fā)病中起重要作用，AM患者子宮內(nèi)膜局部雌激素水平較高。

本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)在位內(nèi)膜ER和PR，ER在內(nèi)膜腺體中表達(dá)AM組較非AM組增強(qiáng)，P0.05。

子宮腺肌病患者內(nèi)膜容受性主要受到卵巢分泌的雌激素（E2）和孕酮（P）的調(diào)控。

有研究者報(bào)道，在兔子和人中，雌激素并不是胚胎著床必須的，P單獨(dú)作用就能啟動(dòng)著床過(guò)程[7]。

但有研究表明，對(duì)于那些不依賴于卵巢分泌的E2的動(dòng)物中，其子宮和胚胎可以從頭合成E2，提示E2對(duì)哺乳動(dòng)物的胚胎著床都是必須的[8]。

而雌激素水平過(guò)高，內(nèi)膜腺體與間質(zhì)脫膜化發(fā)育不同步，胚胎不能正常著床，推測(cè)可能引起AM患者內(nèi)膜容受性下降，在本實(shí)驗(yàn)中ER與IL-10的在內(nèi)膜的表達(dá)具一致性，提示IL-10可能也受E2的調(diào)控。

本研究通過(guò)比較IL-10在內(nèi)膜中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)子宮腺肌病患者在位內(nèi)膜中具有妊娠保護(hù)作用的IL-10的表達(dá)減弱，改變局部免疫環(huán)境，可能是致子宮內(nèi)膜容受性下降，胚胎不能成功著床的原因之一。

對(duì)子宮腺肌病患者在位內(nèi)膜中IL-10的研究，有助于進(jìn)一步明確子宮腺肌病患者內(nèi)膜容受性下降的原因，同時(shí)采取針對(duì)相應(yīng)的處理方針，為子宮腺肌病患者內(nèi)膜容受性改善提供免疫治療方法。

51～85%、86～95%、96%～100%。

1.3.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，劑量資料組間比較用t檢驗(yàn)，率的比較用卡方檢驗(yàn)。

檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05.2結(jié)果2.1兩組患者基本情況兩組比較年齡、BMI、基礎(chǔ)性激素、取內(nèi)膜日內(nèi)膜厚度等無(wú)顯著性差異（P0.05）。

痛經(jīng)、CA125升高比率，AM組較對(duì)照組明顯升高，P0.05（見(jiàn)表1）。

2.2IL-10在兩組患者內(nèi)膜表達(dá)情況IL-10在AM組內(nèi)膜腺體和間質(zhì)的表達(dá)較非AM組減弱，P0.05，IL-10表達(dá)于內(nèi)膜腺體和間質(zhì)細(xì)胞胞漿；（見(jiàn)表2、圖1及圖2）。

2.3雌孕激素受體（ER、PR）表達(dá)的分布ER主要表達(dá)于內(nèi)膜腺體，PR主要表達(dá)于內(nèi)膜間質(zhì)中，ER在AM組內(nèi)膜腺體中的表達(dá)較非AM組增強(qiáng)，P0.05。

（見(jiàn)表2）3討論3.1IL-10在子宮腺肌病在位內(nèi)膜的表達(dá)白細(xì)胞介素-10（IL-10）是一種公認(rèn)的介導(dǎo)免疫抑制的細(xì)胞因子，產(chǎn)生于Th2輔助細(xì)胞，抑制Th1細(xì)胞應(yīng)答及其細(xì)胞因子合成，同時(shí)抑制M的抗原提呈功能及其細(xì)胞因子合成，促進(jìn)B細(xì)胞增殖分化及抗體產(chǎn)生。

2009年FeiWang[3]選取34例因子宮腺肌病切除子宮的在位及異位內(nèi)膜和30例已生育者的正常內(nèi)膜，通過(guò)免疫組化檢測(cè)IL-10，發(fā)現(xiàn)IL-10在腺肌病患者在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜表達(dá)顯著升高，并在分泌期升高明顯，與郎景和教授的子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)理一致，認(rèn)為IL-10通過(guò)免疫抑制機(jī)制使在位內(nèi)膜通過(guò)薄弱的基底層侵入肌層，異位內(nèi)膜逃避機(jī)體免疫攻擊，使得異位病灶不能及時(shí)清除，從而持續(xù)生長(zhǎng)。

2012年XiaoyanQin[4]通過(guò)免疫組化檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)子宮腺肌病患者在位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞IL-10R1表達(dá)增高，而無(wú)IL-10R2表達(dá)，子宮腺肌病患者異位病灶處腺上皮細(xì)胞IL-10R1和IL-10R2表達(dá)均顯著升高，進(jìn)一步論證了IL-10和IL-10R相互作用，在子宮局部產(chǎn)生的免疫耐受，使得異位病灶逃避宿主免疫監(jiān)視，并在肌層生長(zhǎng)，與子宮腺肌病發(fā)病密切相關(guān)。

該論點(diǎn)認(rèn)為IL-10在子宮的表達(dá)并維持的免疫抑制作用，使得異位病灶在腹腔或子宮肌層不能被機(jī)體宿主及時(shí)清除，從而形成了子宮內(nèi)膜異位癥或子宮腺肌病。

而成功的妊娠是一個(gè)免疫矛盾，一方面胎兒抗原不能作為半同種移植物被母體識(shí)別，另一方面為了在母體中生存，胎兒抗原又必須呈遞給母體，被母體接受。

因此，胎兒抗原的免疫識(shí)別對(duì)于維持妊娠極為重要，識(shí)別不足將可能導(dǎo)致種植失敗和復(fù)發(fā)性流產(chǎn)[5]。

IL-10在子宮內(nèi)膜表達(dá)不足引起免疫耐受抑制，胚胎不能成功著床，導(dǎo)致種植失敗及早期流產(chǎn)。

本實(shí)驗(yàn)證實(shí)子宮腺肌病患者和非腺肌病患者種在位內(nèi)膜均表達(dá)IL-10，子宮腺肌病患者表達(dá)減弱，推測(cè)IL-10在子宮腺肌病患者內(nèi)膜的表達(dá)缺陷是其不孕的原因之一。

3.2IL-10與子宮腺肌病內(nèi)膜容受性的關(guān)系大量的研究認(rèn)為IL-10是主要的抗炎癥因子之一，在很多的慢性疾病及腫瘤相關(guān)性疾病中充當(dāng)重要角色。

而來(lái)自于子宮的IL-10，在人類(lèi)的HLA抗原識(shí)別上具有兩個(gè)作用，在胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞誘導(dǎo)人類(lèi)HLA抗原產(chǎn)生，下調(diào)經(jīng)典的I類(lèi)和II類(lèi)抗原形成，從而誘導(dǎo)免疫耐受使胎兒免于母體排斥。

2002年Vigano[6]等通過(guò)選擇性人工流產(chǎn)的脫膜細(xì)胞和非孕期子宮內(nèi)膜體外培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)人類(lèi)子宮內(nèi)膜表達(dá)IL-10和IL-10受體，妊娠早期脫膜組織較非妊娠期內(nèi)膜組織中IL-10明顯上升，認(rèn)為IL-10是成功妊娠的標(biāo)志。

而子宮內(nèi)膜容受性是指子宮具有接受并容納活性胚胎，并成功建立妊娠的能力。

子宮內(nèi)膜進(jìn)入接受態(tài)是胚胎在子宮內(nèi)膜中定位、黏附、侵入并成功著床的關(guān)鍵。

種植窗期是指子宮內(nèi)膜只在特定的一段時(shí)期內(nèi)對(duì)胚胎具有接受性。

此時(shí)期是子宮內(nèi)膜接受性達(dá)到最高的時(shí)期，胚胎能夠成功著床。

在人類(lèi)，種植窗期發(fā)生于正常月經(jīng)周期排卵后6～8天，子宮內(nèi)膜受到激素、細(xì)胞因子、黏附分子、microRNA等多種因素調(diào)節(jié)，發(fā)生一系列變化，從而具備接受胚泡著床的能力。

本實(shí)驗(yàn)選取子宮腺肌病和非腺肌病患者種植窗期內(nèi)膜組織，結(jié)果證實(shí)IL-10在腺肌病患者在位內(nèi)膜腺體和間質(zhì)的表達(dá)較對(duì)照組明顯下降，提示子宮內(nèi)膜局部免疫耐受下降，這可能是導(dǎo)致胚胎不能成功著床，妊娠率下降的原因之一。

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