第三節(jié) DNA復(fù)制課件

第三節(jié)DNA復(fù)制（Replication

）第三節(jié)-2DNA-復(fù)制DNA做為遺傳物質(zhì)的基本特點(diǎn)就是在細(xì)胞分裂前進(jìn)行準(zhǔn)確地自我復(fù)制(selfreplication)DNA的復(fù)制（replication）是指以原來的DNA分子為模板合成出相同的DNA分子的過程。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制遺傳物質(zhì)傳遞的穩(wěn)定性和精確性第三節(jié)-2DNA-復(fù)制第三節(jié)-2DNA-復(fù)制DNA復(fù)制的完成是細(xì)胞分裂的觸發(fā)點(diǎn)，復(fù)制后的基因組被平均分配到兩個子細(xì)胞中去。細(xì)胞周期調(diào)控基因控制DNA的復(fù)制并觸發(fā)細(xì)胞分裂。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制一、半保留復(fù)制（semioconservetivemodel）的驗(yàn)證半保留模型全保留復(fù)制模型分散模型第三節(jié)-2DNA-復(fù)制中國科學(xué)院上海生化與細(xì)胞所2002年招收碩士研究生分子遺傳學(xué)入學(xué)考試：請?jiān)O(shè)計(jì)一個實(shí)驗(yàn)來證明DNA復(fù)制是以半保留方式進(jìn)行的（8分）。MatthewMesselsonFranklinStahl第三節(jié)-2DNA-復(fù)制“Heavy”DNA“Hybrid”

DNA“l(fā)ight”DNA“Hybrid”DNA15N,大腸桿菌1、驗(yàn)證第三節(jié)-2DNA-復(fù)制2、定義：3、DNA半保留復(fù)制的生物學(xué)意義：DNA的半保留復(fù)制在保持生物物種遺傳的穩(wěn)定性方面起著重要的作用，保證親代的遺傳信息穩(wěn)定地傳遞給后代。

半保留復(fù)制：DNA在復(fù)制時，以親代DNA的每一股鏈作模板，合成完全相同的兩個雙鏈子代DNA，每個子代DNA中都含有一股親代DNA鏈，這種現(xiàn)象稱為DNA的半保留復(fù)制。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制二、復(fù)制起點(diǎn)方向和速度1、復(fù)制起始點(diǎn)：DNA復(fù)制是叢DNA分子的特定位置開始的，這一位置叫復(fù)制原點(diǎn)（復(fù)制起始點(diǎn)）（用ori表示）。是由一些具有特定核苷酸排列順序的片段組成。富含A-T。上海生化所1998年分子遺傳學(xué)試題：真核生物復(fù)制起始點(diǎn)的特征包括（）A富含GC區(qū)B富含AT區(qū)CZDNAD無明顯特征第三節(jié)-2DNA-復(fù)制2、復(fù)制叉（Replicationfork）：染色體中參與復(fù)制的活性區(qū)域，即復(fù)制正在發(fā)生的位點(diǎn)復(fù)制眼（replicationeye）：電子顯微鏡下觀察正在復(fù)制的DNA，復(fù)制的區(qū)域形如一只眼睛復(fù)制叉復(fù)制叉第三節(jié)-2DNA-復(fù)制從復(fù)制原點(diǎn)到終點(diǎn)，組成一個能夠獨(dú)立進(jìn)行復(fù)制的DNA復(fù)制單位叫復(fù)制子3、復(fù)制子（replicon）

：原核生物只有一個復(fù)制原點(diǎn)，整個染色體只有一個復(fù)制單位。最大的復(fù)制子是大腸桿菌。真核生物有多個復(fù)制其始點(diǎn)，因此是多復(fù)制子。每個復(fù)制子在每一次細(xì)胞循環(huán)中只啟動一次。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制復(fù)制方向（復(fù)制過程的順序性）：大多數(shù)雙向進(jìn)行，也有一些單向的，或以不對稱的雙向方式進(jìn)行的。單雙向復(fù)制取決于起點(diǎn)處有一個還是兩個復(fù)制叉4、復(fù)制方向和速度：第三節(jié)-2DNA-復(fù)制DNA復(fù)制在細(xì)胞周期的S期DNA復(fù)制速率：大腸桿菌850/s/復(fù)制叉；人60~90/s整個基因組復(fù)制需要時間：大腸桿菌30分鐘；人8小時。細(xì)胞分裂需要時間：大腸桿菌約20分鐘，人24小時。復(fù)制速度：等速第三節(jié)-2DNA-復(fù)制5、復(fù)制方式1)θreplication（lookslikeatheta）雙向等速的復(fù)制方式：大腸桿菌基因組的復(fù)制第三節(jié)-2DNA-復(fù)制（1）共價延伸：親本鏈的3-OH發(fā)生DNA聚合；3)滾環(huán)復(fù)制1968年Gilbert提出模型:（2）不需RNA引物，在正鏈3‘－OH上延伸（3）模板鏈和新合成的鏈分開;（4）只有一個復(fù)制叉;（5）形成多聯(lián)體（concatemer）單向復(fù)制的特殊方式第三節(jié)-2DNA-復(fù)制第三節(jié)-2DNA-復(fù)制真核rDNA的擴(kuò)增,F因子DNA的轉(zhuǎn)移,λ噬菌體裂解途經(jīng)的復(fù)制,φX174,M13，G4等。單鏈環(huán)狀DNA噬菌體第二階段復(fù)制都是進(jìn)行滾環(huán)復(fù)制的.哪些DNA進(jìn)行滾環(huán)復(fù)制第三節(jié)-2DNA-復(fù)制2)Dloop單向復(fù)制，而且只復(fù)制一條鏈如：動物線粒體DNA第三節(jié)-2DNA-復(fù)制圖5-10

DNA鏈生長方向的三種機(jī)制第三節(jié)-2DNA-復(fù)制三、原核生物DNA復(fù)制的特點(diǎn)一）雙鏈解開、復(fù)制起始245bp,稱為oriC，由3個13-聚體和4個9-聚體組成。富含A－T1、復(fù)制起始點(diǎn)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)第三節(jié)-2DNA-復(fù)制大腸桿菌DNA復(fù)制起始點(diǎn)結(jié)構(gòu)第三節(jié)-2DNA-復(fù)制大約20個DnaA蛋白在ATP的作用下與oriC處的4個9bp保守序列相結(jié)合第三節(jié)-2DNA-復(fù)制在HU蛋白和ATP的共同作用下,Dna復(fù)制起始復(fù)合物使3個13bp直接重復(fù)序列變性,形成開鏈第三節(jié)-2DNA-復(fù)制解鏈酶六體分別與單鏈DNA相結(jié)合(需DnaC幫助),進(jìn)一步解開DNA雙鏈第三節(jié)-2DNA-復(fù)制第三節(jié)-2DNA-復(fù)制大腸桿菌復(fù)制原點(diǎn)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是：（1）位于天冬酰氨合成酶和ATP合成酶操縱子間，共245bp，稱為oriC。富含A－T，這可能和雙鏈易于解開起始復(fù)制有關(guān)；（3）DnaA蛋白識別并結(jié)合9bp的重復(fù)單位形成復(fù)合物，使13bp的重復(fù)單位溶解而形成開放復(fù)合物。（2）含有兩個系列的重復(fù)單位：3個13bp的重復(fù)序列（回文序列，3個GATC較保守）4個9bp的重復(fù)序列（反向重復(fù)順序，作為蛋白結(jié)合位點(diǎn)）（4）DnaB進(jìn)入溶解區(qū)，使DNA雙向溶解形成兩個復(fù)制叉，并使引物酶RNA聚合酶進(jìn)入?yún)⑴c先導(dǎo)鏈的合成。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制1)解鏈酶(helicase)又稱解螺旋酶（unwindingenzyme）是用于解開DNA雙鏈的酶蛋白，每解開一對堿基，需消耗兩分子ATP。2、復(fù)制起始點(diǎn)的酶第三節(jié)-2DNA-復(fù)制生物體含有多種解螺旋具有ATPase活力分離1個堿基度對，消耗2個ATP特性不同，移動的極性也不同：Dna蛋白沿5‘

－3’方向移動，PriA,Rep蛋白沿3‘－5’方向移動。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制2）單鏈結(jié)合蛋白又稱雙螺旋去穩(wěn)定蛋白,在E.coli中以四聚存在結(jié)合DNA單鏈，穩(wěn)定單鏈DNA，使DNA保持伸展的構(gòu)像，可以重復(fù)使用。保護(hù)單鏈DNA，避免核酸酶的降解。在原核中SSB與DNA結(jié)合表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)。1）SSB之間的相互作用；2）第一個SSB和DNA的結(jié)合改變了DNA的結(jié)構(gòu)。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制3）拓?fù)洚悩?gòu)酶（topoisomerase）：催化DNA由一種拓?fù)洚悩?gòu)體轉(zhuǎn)變成另一種拓?fù)洚悩?gòu)體的酶類

拓?fù)洚悩?gòu)酶的類別和特性被切割的DNA鏈1122對ATP的需求否否是是依賴于DNA的ATP酶否否是是產(chǎn)生負(fù)超螺旋否否是否松弛負(fù)超螺旋是是否是松弛正超螺旋否是是是性質(zhì)Ⅰ型Ⅱ型原核生物原核生物真核生物真核生物第三節(jié)-2DNA-復(fù)制拓?fù)洚悩?gòu)酶I拓?fù)洚悩?gòu)酶II大腸桿菌真核生物大腸桿菌真核生物切口數(shù)切開一股DNA鏈切開一股DNA鏈切開二股DNA鏈切開二股DNA鏈?zhǔn)欠褚蕾嘇TP否否依賴ATP依賴ATP作用松馳負(fù)超螺旋松馳正，負(fù)超螺旋構(gòu)馳正超螺旋、引入負(fù)超螺旋和解環(huán)連等松弛正超螺旋但不能引入負(fù)超螺旋表5-1大腸桿菌和真核生物中的拓?fù)洚悩?gòu)酶第三節(jié)-2DNA-復(fù)制結(jié)合到一條鏈上形成復(fù)合物切斷一條鏈形成酶和蛋白的復(fù)合體共價連接Tyrosine-5’P一條鏈穿越重新連接L=2L=3

拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ

(topoisomeraseI)

第三節(jié)-2DNA-復(fù)制圖2-21拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ的作用機(jī)制第三節(jié)-2DNA-復(fù)制

拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ－TopII引入負(fù)超螺旋作用于雙鏈：涉及雙鏈的斷裂和連接－－每次使DNA的連接數(shù)改變2第三節(jié)-2DNA-復(fù)制拓?fù)洚悩?gòu)酶的生物學(xué)功能

b、防止細(xì)胞DNA的過度超螺旋多種拓?fù)洚悩?gòu)酶的作用嚴(yán)格控制體內(nèi)負(fù)超螺旋。維持在5%水平。a、恢復(fù)由一些細(xì)胞過程產(chǎn)生的超螺旋如：復(fù)制叉前面正超的消除，轉(zhuǎn)錄酶前正超的消除第三節(jié)-2DNA-復(fù)制4）DNA連接酶

所需條件：a、切刻的3’－OH和5’－P相鄰b、切刻各自堿基處于配對狀態(tài)c、需要能量。原核（ATP、NAD）、真核（ATP）用途：復(fù)制過程中，5’

端RNA引物被置換后切刻的連接、重組.第三節(jié)-2DNA-復(fù)制預(yù)引發(fā)：解旋解鏈，形成復(fù)制叉：參與的因素有兩個：復(fù)制原點(diǎn)的特異性結(jié)構(gòu)；另一個是識別這些結(jié)構(gòu)的特異性的蛋白質(zhì)因子。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制引發(fā)酶：它是一種特殊的RNA聚合酶，可催化短片段RNA的合成。這種短RNA片段一般十幾個至數(shù)十個核苷酸不等，它們在DNA復(fù)制起始處做為引物。RNA引物的3′-OH末端提供了由DNA聚合酶催化形成DNA分子第一個磷酸二酯鍵的位置。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制參與DNA復(fù)制的DNA聚合酶，必須以一段具有3’端自由羥基（3’-OH）的RNA作為引物(primer)，才能開始聚合子代DNA鏈。RNA引物的大小：原核生物為50～100個核苷酸，真核生物約為10個核苷酸。RNA引物的堿基順序，與其模板DNA的堿基順序相配對。RNA引物的合成二）DNA復(fù)制的引發(fā)引發(fā)體組裝：n、n`、n``、DnaB、C、和引發(fā)酶組成。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制基因組DNA復(fù)制時，先導(dǎo)鏈的引物是DNA，后隨鏈的引物是RNA(-)

2002年上海生化與細(xì)胞所為了解釋DNA的等速復(fù)制現(xiàn)象,日本學(xué)者岡崎(Okazaki)等提出了DNA的半不連續(xù)復(fù)制模型(semi-discontinuousreplication)

.第三節(jié)-2DNA-復(fù)制三）原核生物DNA復(fù)制延伸DNA聚合酶的共同特點(diǎn)是：（1）需要提供合成模板；（2）不能起始新的DNA鏈，必須要有引物提供3'－OH；（3）合成的方向都是5‘→3’（4）除聚合DNA外還有其它功能。1、DNA聚合酶

DNA聚合酶Ⅰ（polⅠ），DNA聚合酶Ⅱ（polⅡ），DNA聚合酶Ⅲ（polⅢ），這三種酶都屬于具有多種酶活性的多功能酶。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制

DNApolⅠDNApolⅡDNApolⅢ結(jié)構(gòu)分子量

109KD90KD900KD構(gòu)成

單體單體異多聚體分子數(shù)/細(xì)胞

400？10-20酶活性：5→3`聚合酶

+++3`→5`外切酶

+++5`→3`外切酶

+－－(可切單鏈)突變體突變位點(diǎn)polApolBpolC(dnaE),dnaN,dnaZX,dnaQ,dnaT突變表型修復(fù)有缺陷能修復(fù)阻止復(fù)制第三節(jié)-2DNA-復(fù)制a、DNA聚合酶I：

polⅠ為單一肽鏈的大分子蛋白質(zhì),可被特異的蛋白酶水解為兩個片段，其中的大片段稱為Klenowfragment，1）5‘→3’聚合功能：

2）3‘→5’外切活性：未配對3-末端核苷酸，校對功能

3）5‘→3’外切活性：切口雙鏈5-端

(1)切口平移（nicktranslation）；

(2)鏈的置換；

(3)模板轉(zhuǎn)換（template-switching）4）內(nèi)切酶活性主要生理功能是DNA的修復(fù)，保證DNA復(fù)制的準(zhǔn)確性第三節(jié)-2DNA-復(fù)制5‘→3’聚合功能第三節(jié)-2DNA-復(fù)制3‘→5’外切活性第三節(jié)-2DNA-復(fù)制第三節(jié)-2DNA-復(fù)制DNApolⅠ的5’－3’外切活性有以下三個特點(diǎn)：?必須有5’－磷酸末端?被除去的核苷酸必須是已經(jīng)配對的?被除去的可以是脫氧核糖核苷酸(1)切口平移（nicktranslation）；(2)鏈的置換；(3)模板轉(zhuǎn)換（template-switching）5‘→3’外切活性：第三節(jié)-2DNA-復(fù)制為了保證遺傳的穩(wěn)定，DNA的復(fù)制必須具有忠實(shí)性。1．遵守嚴(yán)格的堿基配對規(guī)律；

2．DNA聚合酶在復(fù)制時對堿基的正確選擇；

3．對復(fù)制過程中出現(xiàn)的錯誤及時進(jìn)行校正。復(fù)制忠實(shí)性的保證1、DNApol的3’5’外切酶活性2、DNApol只能從引物的3’

端延伸DNA

（需要RNA引物）a、堿基配對協(xié)同性導(dǎo)致最初幾個堿基錯配率高，且不易校正b、RNA引物最終被降解而避免錯誤3、后隨鏈的不連續(xù)合成。因其有利于錯配堿基的校正第三節(jié)-2DNA-復(fù)制b、polⅢ由十種亞基組成，其中α亞基具有5'→3'聚合DNA的酶活性，因而具有復(fù)制DNA的功能；而ε亞基具有3'→5'外切酶的活性，因而與DNA復(fù)制的校正功能有關(guān)。

第三節(jié)-2DNA-復(fù)制2、DNA鏈的延伸過程DNA的半不連續(xù)復(fù)制（semi-discontinuousreplication)1）DNA復(fù)制時其中一條子鏈的合成是連續(xù)的，而另一條子鏈的合成是不連續(xù)的，故稱半不連續(xù)復(fù)制。2）在DNA復(fù)制時，合成方向與復(fù)制叉移動的方向一致并連續(xù)合成的鏈為前導(dǎo)鏈(leadingstrand)

；3）合成方向與復(fù)制叉移動的方向相反，形成許多不連續(xù)的片段，最后再連成一條完整的DNA鏈為滯后鏈laggingstrand)

。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制圖5-7

DNA的半不連續(xù)復(fù)制

第三節(jié)-2DNA-復(fù)制4）在DNA復(fù)制過程中，前導(dǎo)鏈能連續(xù)合成，而滯后鏈只能是斷續(xù)的合成5

3

的多個短片段，這些不連續(xù)的小片段稱為岡崎片段(Okazakifragment)

。岡崎片段，在原核生物中約為1000～2000個核苷酸，而在真核生物中約為100個核苷酸。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制前導(dǎo)鏈和后隨鏈的協(xié)同合成鏈的延伸第三節(jié)-2DNA-復(fù)制第三節(jié)-2DNA-復(fù)制武漢大學(xué)2003年碩士研究生入學(xué)分子生物學(xué)試題：Replicon、

semi-conservativereplication

華中科技大學(xué)2004年生物化學(xué)與分子生物學(xué)碩士研究生入學(xué)試題名詞解釋：岡崎片段（3分）第三節(jié)-2DNA-復(fù)制第三節(jié)-2DNA-復(fù)制四、復(fù)制終止a、終止序列：每次復(fù)制時只使用一個終止位點(diǎn)b、專一性終止蛋白：E.coli中由tusgene編碼，通過抑制DNA螺旋酶而發(fā)揮終止作用。E.coli有兩個終止區(qū)域，分別結(jié)合專一性終止蛋白

序列一：terEterDterA

序列二：terFterBterC每個區(qū)域只對一個方向的復(fù)制叉起作用第三節(jié)-2DNA-復(fù)制第三節(jié)-2DNA-復(fù)制DNA生物合成過程第三節(jié)-2DNA-復(fù)制五、真核生物復(fù)制特點(diǎn)第三節(jié)-2DNA-復(fù)制酵母中約含400個復(fù)制子，每一個約36kb第三節(jié)-2DNA-復(fù)制ARS分為A,B,C三個功能區(qū)。A區(qū)為15bp,其中11個保守，稱ACS

。起始蛋白的結(jié)合位點(diǎn)B區(qū)約為80bp,含B1,B2,B3三個功能區(qū)，富含AT，是DNA溶解區(qū)。B3是ABF1（轉(zhuǎn)錄因子）結(jié)合區(qū)，1、酵母的自主復(fù)制區(qū)（ARS）150bp，發(fā)揮復(fù)制起點(diǎn)的功能。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制起始點(diǎn)識別復(fù)合物ORC(originrecognizingcomplex)：Cdc6:相當(dāng)于DnaC,使Mcm蛋白結(jié)合到復(fù)合體上。此對在Origin上起始復(fù)制是必須的。Mcm:DnaB螺旋酶。ABF1（轉(zhuǎn)錄因子）結(jié)合于B3由6個亞基組成相當(dāng)于DnaA，與A/B1結(jié)合，結(jié)合于游離的DNA

第三節(jié)-2DNA-復(fù)制

2、真核生物的DNA聚合酶

位置核內(nèi)核內(nèi)核內(nèi)核內(nèi)

線粒體

合成

與引發(fā)修復(fù)合成合成,修復(fù)復(fù)制功能酶結(jié)合前導(dǎo)鏈后隨鏈3’－5’校NONOYesYesYes正活性

α

β

δ

ε

γα(alpha).β(beta).γ(gamma).δ(delta).ε(epsilon)五種聚合酶a可能是引物酶，聚合酶δ

可能是前導(dǎo)鏈和后隨鏈的復(fù)制酶，二者可能是整個復(fù)制酶的兩個組分。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制

真核細(xì)胞在DNA復(fù)制中起主要作用的是DNApolα，主要負(fù)責(zé)染色體DNA的復(fù)制。DNApolβ的模板特異性是具有缺口的DNA分子，被認(rèn)為它與DNA修復(fù)有關(guān)。DNApolγ在線粒體DNA的復(fù)制中起作用。DNApolδ不但有5′→3′聚合活性，而且還具有3′→5′外切酶活性。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制

真核生物DNA復(fù)制是在DNApolα和DNApolδ協(xié)同作用下進(jìn)行的，前導(dǎo)鏈的合成靠DNApolδ催化，并且還需要一種細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子參與。而隨從鏈的合成靠DNApolα和引發(fā)酶配合作用完成。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制第三節(jié)-2DNA-復(fù)制圖5-21真核生物DNA復(fù)制叉結(jié)構(gòu)示意圖第三節(jié)-2DNA-復(fù)制第三節(jié)-2DNA-復(fù)制（1）與原核生物不同，真核生物DNA復(fù)制有許多起始點(diǎn)（圖5-19），例如酵母的17號染色體約有400個起始點(diǎn)，因此，雖然真核生物DNA復(fù)制的速度(60核苷酸/每秒鐘)比原核生物DNA復(fù)制的速度(E.coli1700核苷酸/每秒鐘)慢得多，但復(fù)制完全部基因組DNA也只要幾分鐘的時間。3、真核生物DNA復(fù)制的特點(diǎn)第三節(jié)-2DNA-復(fù)制（2）在真核生物DNA復(fù)制叉處，需要兩種不同的酶。DNA聚合酶α(polα)和DNA聚合酶δ(polδ)。polα和引物酶緊密結(jié)合，在DNA模板上先合成RNA引物，再由polα延長DNA鏈，這種活性還要復(fù)制因子C參與。同時結(jié)合在引物模板上的PCNA，此時釋放了polα，然后由polδ結(jié)合到生長鏈3′末端，并與PCNA結(jié)合，繼續(xù)合成前導(dǎo)鏈。而隨從鏈的合成靠polα緊密與引物酶結(jié)合并在復(fù)制因子C幫助下，合成岡崎片段(圖5-20和圖5-21)。

第三節(jié)-2DNA-復(fù)制（3）由于真核生物染色體是線性DNA，它的兩端叫做端區(qū)，端區(qū)是由重復(fù)的寡核苷酸序列構(gòu)成的。前面講到所有生物DNA聚合酶都只能催化DNA從5′→3′的方向合成，因此當(dāng)復(fù)制叉到達(dá)線性染色體末端時，前導(dǎo)鏈可以連續(xù)合成到頭，而由于隨從鏈?zhǔn)且砸环N不連續(xù)的形式合成岡崎片段，所以不能完成線性染色體末端的復(fù)制。

第三節(jié)-2DNA-復(fù)制

端粒是真核染色體的末端序列。端粒的生物學(xué)功能是保持染色體的穩(wěn)定，它決定著細(xì)胞的壽命。線型DNA復(fù)制長期來存在的一個問題就是它的末端是如何復(fù)制的。DNA的復(fù)制需耍RNA引物，而引物隨后被降解，其結(jié)果就使子代DNA的5’端逐步縮短，端粒DNA的結(jié)構(gòu)及其復(fù)制的闡明為解決這一問題奠定了基礎(chǔ)。（2）端粒DNA的結(jié)構(gòu)-四鏈DNA第三節(jié)-2DNA-復(fù)制

研究表明，端粒DNA序列和結(jié)構(gòu)非常保守，它主要是由一段十分簡單和串聯(lián)重復(fù)的序列組成。例如，人和其它脊椎動物等的端粒重復(fù)單位為AGGGTT，纖毛原生動物四膜蟲的重復(fù)單位GGGGTT和GGGGTTTT，面包酵母等的重復(fù)單位為G1~3T和G1~8T。他們的共同特點(diǎn)是富含G，它們的長度可達(dá)幾百到幾千堿基對。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制

端粒DNA的序列具有一定的取向特征。在每一染色體末端，富含G的一股鏈由5’向3’-末端延伸，并突出于互補(bǔ)的富含C一股鏈12～16核苷酸（下圖）。染色體的末端與特定的蛋白質(zhì)形成復(fù)合物。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制第三節(jié)-2DNA-復(fù)制

現(xiàn)已證實(shí)，端?；蝾愃贫肆５墓丫酆塑账嵩趯?shí)驗(yàn)室條件下能形成多種G-G堿基配對形式。例如，短的如端粒DNA3’-末端那樣的12～16bp突出序列線夠形成回折結(jié)構(gòu)（下圖a和b），它們可能是通過堿基間的非標(biāo)準(zhǔn)配對形成的。較長的富含G的序列可能形成G的四鏈DNA（下圖c和d）。在這樣的結(jié)構(gòu)中，G形成一種四聯(lián)體，相互間通過Hoogsteen方式結(jié)合，并為K+或Na+所穩(wěn)定。第三節(jié)-2DNA-復(fù)制端粒：是一段DNA序列和蛋白質(zhì)形成的復(fù)合體，由多個串聯(lián)在一起的短寡核苷酸序列組成端粒的功能：保證線性DNA的完整復(fù)制保護(hù)染色體末端不受核酸酶水解和不發(fā)生染色體的異常重組端粒DNA合成端粒酶是反轉(zhuǎn)錄酶，由蛋白質(zhì)和RNA兩部分組成，以自身的RNA為模板，隨從鏈模板DNA的3`OH末段延長DNA在以這種延長的DNA為模板，繼續(xù)合成隨從鏈形成端粒結(jié)構(gòu)第三節(jié)-2DNA-復(fù)制反轉(zhuǎn)錄酶：以dNTP為底物，以RNA為模板，在3`OH末端上，按5`3`方向，合成一條與RNA模板互補(bǔ)的單鏈，稱為cDNA。它與RNA模板形成RNA-DNA雜交體，隨后又在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，水解掉RNA鏈，再以cDNA為模板合成第二條DNA鏈第三節(jié)-2DNA-復(fù)制反轉(zhuǎn)錄酶的意義：工具酶，提取mRNA為模版，合成cDNA，構(gòu)建cDNA文庫，從中篩選特異的目的基因第三節(jié)-2DNA-復(fù)制E.coli

酵母功能

DnaAORC起始蛋白

DnaBM